不同因素对草莓玻璃化试管苗恢复的影响

旨在探索草莓玻璃化试管苗恢复措施。以‘丰香’草莓玻璃化试管苗为材料,采用正交设计的方法,在继代培养基中添加不同浓度组合的活性炭、聚乙烯醇和钙离子(氯化钙),研究不同组合对草莓玻璃化试管苗恢复的影响,同时比较恢复后的正常试管苗与原来的玻璃化苗及正常苗的生理生化指标。结果表明,正交设计的9种处理间草莓玻璃化苗的恢复率差异显著,恢复率最高的是处理9(1 g/L活性炭+2 g/L聚乙烯醇+166 mg/L钙离子),恢复率为89.07%,其次是处理4(0.5 g/L活性炭+166mg/L钙离子),81.05%、处理8(1 g/L活性炭+1 g/L聚乙烯醇),73.87%。方差分析表明,活性炭、聚乙烯醇、钙离子浓度对草莓玻璃化苗恢复的影响都极为显著,影响大小依次是钙离子>活性炭>聚乙烯醇。恢复苗的各项生理生化指标与玻璃化苗差异显著,与正常苗差异不显著。结合各处理对玻璃化苗的恢复率、生理生化指标及增殖系数,综合考虑认为使草莓玻璃化试管苗恢复的最佳处理为处理9。     

中国石竹离体快繁与试管苗玻璃化研究

研究了培养基组成成分对中国石竹品种Diana F1 White组培程序中种子萌发、诱芽增殖、试管苗玻璃化及生根等重要环节的影响。结果表明:(1)种子适宜的萌发培养基为1/2MS,在此培养基中种子萌发率为83.33%,播种后30d时无菌苗高度达6.99cm,叶片数达26.7。(2)在芽诱导阶段玻璃化苗发生率最高可达53.85%。将光照强度提高至2000lx后,采用培养基MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+琼脂8.0g/L+蔗糖8.0g/L进行诱芽培养,玻璃化苗发生率降至3.33%,外植体出芽率达到90%,单个外植体出芽数达到7.2个。(3)适宜的生根培养基为1/2MS+1.0mg/LIBA+琼脂8g/L+蔗糖40g/L,培养30d时生根率为100%,平均根条数达到24.7条,平均根长度达到4.7cm。试管苗在消毒后的腐殖土中移栽,成活率达95%。该研究结果为DianaF1试管苗的快速繁殖提供科学依据。     

鱼腥草组织培养研究

以鱼腥草带侧芽茎段为外植体进行组培快繁研究。结果表明,初代培养以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L为最佳,30d侧芽诱导率可达66.7%;MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L对芽苗的继代增殖效果最好,40d芽苗的增殖倍数可达7.4,且芽苗较高;以MS+6-BA3.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+NAA0.1mg/L对芽苗的继代增重效果最好,40d芽苗鲜重为7.358g;以沙和蛭石(1:1)为基质瓶外生根效果最好,30d芽苗生根率可达84%。     

正交实验法在香果树种质离体保存中的应用

以香果树带芽茎段为外植体,采用正交实验法研究活性炭、琼脂、封口材料和培养容器对香果树试管苗离体保存的影响。结果表明,香果树带芽茎段用200 ml三角瓶,无菌培养容器封口膜封口,保存于MS+KT 2.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+30 g/L蔗糖+0.5 g/L活性炭+7.5 g/L琼脂培养基上6个月后,成活率可达86.3%。离体保存的试管苗没有发生遗传变异。     

甜瓜离体再生继代培养中玻璃化现象的研究

为提高甜瓜离体培养的再生率和转基因效率,以优质甜瓜品种‘伽师瓜’(‘卡拉库赛’)离体再生不定芽为外植体,通过连续多代继代培养,对引起玻璃化苗现象的几个主要因素进行了研究。结果表明,在甜瓜离体再生继代培养中,外植体继代次数是影响玻璃化发生的主要因素,同时培养基中的6-BA浓度偏高、琼脂浓度偏低以及蔗糖浓度偏低或偏高等可导致玻璃化苗的增加。培养基中较低的6-BA浓度(0~0.2 mg/L),琼脂浓度为6 g/L,蔗糖浓度为25 g/L以及添加活性炭等措施可有效地降低甜瓜玻璃化苗的发生。     

