包涵体蛋白复性的几种方法

外源基因在大肠杆菌中高水平表达时,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠,才能够得到生物活性蛋白。     

切胶纯化表达蛋白包涵体的可行性分析

目的:高效率地纯化以包涵体形式表达的蛋白。方法:将SDS-PAGE电泳后的目的蛋白用4mol/L的乙酸钠显现出来,切割下来的目的蛋白可直接用于免疫,将切割下来的目的蛋白装在透析袋中,在电场中将游离的目的蛋白洗脱下来可用于ELISA检测。结果:用该法得到的蛋白经ELISA和Western blot检测均能保持其原有的抗原性,并用该法纯化的蛋白成功制备了相应的多抗和单抗。结论:证实了回收的蛋白仍能保留原有的抗原性,与传统的方法比较,方法简单且比较经济实用特别是包涵体,为切胶纯化蛋白提供了一个新的方法。     

斑节对虾杆状病毒包涵体研究

利用显微图像分析技术,对斑节对虾肝胰腺正常细胞胞核和斑节对虾杆状病毒(MBV)感染细胞胞核横切面的直径、周长和面积进行了测量分析.结果表明:正常细胞胞核的直径为3.47±0.30μm、周长为13.03±1.36μm、面积为10.87±1.78μm²;MBV感染细胞胞核的直径为3.81±0.79μm、周长为14.00±2.87μm、面积为13.52±5.37μm²;两者的直径、周长和面积均存在极显著的差异(P<0.01).对3种类型的包涵体进行了测量,其中1类包涵体最大,2类包涵体次之,3类包涵体最小,并以1类包涵体占大多数.     

基因工程表达蛋白包涵体的形成和纯化

基因工程表达蛋白包涵体的形成和纯化张庶民,祁自柏综述李河民审（中国药品生物制品检定所,北京１０００５０）在过去的几十年里,基因工程技术的引进给生命科学领域带来了一场革命。科学家们利用基因操作方法克隆出目的基因,然后将其组装入表达质粒,转染到宿主细胞中...     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑…

ＳＤＳ－ＰＡＧ电泳分析表明粘虫核型多角体病毒的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为３２ｋＤ的主带为多角体的主要结构多钛,经Ｓｅｐｈａｃｅｙｌ Ｓ－２０柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵全蛋白是一种疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现３２ｋＤ蛋白对Ｈｅｌａ,ＨＬＡＭＰ、ＨＩＣＡＭ等三种肿瘤细胞的生长有不同程序的抑制,用＾３Ｈ－ＴｄＲ标记核酸合成代谢的Ｈｅｌａ细胞的放射活性证实了这种观     

5个生姜品种的蛋白电泳指纹图谱研究

目的：研究5个生姜品种的鉴定。方法：利用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）指纹图谱分析、鉴别5个生姜品种。结果：5个样品的蛋白质PAGE指纹图谱具有一定差异。结论：PAGE指纹图谱可用于生姜品种鉴定与质量评价。     

粘虫核型多角体病毒包涵体蛋白的性质及其对几种肿瘤细胞生长的抑制作用

SDS-PAG电泳分析表明粘虫核型多角体病毒(Leucaia separata Nuclear Polyhedrosis Virus,简称LsNPV)的包涵体蛋白由几种多肽组成,其中分子量为32kD的主带为多角体的主要结构多肽。经Sephaceyl S-200柱层析纯化后分析了其氨基酸组成,证明此包涵体蛋白是一种以疏水氨基酸为主要组成的特异性蛋白。我们发现32kD蛋白对Hela、HLAMP、HICAM等三种肿瘤细胞的生长有不同程度的抑制,用~3H-TdR标记核酸合成代谢的Hela细胞的放射活性证实了这种观察。     

原核基因工程中的包涵体

包涵体是原核基因工程的特有产物,其中表达的蛋白产物是以无活性、不溶解的形式存在。包涵体特性、蛋白回收及活性恢复是生物工程研究的重要课题。文章对包涵体特性、回收及产物提取,重组蛋白的复性及纯化作了综述。     

包涵体蛋白体外复性的研究进展

外源基因在大肠杆菌中高水平表达时 ,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白 ,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠 ,才能够得到生物活性蛋白。近年来 ,发展了许多特异的策略和方法来从包涵体中复性重组蛋白。最近的进展包括固定化复性以及用一些低分子量的添加剂等来减少复性过程中蛋白质的聚集 ,提高活性蛋白的产率。     

临床常见葡萄球菌蛋白指纹图谱的建立

目的 建立临床常见三种葡萄球菌的蛋白指纹图谱,为其快速诊断奠定基础.方法 收集临床常见葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及溶血性葡萄球菌,利用16S rDNA测序技术对其进行鉴定;表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF MS)技术检测其蛋白表达,采用Ciphergen Protein chip软件自动采集数据.评价该检测方法的重复性及细菌蛋白表达的稳定性.结果 在分子量3000 ～20000 Da范围内,3种葡萄球菌有各自特异的蛋白指纹图谱;SELDI-TOF MS检测细菌蛋白的孔间重复性和芯片间重复性好,同一株细菌4次重复的蛋白指纹图谱相似;同种细菌不同株之间蛋白指纹图谱表达稳定,共有蛋白峰分子量变异系数≤0.5％.结论 在分子量3000 ～20000 Da范围内,各细菌蛋白指纹图谱差异明显,为细菌的快速鉴定提供了新方法.     

