抗体制备技术的研究进展

自从第一个单克隆抗体产生以来,单抗已广泛地应用于疾病的诊治上。为了克服传统的鼠源性单抗存在的弊端,随着分子生物学和细胞生物学的快速发展,单克隆抗体的制备技术取得了比较大的进展,包括对鼠源性单抗的改造,人源性单抗的研制及对抗体分子结构和功能的改造,尤其是以噬菌体抗体库技术,核糖体展示技术和转基因／转染色体小鼠技术为代表的人源性单抗制备技术的研制最为瞩目。本文就单克隆抗体制备技术的研究进展做一综述。     

治疗用单抗制剂的研究进展

杂交瘤技术建立 2 0多年来 ,单抗走过了漫长而又曲折的历程 ,从最初的完全鼠源单抗 ,经含不同程度鼠源成份的人鼠嵌合单抗、人源化单抗 ,现已发展为完全人源单抗。抗体的人源化技术和噬菌体展示技术等技术的发展 ,使单抗从诊断工具变为有效的治疗药物 ,被人们誉为“生物魔弹”。鉴于单克隆抗体 (单抗 )对相应的抗原决定簇具有高度特异性以及抗体的均一性等特性 ,近2 0多年来单抗作为疾病诊断剂以及生物学研究试剂已得到广泛的应用 ,但作为治疗剂的应用进程则十分缓慢。近两年来 ,单抗作为治疗制品 ,获得了迅速的进展。     

治疗性单克隆抗体研究进展

杂交瘤技术使鼠源单克隆抗体（鼠单抗）被广泛用于人类疾病的诊断和研究,建立了治疗性抗体的第一个里程碑。但随后出现的人抗鼠抗体等副作用极大地限制了鼠单抗的临床应用。随着生物学技术的发展和抗体基因结构的阐明,应用DNA重组技术和抗体库技术对鼠单抗进行人源化改造,先后出现了嵌合抗体、改型抗体和全人抗体,同时也涌现了各种单抗衍生物,它们从不同角度克服了鼠单抗临床应用的不足,未人类疾病治疗带来新的曙光。我们就上述治疗性抗体人源化的研究进展做简要综述。     

治疗用单抗制剂的研究进展

杂交瘤技术建立20多年来,单抗走过了漫长而又曲折的历程,从最初的完全鼠源单抗,经含不同程度鼠源成份的人鼠嵌合单抗,人源化单抗,现已发展为完全人源单抗,抗体的人源化技术和噬菌体展示技术等技术的发展,使单抗从诊断工具变为有效的治疗药物,被人们誉为“生物魔弹”,鉴于单克隆抗体（单抗）对相应的抗原决定簇具有高度特异性以及抗体的均一性等特性,近20多年来单抗作为疾病诊断剂以及生物学研究试剂已得到广泛的应用,但作为治疗剂的应用进程则十分缓慢,近两年来,单抗作为治疗制品,获得了迅速的进展。     

人源性抗出血热单克隆抗体重链可变区基因克隆及其序列测定

单克隆抗体已广泛应用于医学生物学的各个领域。但目前使用的单克隆抗体多为鼠源性,在临床应用中常使患者产生抗异种蛋白的免疫反应。人源性单抗用于临床比鼠源性优越,但其制备尚有许多难题,其杂交瘤细胞不稳定、抗体产量低、多为IgM,难以达到临床的应用。我们前已报道了成功地获得能分泌人源性     

人源抗狂犬病毒中和性全抗体在昆虫细胞中的表达

将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特异性单抗G10Fab的基因 ,克隆入杆状病毒人源IgG抗体表达载体 ,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞 ,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体G10。用亲和层析的方法纯化了表达产物 ,经与一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实 ,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白 ,亲和力约为 10 -9M。体外中和实验证明 ,该单抗对狂犬病毒aG株具有体外中和活性     

抗体药物的发展与应用

早期抗体药物是鼠源单克隆抗体,存在免疫原性强、半衰期短等问题。历经数十年的发展,抗体药物从最初的鼠源单抗,逐步发展为人鼠嵌合抗体、人源化抗体及全人源化抗体。通过片段重组、位点修饰、药物偶联等方法,科研人员研发了包括抗体融合蛋白、抗体偶联药物、双特异性抗体、小分子抗体片段等形式多样的抗体药物。抗体药物在恶性肿瘤、自身免疫病、感染性疾病的治疗上发挥重要作用。通过对抗体药物人源化历程,不同类型的抗体结构和特点,以及抗体药物在新型冠状病毒肺炎治疗中的应用进行综述,并对抗体药物的发展前景进行展望,以期为我国抗体药物的研发提供参考。     