Study on technology of aseptic sowing and rapid propagation of Demdrobium officinale

以铁皮石斛的蒴果为外植体,采用种子→原球茎→完整植株→移栽的途径快速成苗进行工厂化生产,对各阶段培养基进行筛选,以及其他一些影响因子进行比较研究.结果表明:人工授粉后生长60～180 d的铁皮石斛种子在离体条件下均能萌发,其中授粉150～180 d种子的萌发效果最好,萌发率为87.2%～94.4%,适宜的萌发培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+马铃薯汁200 g/L+AC 1.0 g/L;原球茎增殖的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+香蕉汁100 g/L+AC 1.0 g/L,繁殖系数约为20倍/50 d;原球茎在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+马铃薯汁200 g/L+AC 1.0 g/L培养基上进行分化培养,分化的同时还能进行一定的增殖;将已分化的芽苗转接到壮苗培养MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+香蕉汁100 g/L+AC 1.0 g/L上培养1代后,转接到生根培养基1/2MS+NAA 0.8 mg/L+无机盐A 0.2～0.5 mg/L +香蕉汁100 g/L+AC 1.0 g/L上,培养50～70 d后,生根率100%,无机盐A可以有效地控制愈伤或原球茎的形成,明显提高生根苗的数量和质量.在桂林地区,生根苗以3～5月和9～10为最佳移栽期,以通过高温处理并堆沤腐熟的松树皮为基质,移栽成活率可达90%.     

铁皮石斛无菌播种产业化繁育技术研究

以铁皮石斛的蒴果为外植体,采用种子→原球茎→完整植株→移栽的途径快速成苗进行工厂化生产,对各阶段培养基进行筛选,以及其他一些影响因子进行比较研究。结果表明:人工授粉后生长60～180d的铁皮石斛种子在离体条件下均能萌发,其中授粉150～180d种子的萌发效果最好,萌发率为87.2%～94.4%,适宜的萌发培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+马铃薯汁200g/L+AC 1.0g/L;原球茎增殖的最佳培养基为MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L+香蕉汁100g/L+AC 1.0g/L,繁殖系数约为20倍/50d;原球茎在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+马铃薯汁200g/L+AC 1.0g/L培养基上进行分化培养,分化的同时还能进行一定的增殖;将已分化的芽苗转接到壮苗培养MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+香蕉汁100g/L+AC 1.0g/L上培养1代后,转接到生根培养基1/2MS+NAA 0.8mg/L+无机盐A 0.2～0.5mg/L+香蕉汁100g/L+AC 1.0g/L上,培养50～70d后,生根率100%,无机盐A可以有效地控制愈伤或原球茎的形成,明显提高生根苗的数量和质量。在桂林地区,生根苗以3～5月和9～10为最佳移栽期,以通过高温处理并堆沤腐熟的松树皮为基质,移栽成活率可达90%。     

安诺兰无菌播种组培快繁技术研究

安诺兰(Anota hainanensis)种子无菌播种试验表明:在MS+6-BA 0.1 mg/L培养基上种子能形成原球茎团;1/2 MS培养基有利于原球茎增殖,加6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L原球茎增殖效果较佳,增殖率达793.3%;在1/2 MS+IBA 1.0 mg/L+2.0 g/L活性碳+100 g/L香蕉匀浆+100 ml/L椰子水的培养基上,试管苗生根效果最好;试管苗移栽至椰糠上,成活率达91.4%。     

