眼镜蛇毒组分C对小鼠实验性肝癌细胞生长影响的探讨

ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠腹水型肝癌细胞与眼镜蛇毒组分Ｃ在无菌条件下混合后接种于昆明种小鼠右前肢腋下,在２５℃条件下饲养１２天。结果表明,组分Ｃ能明显抑制小鼠肝癌细胞的生长（ＩＣ５０为５９．０８μｇ／ｍｌ）,当肝癌细胞膜被人为造成损伤时,组分Ｃ对其生长的抑制作用则显著增强（ＩＣ５０为６．７２μｇ／ｍｌ）。此外,组分Ｃ能显著延长荷瘤小鼠的生存时间。对体外培养的小鼠肝癌细胞,组分Ｃ也具有很强的杀伤作用,且这种杀伤作用受组分Ｃ的浓度、组分Ｃ与肝癌细胞孵育的时间及孵育的温度的影响。病理组织检查发现,给组分Ｃ后,镜下可见肝癌细胞生长受到明显抑制,肝癌细胞未向皮肤及附件浸润。表明组分Ｃ对肝癌细胞生长具有较强的抑制作用     

眼镜蛇毒抗炎成分研究概况

<正>蛇毒是一种天然的生物学资源,是由蛇毒腺分泌的混合物,主要用于防卫和消化捕获的食物。蛇毒具有特殊的腥味,弱酸,其中含有多种生物活性物质,属于生物毒素。主要含神经毒素、心脏毒素、蛇毒因子和神经生长因子等,不同蛇种分泌的蛇毒成分也有所差异。蛇毒含水量在70%左右,每100ml毒汁中可得干毒20~29g。蛇毒的干物质中90%以上是蛋白质,是其毒性和生物学活性的主要成分。祖国传统医学认为,眼镜蛇及其毒性成分可通经络,祛风湿,并具有强     

MTT法测定眼镜蛇毒细胞毒素的抗癌活性

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（Ｃｏｂｒａｖｅｎｏｍｃｙｔｏｔｏｘｉｎ,ＣＶ－ＣＴＸ）对体外培养的人癌细胞的杀伤作用。方法溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）比色法。结果ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＧＣ－７９０１,Ｂｅｌ－７４０２,Ｋ５６２和Ｕ９３７４种人癌细胞有很强的杀伤作用,量效关系明显,ＩＣ５０分别为４．１０,２．０８,０．２９和０．１７μｇ／ｍｌ。结论ＭＴＴ法检测ＣＶ－ＣＴＸ的抗癌活性,操作简便、快速和准确。     

眼镜蛇毒细胞毒素的抗肿瘤作用

目的　研究眼镜蛇毒细胞毒素（ Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ）的体内抗肿瘤作用。方法　小鼠皮下、腹腔接种 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ后, 于接种部位注射不同剂量的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ, 每天 １ 次, 连续１０ 天, 观察瘤重抑制率和生命延长率。结果　适当剂量（０２～０８ｍ ｇ／ｋｇ） 的 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 能明显抑制肿瘤的生长 （ Ｐ＜ ００１）,小鼠的存活时间明显延长（ Ｐ ＜ ００１）。结论　 Ｃ Ｖ Ｃ Ｔ Ｘ 在小鼠体内对 Ｓ１８０ 、 Ｅ Ａ Ｃ有明显地抗肿瘤作用。     

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定

目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。     

眼镜蛇毒及其组分C对大鼠实验性肝癌抗癌作用的病理学研究

目的 观察眼镜蛇毒及其组分Ｃ抗小鼠肝癌的病理学改变。方法 采用不同剂量眼镜蛇毒及其抗癌活性组分Ｃ与ＢＡＬＡ／ｃ小鼠腹水型肝癌细胞体外孵育,空白对照组用生理盐水与肝癌细胞孵育,然后取孵育液接种于小鼠前肢腋下,接种后第１０ｄ坏死,解剖取出瘤结,进行病理组织学研究。     