人源抗狂犬病毒中和性全抗体在昆明细胞中的表达

将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特性异特单抗G10Fab基因的,克隆入杆状病毒人源IgG抗体表达载体,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体R10。用亲和层析的方法纯化了表达产物,经过一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白,亲和力约为10^-9M.体外中和实验证明,该单抗对狂犬病毒aG株具有体外中和活性。     

抗乙型脑炎病毒人源化单链抗体的构建及其表达

单克隆抗体以其特异性强、均～性好的特点在疾病治疗中已显示了良好的应用前景,但由f目前所用单抗多为鼠源性抗体,进行治疗时,由f多次使用或多剂量使用,会刺激人体产生抗鼠抗体（HAMA）的排斥反应,这不仅减弱了单抗的治疗效果,而且还会使人体产生其它副反应,从而阻碍了单抗治疗的进程。抗体工程技术的发展,使人们可以利用分子生物学手段对抗体进行人源化改造,这不仅降低了抗体中的鼠源成份,可以使鼠源抗体的免疫原性减弱,有利于抗体的临床应用。本文利用表面重塑法对抗乙脑抗体可变区基因进行了人源化改造。1材料与方法工．三…     

人源抗狂犬病毒单克隆抗体Fab段基因的获得和表达

运用噬菌体表面呈现（phage display）技术获得了人源抗狂犬病毒糖蛋白基因工程单克隆抗体Fab段基因及其表达。从狂犬病毒PM株Vero细胞疫苗免疫的人抗凝血中分离获得外周淋巴细胞,提取细胞总RNA,通过RTPCR方法,用一组人IgG Fab基因4特异性引物,从合成的cDNA中扩增了一组轻链和重链Fab段基因,将轻链和重链Fab段基因,将轻链和重链先后克隆入噬菌体载体pComb3,成功地建立了抗狂犬病毒抗原的方法,对此抗体库进行富积筛选表达,成功地获得了抗狂犬病毒的人源单抗Fab段基因及其在大肠杆菌中的有效表达,对其中一株单抗G10进行了较为系统的分析,发现它与一株鼠源中和性狂犬病毒糖蛋白特异性单抗存在竞争,证实该单抗能识别狂犬病毒糖蛋白,其序列资料分析表明,该单抗为一株新的抗狂犬病毒人源基因工程抗体。     

人源化抗体研究历程及发展趋势

单克隆抗体从问世到目前广泛应用于临床,经历了一段曲折的发展历程。其中人源化抗体是一个重要的里程碑,并伴随着一系列重大的技术革新,如PCR技术、抗体库技术、转基因动物等。人源化抗体的形式也从最初的嵌合抗体、改型抗体等逐步发展为今天的人抗体。抗体人源化已经成为治疗性抗体的发展趋势,同时各种抗体衍生物也不断涌现,它们从不同角度克服抗体本身的应用局限,也为治疗人类疾病提供了更多利器。对单克隆抗体进行改造使之应用于临床治疗,不仅需要对抗体效应机制进行更细致深入的研究,同时还有赖于对人类免疫系统调控机制的全面精确认识。     

单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展

骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

抗HEV嵌合抗体的构建及在CHO细胞中的表达

通过RT-PCR方法从分泌戊型肝炎(戊肝)病毒中和性鼠源单克隆抗体(单抗)8C11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(VK)序列,并分别克隆到含有人gamma 1重链和kappa轻链恒定区序列的pcDNA3.1/Hygro和pcDNA3.1( )质粒中,共转染中华仓鼠卵巢癌细胞(CHO)细胞.RT-PCR结果表明,转染的CHO细胞转录了嵌合重链及轻链基因,间接ELISA及Western blot结果表明:翻译出的两种多肽在细胞内正确组装成嵌合抗体分子,并可分泌至细胞外,表达的嵌合抗体保留了原鼠单抗的抗原结合特异性及对8H3结合抗原的增强作用.8C11嵌合抗体的成功表达可降低鼠源性,为探讨戊肝抗体治疗的可能性奠定了基础.     

