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《中国生物工程杂志》2013,(5)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,听过您的讲座,受益匪浅,现在想向您咨询一些问题。我有200ml蛋白质样品,想采用羟基磷灰石层析纯化,但是样品溶液中含有1mmol/L的EDTA,请问有什么方法能够有效的去除EDTA,并且蛋白损失少?另外羟基磷灰石层析介质上螯合了少量EDTA,采用什么方法能够去 相似文献
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《中国生物工程杂志》2012,(5):72
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,您的授课让我获益良多。学习期间我曾向您请教过用NHS柱偶联抗原来纯化多克隆抗体的问题。关于偶联抗原蛋白量的计算,NHS柱商品说明书上显示配体密度为16-23μmol/ml干介质(ligand density:16-23μmol/ml drained medium),我使用的抗原分子量约为 相似文献
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《中国生物工程杂志》2013,(3)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是第15期蛋白质分离纯化技术专题研讨班学员,想请教您有关凝血酶酶切的问题。我用pGEX-4T-1载体可溶性表达了HPV18 L1蛋白。由于菌体上清中有分子伴侣GroEL存在,在进行GST纯化前,先后加入5mmol/L ATP、10mmol/L MgCl2、150mmol/L KCl、20%甘油和3.5mol/L尿素去除伴侣,13 000r/min、4℃离心75min。将菌体上清直接进行GST纯化,用含有3mmol/L DTT、0.2mol/L Nacl、1mmol/L EDTA的50 mmol/L Tris pH 8.0溶液洗去杂 相似文献
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魔芋中神经酰胺类物质的HPLC-ELSD分析及其含量测定 总被引:1,自引:0,他引:1
刘仁萍杨建奎詹逸舒曾炽肖鹜轩吴永尧 《中国生物化学与分子生物学报》2010,26(2):189-194
建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析神经酰胺的方法并进行了含量的测定.色谱柱:ZORBZX Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm),洗脱方法:梯度洗脱,柱温:35℃,流动相:甲醇/水,流速:1ml/min;检测器:蒸发光散射检测器,漂移管温度:40℃,氮气流速:1.5L/min.系统探讨了梯度洗脱的起始浓度、洗脱的时间和洗脱梯度的程序设置,最佳的梯度洗脱条件为5min内,甲醇浓度从60%线性增加为90%,从5min到25min,甲醇浓度线性增加为95%,在此条件下样品和标准品的分离色谱峰对称性较好.随后测定了各种样品中神经酰胺的含量,并进行了方法学验证,结果神经酰胺在0.2~2μg之间线性关系良好,最低检测限为0.01mg/ml,R2=0.9992;平均回收率为93.3%,RSD=1.65%(n=5).本法灵敏、方便、准确,重现性好,可用于魔芋神经酰胺类物质的分离及其含量的测定. 相似文献
5.
研究了在小鼠肠道菌群的高效离子交换色谱(HPLC)分析中,不同色谱分离条件对分离效果的影响,确立了最佳色谱条件:样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以0.02mol/L哌嗪-HCl缓冲液(pH8.0)平衡,洗脱盐浓度为1.0mol/L NaCl,洗脱梯度为0.1-0.5mol/L NaCl线性梯度洗脱80min,再经0.5-0.75mol/L NaCl线性梯度洗脱25min,流速1mL/min,进样量为1mL。小鼠肠道菌群HPLC分析方法的建立,为深入研究小鼠肠道菌群的组成和动态变化奠定了基础。 相似文献
6.
《中国生物工程杂志》2013,(4)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,想向您咨询一些蛋白质纯化问题。1.细胞破碎。我按照您的讲义内容进行低渗冲击(先等渗氯化钠、高渗葡萄糖,最后低渗溶液冰浴离心),破碎后蛋白浓度还可以,但有可能是我的细胞样品低温冻存的缘故,加入等渗氯化钠后就出现细胞破碎,上清就有蛋白了。这样损失很 相似文献
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《天然产物研究与开发》2017,(7)
以金花茶叶为原料,以纯化水为溶剂提取金花茶叶粗多糖(Crude polysaccharides from dry leaves of Blumea riparia,CCTLP),经过D101大孔树脂脱色,上DEAE-纤维素柱分离,依次用水、0.15 mol/L Na Cl、0.3 mol/L Na Cl、0.45 mol/L Na Cl溶液梯度洗脱,得CCTLP-0、CCTLP-0.15、CCTLP-0.3和CCTLP-0.45四个洗脱部分;将CCTLP-0、CCTLP-0.15部分采用Sevage法脱蛋白、活水透析、Sephadex G-15柱层析脱盐,再经琼脂糖Sepharose6FF柱层析分离纯化,得到CCTLP-0-1、CCTLP-0.15-1、CCTLP-0.15-2、CCTLP-0.15-3和CCTLP-0.15-4五个组份;经GPC检测其分子量及分子量分布和GPC峰型表明,确定它们为均一组份多糖;CCTLP-0、CCTLP-0.15酸解,经HPLC分析其组份结果显示,CCTLP-0和CCTLP-0.15洗脱部分主要由鼠李糖、果糖和半乳糖组成,其摩尔质量比大致为:1.00∶1.066∶0.384和1.00∶1.186∶0.544。 相似文献
8.