眼镜蛇毒及其组分C对小鼠实验性肝癌抗癌作用的病理学研究

目的　观察眼镜蛇毒及其组分 Ｃ 抗小鼠肝癌的病理学改变。 方法　采用不同剂量眼镜蛇毒及其抗癌活性组分 Ｃ 与 Ｂ Ａ Ｌ Ａ／ｃ 小鼠腹水型肝癌细胞体外孵育, 空白对照组用生理盐水与肝癌细胞孵育, 然后取孵育液接种于小鼠前肢腋下, 接种后第 １０ｄ 处死, 解剖取出瘤结, 进行病理组织学研究。 结果　空白对照组瘤结较大, 显微镜下见瘤细胞生长活跃、核大、核仁明显、核分裂多见, 而坏死灶少见, 且瘤细胞向周围浸润扩散; 治疗组瘤体较小, 瘤细胞固缩、核仁不明显、核分裂少见, 而坏死灶多见, 瘤细胞周围有纤维组织增生围绕, 限制了瘤细胞向周围蔓延浸润。 结论　眼镜蛇毒及其组分 Ｃ 对小鼠实验性肝癌的体外抗癌作用是明显的, 不同剂量及不同孵育时间的抗癌作用亦显著不同, 其中组分 Ｃ 对抗癌作用最强。     

抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究

目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。     

乙醇对中华眼镜蛇毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对眼镜蛇毒毒性的影响。方法将眼镜蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,分别于小白鼠皮下注射、口服,将致死量蛇毒皮下注射后的小白鼠立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果小白鼠经皮下注射致死量眼镜蛇毒后,在局部注射50％（或异蛇米酒）、75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用;口服100倍皮下注射致死量眼镜蛇毒未发现有毒性表现,口服经50％乙醇处理后的眼镜蛇毒（100倍皮下注射致死量）未增加小鼠死亡率。结论眼镜蛇毒体外经过乙醇处理后毒性有所下降。口服少量的眼镜蛇毒是安全的。眼镜蛇毒与乙醇混合后口服未见蛇毒毒性增加。     

不同培养基对酒酒球菌SD-2a存活率及膜脂肪酸组分的影响

[目的] 为获得高效的葡萄酒乳酸菌发酵剂,本文研究了3种具有不同pH缓冲能力的培养基对酒酒球菌接种存活率、冻干存活率及细胞膜脂肪酸组分的影响.[方法]采用平板计数法测定菌体的接种存活率、冻干存活率;并采用GC/MS色谱方法测定收获菌体细胞膜脂肪酸组分.[结果]实验结果表明,没有添加苹果酸的ATB培养基,其pH缓冲能力弱.分别与FMATB和MATB培养基相比,ATB培养基培养获得的菌体,其接种模拟酒培养基后的存活率提高了20.3%和40.2%,其冷冻干燥存活率提高了48.5%和68.3%,其细胞膜中C19cyc11的相对含量提高了10.0%和36.8%,其细胞膜U/S值提高了20.4%和45.2%.[结论]本文推测ATB培养基培养所得菌体,由于自我酸胁迫反应,增强了其对葡萄酒胁迫因素及冷冻干燥的抗性,而该反应与菌体细胞膜脂肪酸组分的变化密切相关.故ATB培养基更适合于酒酒球菌SD-2a发酵剂的制备.     

眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子的纯化及理化性质的研究

经Heparin-SepharoseCL-6B亲和层析和SephadexG-150分子筛层析,从中国眼镜蛇毒(Najanajaatra)中纯化出一种可水解纤维蛋白原Aα链的蛋白酶——组分F.SDS-PAGE测得分子量为47100,为一含2%中性己糖的单肽链糖蛋白;它对纤维蛋白、酪蛋白和苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)均无水解作用,也无激活纤溶酶原的作用;100μg皮下或皮内注射,未见出血反应。组分F对酸和热均不稳定。EDTA,EGTA,PMSF和肝素等可抑制其纤维蛋白原溶解活性,benzami-dine,aprotinin和大豆胰蛋白酶抑制因子(SBTI)则无抑制作用。     