人B细胞永生化研究进展

人源单克隆抗体具有免疫原性低、半衰期长等优势,成为了体内应用中不可或缺的生物制剂.人类抗体库为人源单克隆抗体的制备提供了丰富的来源,人B细胞永生化是获得人类抗体库的潜在有效方法,可应用于人源单克隆抗体的制备.由于各平台均有亟待解决的问题,基于人B细胞永生化的抗体制备尚局限在实验室研究阶段,且目前尚缺乏一篇系统综述以明确...     

抗人肝素酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的:肝素酶在白细胞游走和恶性肿瘤转移的过程中发挥重要作用,肝素酶抗体的制备对于自身免疫病和肿瘤的良恶性鉴别诊断具有重要意义。制备抗人肝素酶单克隆抗体,用于肝素酶的研究及临床恶性肿瘤的鉴别诊断。方法:通过杂交瘤技术将分泌抗人肝素酶单抗的小鼠B细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,获得稳定分泌抗人肝素酶单抗的杂交瘤细胞;用有限稀释法获得单克隆,以重组人肝素酶及含肝素酶的血小板裂解液对抗体进行Western印迹检测。结果:Western印迹结果显示制备的单抗与人肝素酶具有特异性免疫识别特性。结论:获得了能够特异性免疫识别人肝素酶的分泌性抗人肝素酶单克隆抗体。     

重组抗体药物的研究进展

重组抗体药物发展历程为:鼠源单克隆抗体——人—鼠嵌合抗体——人源化抗体——全人抗体。抗体药物基因工程改造遵循了降低抗体的免疫原性以及保持和提高抗体的亲和力这两个原则。本文就当前重组抗体药物的主要问题、基本情况以及解决办法加以阐述。     

产生人抗体的转染色体动物研究进展

现已证明,应用抗体治疗疾病是一种非常成功的方法。单克隆抗体的生产使免疫治疗达到一个新水平,但鼠源单抗在治疗人体疾病方面有很多问题,而人源化抗体可以解决这些问题。目前抗体人源化已由鼠嵌合抗体发展到了转基因动物表达完全人抗体阶段,而人类人工染色体(HAC)载体的发展和微细胞介导的转染色体技术使得产生携带人类免疫球蛋白基因位点的转染色体动物成为可能。通过HAC将人的免疫球蛋白基因转入后,这类转染色体动物可以产生大量人源化多克隆抗体,这对预防及治疗疾病,甚至防御生物武器都有很重要的作用。转染色体技术可以使动物携带大而复杂的人类基因或基因簇,这些转基因动物有助于研究人类基因组在体内的功能作用,并用于各种疾病研究和生产药物蛋白。     

人源化YKL-40中和抗体（Rosazumab） 体外阻断血管再生

摘要 目的：血管再生是实体肿瘤的生长和恶性转移的一个必须病理过程,阻断这一过程能够有效阻止恶性肿瘤的发生发展。YKL-40是血管再生因子,能刺激肿瘤的血管再生。本文探讨了一个原创性人源化抗YKL-40单克隆抗体（Rosazumab, 命名为洛沙单抗）阻断YKL-40血管生成的体外功能。方法：Western Blot检测洛沙单抗对分泌和重组YKL-40蛋白的特异性结合;Western Blot及考马斯亮蓝染色检测该抗体的抗体特异性和纯度;Live/Dead染色试验检测抗体的细胞毒性。以人微血管内皮细胞（Human microvascular endothelial cells, HMVECs）为研究对象,引入重组YKL-40蛋白或脑胶质瘤细胞（Glioblastoma serum-differentiated cells, GSDCs）的条件培养基进行培养。Transwell试验检测该抗体对HMVECs迁移力的影响,并用Matrigel试验检测对微管形成的作用。结果：洛沙单抗可特异性结合YKL-40,考马斯亮蓝染色进一步证明其纯度及特异性。体外血管再生试验包括细胞迁移力和微管形成证明该抗体可以有效中和重组YKL-40蛋白及肿瘤细胞条件培养基中的YKL-40,抑制HMVECs的迁移和血管形成。结论：洛沙单抗是首创的人源化中和YKL-40的抗体,其特异性高,细胞毒性低,能显著抑制YKL-40血管再生功能,为下一步体内试验奠定基础。本研究可为YKL-40诱导的肿瘤血管生成及恶性肿瘤转移提供一种新的治疗手段。     

人源化单克隆抗体研究进展

尽管通过几种展示文库和转基因小鼠已经可以制备人源单克隆抗体,但是人源化鼠源单克隆抗体使之用于人体治疗仍为抗体研究领域的热点。本文总结了单克隆抗体人源化的几种方法,并对其将来的发展进行了展望。