人胃癌组织cDNA文库的建立

本文直接从一例人低分化胃腺癌组织中提取RNA和分离poly(A)~+RNA,进而合成双链cDNA。再以λgt10作为克隆载体和大肠杆菌C600hfl作为受体菌,构建了人胃癌cDNA文库。该文库中含有1.10×10~5重组子,重组率约为68.8％,克隆效率为2.21×10~6克隆/μgcDNA。     

猪胰脏细胞cDNA文库的构建

 本文以新鲜猪胰脏为材料,采用异硫氰酸胍法和寡聚(dT)-纤维素亲和层析法,提取了Poly(A)~+RNA,经麦胚无细胞体系鉴定其体外翻译活性,~3H-Leu参入量为空白对照的5倍。参照Gubler和Hoffman等人的方法,以此poly(A~+)RNA为模板,合成总cDNA,并采用多聚物加尾法,与pUC19质粒重组,转化入感受态E.coliJM107,进行分子克隆,其转化率为3.6×10~4克隆子/μgcDNA。并对重组质粒DNA进行了酶切鉴定。     

人肺腺癌细胞系cDNA文库的建立

本文以Uni-ZAP XR为载体,成功地建立了人肺腺癌高、低转移细胞系的cDNA文库。文中同时也探讨了总RNA的提取和mRNA的分离,cDNA的第一条链及第二条链的合成及克隆到载体等在建立cDNA文库过程中,几个关键性的问题。该项工作的完成,为下一步在这两株细胞系cDNA之间进行消减式杂交,筛选转移相关基因奠定了坚实基础。     

水稻精细胞cDNA文库的构建及分析

利用Percoll密度梯度离心和多次滤膜过滤分离到适于分子生物学研究的水稻 (OryzasativaL .cv .Guichao2 )生活精细胞。借助RT_PCR和SMART技术构建了水稻精细胞的cDNA文库。初级文库的大小为 1.5 8× 10 6 pfu ,插入片段平均大小为 980bp。 10 3个随机挑选的克隆与DIG标记的水稻幼苗根、叶及二细胞时期花粉、成熟花粉、精细胞和授粉 5～ 7d的子房cDNA探针杂交表明 ,除少数克隆外 ,它们在上述器官中的表达情况很相似。 10个随机挑选的克隆用来测序及分析 ,有 4个克隆含有完整的开放阅读框。 1个克隆与水稻Polyubiquitin (Rubq1)mRNA高度同源。Northern杂交表明它在二细胞时期花粉、成熟花粉中的表达显著少于在根、叶和授粉子房中的表达。另一个克隆的开放阅读框编码与拟南芥 (Arabidopsisthaliana (L .)Heynh .)AtRAD17同源的蛋白。这是第一次正式报道高等植物精细胞cDNA文库的构建 ,也是第一次从高等植物精细胞中分离到其表达的基因。     

家蝇cDNA文库的构建

自Ｂｏｍａｎ小组 (Ｓｔｅｉｎｅｒ ,1981)从惜古比天蚕(Ｈｙａｌｏｐｈｏｒａｃｅｃｒｏｐｉａ)中分离、纯化出第一种抗菌肽天蚕素以来 ,人们已在昆虫和其他无脊椎动物中发现了 170多种抗菌肽 (Ｌｏｗｅｎｂｅｒｇｅｒｅｔａｌ ,1999)。目前 ,人们不仅搞清楚了多数抗菌肽的氨基酸序列、结构和功能特点 ,而且还对一些抗菌肽的基因进行了克隆 (陈留存和王金星 ,1999)。我们以家蝇为材料 ,分离、纯化出了抗菌肽 ,在此基础上 ,构建了经过诱导的家蝇ｃＤＮＡ文库 ,以克隆其基因。1　材料和方法1 1　实验材料家蝇 (Ｍｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａ)…     

SPF鸡肝脏细胞cDNA文库的构建及鉴定

旨在构建SPF鸡肝脏组织细胞的cDNA文库并且对文库质量进行鉴定。用TRIzol方法从SPF鸡肝脏组织细胞中提取总RNA,用紫外分光光度仪测定其含量后,应用SMART技术经过LD-PCR合成双链cDNA。利用CHROMA SPIN-400纯化柱纯化得到双链cDNA,并与线性pGADT7-Rec共转化进酵母Y187感受态,以同源重组的方式在酵母细胞内构建鸡肝脏酵母双杂交cDNA表达文库。结果显示,成功构建含有1.70×10~7个重组子的SPF鸡肝脏细胞cDNA文库,插入片段多数在0.4~2.0 kb之间,重组率达100%,重组子中平均插入的片段长度为1.0 kb,文库滴度为1.30×10~7 cfu/mL。结果表明,该文库达到了高质量文库所应具备的条件,为进一步筛选此文库与ARV相互作用的宿主蛋白以及研究其功能提供了数据依据。     