‘红皮’马铃薯试管苗培养和微型薯诱导

以‘红皮’马铃薯块茎上的芽为材料进行试管苗诱导、增殖及试管微型薯诱导研究。结果表明：在MS + 6-BA 0.5 mg/L +活性炭0.17% + 蔗糖20 g/L培养基中培养30 d,试管苗增殖系数达8.6;MS + 6-BA 0.5 mg/L +活性炭0.17% +蔗糖100 g/L培养基中试管微型薯诱导效果较好,30 d后诱导率达62.5%,试管薯平均直径为4.2 mm。     

纳米碳对离体培养条件下几种植物生长及分化的影响

以食用百合、红掌、大花蕙兰及金昌枣的组培苗为材料,研究不同浓度的纳米碳对几种植物外植体生长及分化的影响。结果表明,MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.2 mg/L+纳米碳0.10 g/L,促进百合鳞茎增殖,当纳米碳为0.50 g/L时有利于百合苗的生长及生根;MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+纳米碳0.04-0.06 g/L适用于红掌腋芽外植体愈伤组织诱导和分化,诱导率达90%以上,分化率达97%;加入纳米碳1.0-2.0 g/L时能够明显抑制大花蕙兰原球茎继代培养中的褐化现象;MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L+纳米碳0.05 g/L,利于金昌枣芽增殖,当纳米碳为0.15 g/L时,芽长势健壮。     

基于高遗传转化率及低幼苗玻璃化率的黑果枸杞叶片组合培养体系

【目的】建立高效稳定的黑果枸杞遗传转化体系,有效降低其再生幼苗玻璃化率,促进其基因功能研究和提高遗传改良效率。【方法】以黑果枸杞叶片作为外植体,利用农杆菌(LBA4404、EHA105)介导的遗传转化法,通过调整基础培养基类型并添加相应浓度的植物激素,筛选出最适愈伤组织诱导培养基、分化和选择培养基、生根诱导培养基,将黑果枸杞遗传转化率提高到65%以上,同时降低幼苗玻璃化率至10%以下。【结果】(1)黑果枸杞叶片高效组合培养体系中最佳农杆菌侵染浓度(OD₆₀₀)为0.6,侵染时间为25 min,在此条件下侵染叶片抗性愈伤诱导率达78.2%～96%;(2)黑果枸杞遗传转化中最适分化和选择培养基为：MS+肌醇50 mg/L+烟酸0.25 mg/L+维生素B₆ 0.25 mg/L+铁盐母液1 mL/L+甘氨酸1.0 mg/L+维生素B₁ 0.05 mg/L+6-BA 0.25 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+卡那霉素30 mg/L+特美汀300 mg/L (pH=6.0);最适生根诱导培养基为：WPM+IBA 0.2...     

不同植物生长调节剂对铁皮石斛(Dendrobium candidum)再生的影响

本实验以铁皮石斛无菌苗茎段为外植体,通过添加不同浓度的植物生长调节剂,诱导铁皮石斛愈伤组织形成与分化,建立铁皮石斛组织培养再生体系。结果表明,外植体接种5 d后,在改良MS培养基上添加2 mg/L PBU和0.05 mg/L IAA,可达到100%的愈伤诱导率。将愈伤组织接种在MS培养基上,添加0.1 mg/L NAA和0.5 mg/L 6-BA,不定芽诱导率为90.8%。适合铁皮石斛芽增殖培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。PBU浓度为0.5 mg/L,NAA浓度为0.05 mg/L时,芽苗生长情况良好,最适合用于不定芽伸长。铁皮石斛最适生根的培养基为:MS+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+100 mg/L Vc+0.5 mg/L IBA,生根率可高达94.1%。本研究成功建立了铁皮石斛高效再生体系。     

艳丽齿唇兰的组织培养(简报)

以艳丽齿唇兰种子进行离体快速繁殖体系研究。结果表明：芽诱导最佳培养基为1/2MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+花宝1号1 g/L;增殖系数达6～8倍;生根壮苗培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+AC(活性炭) 0.5g/L,生根率达95%。将生根苗移栽入湿润但拧不出水的水苔中,盖膜保湿,成活率达90%。     