《中国生物工程杂志》2012,(6):119
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,想向您请教一下我在实验中遇到的问题。我的色谱图中可以明显看到几个相对独立的峰,但是在SDS-PAGE图中,150 kDa附近自始至终都出现条带;并且Fr.61-130和Fr.131-172两个峰的蛋白组成并没有太大差别,为什么还会分成两个不同的紫外吸收峰呢? 相似文献
9.
《中国生物工程杂志》2013,(12)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,有问题想向您请教。我在做蛋白的原核表达,用的是pkk223-3载体,表达菌株用了大肠杆菌JM109和TB1,发现表达蛋白均在包涵体中,降低IPTG浓度为0.05mM,降低诱导 相似文献
10.
《中国生物工程杂志》2013,(9)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您第9期和第16期"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,有问题想请教您。(1)我的目标蛋白大小约66kDa,在pET24a,BL21中有可溶性表达(提取时已加了PMSF,DNasI和少量Triton-X-100,3ul/60ml buffer),但是总得不到全长蛋白。(2)过Ni柱纯化不是很好。用50mmol/L咪唑也可以得到一些蛋白,但过Superdex 200后峰不尖,SDS-PAGE只能得到 相似文献
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《中国生物工程杂志》2012,(2):23
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是蛋白质研讨班的学员,实验中有个问题向您请教。用硫酸铵沉淀镍柱亲和纯化的蛋白溶液后,用20mM PBS(pH6.8)复溶,接着用G25 5ml预装柱在AKTA纯化仪上脱盐,缓冲液为20mM PBS(pH6.8),出现了两个几乎等高的UV峰。第一个峰先于电导峰,第二个峰与电导峰重叠,SDS-PAGE显示两个峰均为目的蛋白(57kDa),而且4℃放置过夜之后,两个峰对应的溶液变浑浊。请您指点! 相似文献
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《中国生物工程杂志》2014,(8)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,在纯化一个糖蛋白,使用的是单抗与CNBr结合后的亲和层析,洗脱是0.1M甘氨酸,盐酸调节pH至2.5,样品用含有巯基乙醇的5×上样缓冲液煮沸十分钟,但结果显示分子量增加了很多,由36KD左右到了60KD。想向您请教原因。非常感谢!姜老师答: 相似文献
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《中国生物工程杂志》2012,(8):35
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您"蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员。我们准备用溴化氰活化介质偶联α-银环蛇毒素装柱,溴化氰活化的琼脂糖4B是某知名公司的,空柱还没定,说明书上推荐的是HR 16/10。请问这款柱子我们可以用吗?急切盼望您的回复,谢谢! 相似文献
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《中国生物工程杂志》2011,(5):137
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是您蛋白质研讨班的学员,最近在纯化方面遇到了一点问题,想向您请教。我在做第一步纯化时,目的蛋白的活性总是很好,无论是用阴阳离子柱还是凝胶柱,都能获得很好的活性洗脱组分。但是到了第二步纯化,不管是离 相似文献
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《中国生物工程杂志》2012,(9):21
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"的学员,在上课时听您讲过用Protein A纯化单克隆抗体的效果并不完美,请问这是不是由于纯化后抗体容易形成二聚体或多聚体,而导致活性下降?我还想请教一下:1.如果只 相似文献
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姜老师 《中国生物工程杂志》2014,(1)
<正>蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我有个实验问题向您请教。我的目的蛋白质应该是碱性,但使用一般的阳离子交换介质都是流穿,只有使用很强的阳离子交换介质,流穿不再有活性,但柱上活性回收很低。ELISA检测发现需要用NaOH洗脱主要部分,洗脱后测不到生物学活性。请问这是什么情况?该如何解决?谢谢您! 相似文献
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不同品种荷叶HPLC指纹图谱研究 总被引:1,自引:0,他引:1
研究用高效液相色谱法建立荷叶指纹图谱的分析方法。采用依利特Sino Chrom色谱柱(4.6 mm×200mm,5μm),以乙腈-缓冲溶液(H3PO4-NaH2PO4,0.1 mol/L,pH 2.5)为流动相,梯度洗脱,流速1.5 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm。用上述方法确定了10批不同品种荷叶的12个共有峰,各色谱峰分离效果良好,精密度、稳定性、重复性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%,符合指纹图谱要求。该方法精密度、稳定性和重复性均较好,为荷叶的质量控制标准提供了参考。 相似文献
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《中国生物工程杂志》2012,(7):30
蛋白质研讨班学员问:姜老师,您好!我是刚结束的"第13期蛋白质分离纯化技术专题研讨班"学员,向您请教关于乳酸菌发酵液中分离小分子生物活性物质的问题。活性物质目前未知,初步猜测可能为环二肽,手性未知。我们合成后未检测到生物活性,所以需要重新进行分离纯化。 相似文献