麋鹿血液cDNA文库的构建

为分离出MHCⅠ、Ⅱ基因,利用TRIzol 试剂从麋鹿血液组织中提取总RNA,经mRNA 纯化试剂盒纯化后,根据Stratagene 公司的cDNA 文库构建系统构建了麋鹿血液组织的cDNA 文库。初始文库滴度为1.96 ×106 pfu/ ml,总库容为1.96 ×106 个独立克隆;cDNA 插入片段平均长度约为1.0 kb;重组率为95.6 % 。文库各项指标均达标准经典cDNA 文库的基本要求。利用本实验室设计的可扩增MHCⅡ类DQA 基因第二外显子的引物检测扩增后的文库,得到了特异性非常好的目标条带,说明本文所建文库可以用于麋鹿MHC 相关基因的分离。     

菠萝果实cDNA文库的构建

以菠萝幼果为研究材料,采用Creator^TMSMART^TM cDNA Library Construction Kit技术构建菠萝幼果cDNA文库,其文库的库容量为1．01×10^6,重组率为92％,PCR检测表明大多数插入片段均大于1000bp。     

枸杞果实cDNA文库的构建

目的 :通过构建枸杞果实cDNA文库 ,分离类胡萝卜素合成酶基因。方法 :枸杞果实RNA的提取采用改进的异硫氰酸胍 -酚 -氯仿法 ,利用PolyATractmRNAIsolationSystem(Promega公司 )分离mRNA ,然后利用UniversalRibocloneRcDNASynthesisSys tem(Promega公司 )合成双链cDNA ,在cDNA末端连接上EcoRⅠ接头 ,并与λExCell载体连接 ,利用PackageneLambdaDNAPackagingSystem进行包装。结果 :首次构建出滴度为 8 4× 10 4 pfu ml,重组效率为 86 9%的枸杞果实cDNA文库。结论 :构建出枸杞果实cDNA文库 ,为类胡萝卜素合成酶基因的分离奠定了基础     

眼镜蛇毒腺cDNA文库的构建

目的　蛇毒含有多种生物活性成分, 从天然蛇毒中提取分离蛇毒有效成分受到蛇毒资源和质量的限制。为开发蛇毒有效成分的基因工程产品, 本研究构建了蛇毒腺的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库, 为进一步筛选、克隆和表达蛇毒有关基因做准备。　方法　从眼镜蛇（ Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ ）毒腺中提取ｍ Ｒ Ｎ Ａ,经反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ后, 以λｇｔ１０ 噬菌体为载体, 构建非表达的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库。　结果　蛇毒腺ｃ Ｄ Ｎ Ａ 非表达文库库容量为２×１０６ｐｆｕ／μｇ 重组子, 经大肠杆菌 Ｃ６００ ｈｌｆ 菌株平皿测定, 重组率为 ７０％ 。　结论　经平板鉴定和 Ｐ Ｃ Ｒ 快速鉴定表明, 所构 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库达到建库要求, 能够用于目的基因筛选和克隆表达。     

甜菜夜蛾cDNA文库的构建

以甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hübner)幼虫为材料建立了cDNA表达文库,经检测文库的初始滴度为1.1×105pfu/mL,重组率为97%,扩增后文库的滴度为5.4×107pfu/mL。用设计的2对引物筛选该文库,得到468 bp的1个片段,分析后证实是几丁质合成酶基因I保守区域的1个片段。该cDNA文库为进一步筛选甜菜夜蛾功能基因奠定了基础。     

cDNA文库的快速构建法

ｃＤＮＡ文库的快速构建法周立,任东路（中国科学院发育生物学研究所,北京１０００８０）ｃＤＮＡ文库的构建是现代分子生物学中一门重要的技术。它主要用于基因的筛选。通过这种方法能够得到完整的编码蛋白质的目的片段。通过构建表达型ｃＤＮＡ文库还能分离到调控基因转录的蛋白质因子的基因。此外,差别筛选（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）技术有助于我们获得在发育的不同阶段特异表达的基因片段。     

中国对虾cDNA文库的构建

中国对虾ｃＤＮＡ文库的构建ＣＯＮＳＴＲＵＣＴＩＯＮＯＦｃＤＮＡＬＩＢＲＡＲＹＯＦＳＨＲＩＭＰＰＥＮＡＥＵＳＣＨＩＮＥＮＳＩＳ（ＣＲＵＳＴＡＣＥＡ,ＤＥＣＡＰＯＤＡ）关键词中国对虾ｃＤＮＡ文库构建ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ,ｃＤＮ...     

人颌下腺cDNA文库的构建

本研究从新鲜的人颌下腺组织中提取总ＲＮＡ,从中分离出带ｐｏｌｙ（Ａ）尾的信使ＲＮＡ［ｐｏｌｙ（Ａ）〕ｍＲＮＡ］,并合成带ＮｏｔＩ位点的双链ｃＤＮＡ后,接上ＥｏｃＲＩ接头定向插入λｇｔ１１表达载体,经体外包装后转染Ｙ１０９０宿主菌,遂构建成人颌下腺ｃＤＮＡ文库。该文库有４．１×１０５个噬菌体,重组率为１００％,可供寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。