多基因型黑果枸杞高效快繁体系的建立

旨为建立适用于不同种源多基因型的黑果枸杞高效稳定的组培再生体系,为工厂化育苗与大面积推广奠定基础。收集7个不同种源地的黑果枸杞种子并制备无菌苗,利用植物组织培养技术,研究不同种类、不同浓度植物生长调节剂对黑果枸杞生根和分化的影响。在黑果枸杞的茎段诱导分化培养基筛选过程中,针对黑果枸杞培养过程中容易出现的玻璃化现象,通过多种培养基比较,确定了一种最适合不同种源多基因型黑果枸杞茎段分化的培养基MS+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+6-BA 0.1 mg/L;在黑果枸杞的叶片诱导分化培养基筛选过程中,通过调节生长素类物质及细胞分裂素的浓度,获得一种适合于不同基因型的黑果枸杞叶片分化的培养基MS+蔗糖30 g/L+琼脂6 g/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L;在黑果枸杞生根培养基的筛选过程中,通过改变生长素浓度,获得了一种最适合于不同种源多基因型黑果枸杞生根的培养基1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂7.5 g/L+IBA0.25 mg/L。在大规模试验的基础上,克服了不同种源黑果枸杞使用一种培养基时在生根分化过程中常出现的玻璃化、不生根、不发芽等问题,建立了适宜不同种源多基因型黑果枸杞高效稳定的组织培养再生体系。     

罗汉果组培繁殖的技术要点

报道罗汉果组培繁殖的各项主要技术要点,包括组培条件、培养基的配制、外植体的选取与消毒、接种与培养、种源保存、炼苗与移栽、苗木包装与运输等。提出了5种培养基参考配方,即茎段诱导培养:MS+BA0.5～1.0mg/L+IAA(NAA)0.05～0.1mg/L+白糖3%+琼脂4.5g/L,pH5.8;茎尖诱导培养:MS+BA0.5～1.0mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+椰子水100mL+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;继代培养(丛生芽方式):MS+BA0.3～0.7mg/L+NAA0.05/IAA0.1mg/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;继代培养(微型扦插方式):MS+BA0.1mg/L+IAA0.3mg/L+活性炭0.07g/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8;生根培养:MS+BA0.07mg/L+IBA0.15mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭0.1g/L+白糖3%+琼脂4.5mg/L,pH5.8。分析了外植体培养过程中可能出现的不良状况的原因并提出预防措施,明确了炼苗移栽的适宜条件并制定出相应的管理方法。形成了一套较为完整的罗汉果组培苗繁殖生产技术规程。     

青钱柳组培快繁体系的初步研究

以青钱柳成熟胚为实验材料,对建立青钱柳组培快繁技术体系进行初步研究.结果表明,离体胚在添加30 g/L蔗糖、6.5 g/L琼脂的培养基中培养60 d,成苗率可达到72.67%.通过正交试验筛选出丛生芽诱导增殖的最佳培养基为WPM+0.5 mg/L 6-BA+0.01 mg/L IBA+30 g/L蔗糖,适宜的继代周期为40 d,丛生芽诱导率可达到93.33%,增殖系数最高为4.75,3种激素对丛生芽增殖系数的影响程度依次为IBA>6-BA>KT,其中IBA有显著影响.培养基中添加适当浓度的烯效唑和稀土镧对试管苗的壮苗和生长均有促进作用,其最适浓度分别为0.1 mg/L和5 mg/L.适宜浓度的IBA对试管苗生根有一定促进作用,采用WPM+0.2 mg/L IBA+20 g/L蔗糖培养基进行诱导,生根率为16.67%,经过15 d暗诱导处理,生根率可提高到23.33%.     

甜瓜试管苗继代培养玻璃化现象的研究

试管苗玻璃化现象是甜瓜组织基因转化过程中试管苗继代培养过程中的一大障碍,采用在培养基中提高糖和琼脂的浓度,添加适当的钙离子,细胞分裂素6-BA含量不超过0.2mg/L,生长素IAA用量控制在0.5mg/L,适当的光,光照强度和温度对克服甜瓜玻璃苗玻璃化现象有明显的效果.     