Fingerprinting of single viral genomes

We demonstrate the use of technology developed for optical mapping to acquire DNA fingerprints from single genomes for the purpose of discrimination and identification of bacteria and viruses. Single genome fingerprinting (SGF) provides not only the size but also the order of the restriction fragments, which adds another dimension to the information that can be used for discrimination. Analysis of single organisms may eliminate the need to culture cells and thereby significantly reduce analysis time. In addition, samples containing mixtures of several organisms can be analyzed. For analysis, cells are embedded in an agarose matrix, lysed, and processed to yield intact DNA. The DNA is then deposited on a derivatized glass substrate. The elongated genome is digested with a restriction enzyme and stained with the intercalating dye YOYO-1. DNA is then quantitatively imaged with a fluorescence microscope and the fragments are sized to an accuracy >or=90% by their fluorescence intensity and contour length. Single genome fingerprints were obtained from pure samples of adenovirus, from bacteriophages lambda and T4 GT7, and from a mixture of the three viral genomes. SGF will enable the fingerprinting of uncultured and unamplified samples and allow rapid identification of microorganisms with applications in forensics, medicine, public health, and environmental microbiology.     

糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的AFLP指纹图谱分析

在对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)的AFLP分析条件进行优化的基础上,利用该技术建立了14株产自不同地区的糙皮侧耳：DNA指纹图谱,并进行了数据分析。结果表明,在合成的14条引物的不同组合中,引物对E-3／M-3可以产生较多的DNA多态片段,E-AGC／M-CAT引物对的扩增效果最好,共获得184条DNA扩增带,其中多态性条带i101条,占54．89％。利用UPGMA法对所获数据进行聚类分析,计算得到糙皮侧耳菌株之间的遗传距离,发现不同品种间遗传距离差异较大,从0．192到0．754,说明糙皮侧耳的遗传多样性比较丰富。绘制的指纹分析树状图表明,14个糙皮侧耳菌株被分为6个组群,其中P17和杂3的相似性系数最高,达到了81．2％,而侧5与其他菌株的亲缘关系相对最远。     

斜纹刺蛾核型多角体病毒及其核酸的限制性内切酶酶解分析

本文描述了从自然罹死的斜纹刺蛾(Oxyplax orhracea(moore))幼虫中分离出一种核型多角体病毒。用快速简便方法提取核酸,经限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ酶解,获得该病毒核酸的酶解带谱。以λDNA的EcoRⅠ酸解片段在凝胶中的迁移率与相应DNA片段分子量的对数值做标准曲线求得其平均分子量为102.09×10~6道尔顿,即为147.77kb。     

部分两用桃品种(系)指纹图谱的建立

以近亲个体'顺10-16'、'青北10-7'和'贺春'为材料建立了两用桃AFLP研究体系,从64对引物组合中筛选出了E-AAT/M-ACT、E-AAT/M-CTG、E-ACA/M-CTG和E-ACA/M-CTT等4个多态性好、分辨率高的引物组合;应用该体系对'锦春'等23个两用桃品种(系)进行AFLP分析,结果共扩增出127条带,其中多态性带62条,多态性百分率48.8%,以其中特异性较高的23个多态性条带构建了这23个两用桃品系的指纹图谱,为两用桃品种鉴定及保护奠定了基础.     

杨树重要品种( 无性系) 的AFLP 指纹分析

品种的准确鉴定及其遗传相关性的了解对杨树育种和品种管理具有非常重要的意义。本试验采用AFLP对来自青杨组和黑杨组的21 个重要杨树品种( 无性系) 的鉴定与遗传相关性进行了研究。结果显示, 筛选的4对AFLP 引物总共产生了181 条多态性带,尤其是每对引物对每个品种都产生了独特的指纹图谱; 聚类分析和多维尺度分析将试验材料大体上分为五类, 结果不仅显示了组间不同品种的差异, 而且大体上区分了我国原生品种和外来品种。本研究表明, 所有品种都可被筛选的引物准确鉴定, 遗传相关性的推断结果与它们的系谱或分类基本一致。另外, 本研究还表明AFLP 技术完全可用于大规模地构建杨树树种DNA 指纹图谱、进行树种鉴定和遗传相关性的研究。     