眼镜蛇毒中降压因子的提取及其降血压作用的研究

目的：从广西眼镜蛇蛇毒中分离纯化血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor,ACEI),命名为降压因子（Hypotensive Factor,HF）,并测定其生物活性。方法：采用Sephacryl S-100凝胶过滤,CM Sepharose F.F.离子交换层析分离纯化HF,高效液相鉴定纯度,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定其分子量,紫外分光光度法测定HF对血管紧张素转换酶（ACE）的抑制活性。用离体兔子十二指肠平滑肌测定HF增强缓激肽(Bradykinin,BK)的效应。结果：纯化的广西眼镜蛇蛇毒HF经SDS-PAGE检测显示单一条带,测得其相对分子量约为8.2kD,由十二种氨基酸组成,蛋白回收率为5.70%。HF对ACE有明显的抑制作用,其抑制作用与剂量呈正相关。IC50为1.02?g/ml。HF能增强BK对离体兔子十二指肠平滑肌的收缩效应。结论：本方法成功地从广西眼镜蛇蛇毒中纯化出降血压成分。该成分与血管紧张素转换酶抑制剂作用相似,对血管紧张素转换酶有明显的抑制作用。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠延髓中的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠延髓外侧网状核c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组(P＜0.01).结论 眼镜蛇毒对大鼠延髓c-fos表达有上调作用.     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓乙酰胆碱酯酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠腰髓乙酰胆碱酯酶（AchE）表达的影响。方法 将蛇毒注射到大鼠左小腿下部,采用亚铁氰化铜法示AchE,观察大鼠腰髓前角AchE阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠AchE阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对腰髓的AchE阳性神经元表达有上调作用。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓某些核团一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法 采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)方法,观察大鼠延髓某些核团NOS阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组的变化。结果 蛇毒组大鼠延髓的中缝大核,外侧网状核NOS阳性神经元比对照组表达增强。结论 眼镜蛇毒对延髓的NOS阳性神经元表达有上调作用。     

眼镜蛇毒对大鼠脑桥某些核团一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠脑桥某些核团一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元表达的影响.方法采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADPH-d)方法,观察大鼠脑桥某些核团NOS阳性神经元在眼镜蛇毒中毒组、生理盐水组、正常对照组之间的变化.结果蛇毒组大鼠脑桥的三叉神经运动核,面神经核NOS阳性神经元比生理盐水组、正常对照组表达增强.结论眼镜蛇毒对脑桥的某些核团的NOS阳性神经元表达有上调作用.     

眼镜蛇毒对大鼠脑桥前庭神经核nNOS表达的影响

目的 观察眼镜蛇毒对大鼠脑干神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨其对前庭神经核的作用.方法 采用免疫组织化学方法,观察nNOS阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠前庭神经核中的表达,并对其作比较.结果 蛇毒组前庭神经核nNOS表达与正常对照组、生理盐水组比较有明显下调(P＜0.01);蛇毒组前庭神经核nNOS阳性细胞灰度值与正常对照组、生理盐水组比较明显增高(P＜0.01),蛇毒对前庭神经核nNOS阳性细胞形态影响不明显.结论 眼镜蛇毒对前庭神经核nNOS表达呈下调作用.     

眼镜蛇毒中一个弱纤维蛋白原水解活性金属蛋白酶的纯化和性质研究

通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH 9.6和中性糖含量为4.16%的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA, EGTA,1,10 phenanthroline和还原剂DTT完全抑制,而PMSF只能部分抑制该活性,大豆胰蛋白酶抑制剂对其没有影响, 表明atrase A属于金属蛋白酶. Atrase A具有水肿活性和金黄色葡萄球菌抑制活性.它对A549 和K562 细胞没有细胞毒性,但能使贴壁生长的A549细胞解离悬浮. Atrase A没有纤维蛋白、azocasein 、BAEE水解活性,对ADP、胶原诱导的血小板聚集没有明确的抑制作用. 经小鼠皮下注射后没有发现其有出血毒活性.     

眼镜蛇毒对大鼠弓状核nNOS表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠弓状核神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)表达的影响。方法采用免疫组织化学方法分别显示眼镜蛇毒组、生理盐水组和正常对照组弓状核的nNOS表达。结果与生理盐水组和正常对照组相比,眼镜蛇毒组弓状核nNOS阳性神经元数量明显减少,细胞平均灰度值明显升高(P0.05)。结论眼镜蛇毒能够使大鼠弓状核nNOS表达降低。