多叶斑叶兰繁殖体系建立及基于转录组的发育调控途径功能基因研究

多叶斑叶兰,是兰科斑叶兰属濒危野生植物、国家二级保护植物,具有极高的观赏和药用价值。多叶斑叶兰由于分布种群小,传播扩散能力弱,自然繁殖受到极大限制。以野生多叶斑叶兰茎段作为外植体,建立高效直接的植株再生体系。结合高通量转录组测序技术与生物信息学分析技术,深入挖掘参与多叶斑叶兰器官发育过程的功能基因。结果表明, Morel+2.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/LKT+1.0 mg/LNAA+1g/L蛋白胨+25g/L 蔗糖+7.0 g/L Agar+1.0 g/L活性炭+30 g/L 香蕉+50 g/L土豆为最佳的芽诱导培养基;Morel+3 mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5 mg/LKT+0.01 mg/L TDZ+2g/L蛋白胨+25g/L 蔗糖+7.0 g/L Agar+1.0 g/L活性炭30g/L 香蕉+50g/L 土豆为最佳芽增殖培养基;1/2 Morel+1.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA+1 g/L+花宝2 号+25g/L 蔗糖+7.0g/L Agar +1.0 g/L活性炭+1g·L-1蛋白胨为最佳的生根培养基。转录组测序分析组装获得170688个Unigene,平均长度为584 bp, N50为833 bp。17352个Unigene比对注释到NR、Swiss-Prot、KOG、GO、KEGG数据库。野生苗与组培苗差异表达Unigene GO与KEGG功能富集分析显示, Unigene主要参与调控植物激素信号转导、植物形态发育、次生代谢过程以及能量代谢过程等生物学功能。进一步分析获得511个参与植物器官发育调控相关的转录因子。成功建立了多叶斑叶兰种质资源保存与高效离体再生体系,结合高通量转录组学技术,获得全面完整的多叶斑叶兰转录组信息特征,为后期多叶斑叶兰快速扩繁、遗传转化以及功能基因鉴定、遗传发育及其调控机制研究奠定基础。     

生姜离体叶片愈伤组织悬浮细胞系建立与植株再生

以‘莱芜大姜’为试材,研究了生姜离体叶片愈伤组织的诱导以及细胞悬浮系建立与植株再生。结果表明,以生姜试管苗叶片为外植体,接种到MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的培养基上,可有效诱导出生长迅速、质地疏松的愈伤组织。将获得的愈伤组织接种到MS+0.15 mg/L 2,4-D+6.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖的液体培养基上,25℃黑暗条件下震荡培养25-30 d,可建立分散性好、生长迅速的悬浮细胞系,细胞悬浮系培养的适宜参数为:初始接种量为1.0-1.5 g,继代培养的适宜间隔期为15 d,继代培养液体培养基更新比例为3/4。将悬浮细胞接种到固体培养基MS+0.2 mg/L NAA+10.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖上可获得再生植株。     

八角莲组织培养研究

以八角莲种子为外植体,MS为基本培养基,通过不同的激素种类和浓度配比,对八角莲进行组织培养研究。结果表明:种子在MS+BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA34.0mg/L培养基上容易萌芽,发芽率为72.4 %;培养基MS+BA10.0mg/L+GA30.5 mg/L可诱导种子幼苗形成丛生芽;继代繁殖在MS+BA(8.0～10 .0)mg/L+GA32 .0mg/L与低浓度BA或无BA的培养基上进行循环培养效果较好;MS+NAA1.0 mg/L+AC0.2g/L适宜诱导生根获得再生植株,生根率100%。带叶叶柄在MS+BA1.0mg/L+2-ip(0.5～1.0) mg/L+NAA0.02 mg/L培养基上可诱导愈伤及根,直接形成再生植株。生根苗移栽成活率90 %。