三倍体白杨杂种无性系指纹图谱的构建

目的:构建三倍体白杨杂种无性系指纹图谱,鉴定三倍体白杨杂种无性系。方法:分离纯化三倍体白杨杂种DNA模板,采用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术构建三倍体白杨杂种无性系指纹图谱。结果:从64对引物组合中筛选出M-CTA/E-CAG、M-CAC/E-CCA、M-ACT/E-CTC和M-CTT/E-CTG等4对多态性较高的引物组合,并应用该引物组合对21个三倍体白杨杂种无性系进行了AFLP分析,构建了21个三倍体白杨杂种无性系指纹图谱。结论:构建无性系指纹图谱是鉴别三倍体白杨杂种无性系的有效方法,能够有效鉴别21个三倍体白杨杂种无性系。本研究为品种鉴定及新品种权保护奠定了基础。     

胶质瘤中CT联合MR动态扫描的诊断价值及其表观弥散系数的定量研究

摘要 目的：探讨胶质瘤中电子计算机断层扫描（CT）联合核磁共振（MR）动态扫描的诊断价值及其表观弥散系数（ADC）定量价值,以促进胶质瘤的有效早期诊断。方法：2017年4月到2021年3月选择在本院进行诊治的颅内肿瘤患者68例作为研究对象,所有患者均给予CT联合MR动态扫描,记录ADC值并判断诊断价值。结果：在68例患者中,病理诊断为胶质瘤38例（胶质瘤组）,非胶质瘤30例（非胶质瘤组）。胶质瘤组的CT出血、水肿、跨中线、界限不清等特征与非胶质瘤组对比差异有统计学意义（P<0.05）。胶质瘤组多表现为T1WI低信号、T2WI高信号,非胶质瘤组多表现为T1WI等信号或低信号、T2WI高信号,对比差异有统计学意义（P<0.05）。胶质瘤组的MR ADCmax、ADCmedian、ADCmin都低于非胶质瘤组（P<0.05）。胶质瘤中CT联合MR动态扫描诊断为胶质瘤37例,非胶质瘤31例,CT联合MR动态扫描诊断胶质瘤的敏感性与特异性为97.4 %（37/38）和100.0 %（30/30）。结论：CT联合MR动态扫描诊断胶质瘤具有很好的敏感性与特异性,ADC值能有效反映病灶组织的病理特征,为临床上提供了一种较为安全、有效的胶质瘤影像检查方法。     

棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白聚集体特性及与其它包涵体蛋白的血清学关系

纯化的多角体碱解释放多角体蛋白,经等电点沉淀和柱层析对多角体蛋白进行分离纯化,结合SDS-PAGE、免疫双向扩散、免疫电镜等方法,证明棉铃虫核型多角体病毒(HaNPV)的多角体蛋白以聚集体形式存在。用ELISA法检测包涵体蛋白之间的血清学关系,结果表明,与黄地老虎颗粒体病毒(AsGV)和粘虫颗粒体病毒(PsGV)颗粒体蛋白相比较,HaNPV多角体蛋白与葡萄天蛾核型多角体病毒(ArNPV)和黄地老虎核型多角体病毒(AsNPV)多角体蛋白之间的血清学关系更为密切。     

Comparative Genome Map of Human and Cattle

Chromosomal homologies between individual human chromosomes and the bovine karyotype have been established by using a new approach termed Zoo-FISH. Labeled DNA libraries from flow-sorted human chromosomes were used as probes for fluorescence in situ hybridization on cattle chromosomes. All human DNA libraries, except the Y chromosome library, hybridized to one or more cattle chromosomes, identifying and delineating 50 segments of homology, most of them corresponding to the regions of homology as identified by the previous mapping of individual conserved loci. However, Zoo-FISH refines the comparative maps constructed by molecular gene mapping of individual loci by providing information on the boundaries of conserved regions in the absence of obvious cytogenetic homologies of human and bovine chromosomes. It allows study of karyotypic evolution and opens new avenues for genomic analysis by facilitating the extrapolation of results from the human genome initiative.     

应用SRAP标记绘制88份南瓜属种质资源DNA指纹图谱

为了给南瓜属种质资源鉴定和分类提供分子生物学依据,本研究采用SRAP分子标记技术与DNAMAN指纹图谱绘制软件对88份南瓜属种质资源(包含美洲南瓜、中国南瓜、印度南瓜)进行分子指纹图谱绘制。结果表明:35对SRAP多态性引物共扩增出499条清晰条带,其中多态性条带438条,多态性条带比率高达87.8%。根据扩增出的条带成功绘制出88份南瓜属种质资源的DNA指纹图谱,每一份种质都具有其独特的分子身份证,使得每份种质均可被区别开来。其中,多态性最好的引物是E5EM8,可以同时绘制72份南瓜属种质资源的指纹图谱。所有供试材料用5对多态性SRAP引物即可全部区别开来。研究表明,SRAP分子标记技术可成功地绘制南瓜属种质资源DNA指纹图谱。本研究对南瓜属种质资源鉴别、分子数据库构建及品种权保护具有较重要的意义。