尖吻蝮蛇毒的聚丙烯酰胺凝胶电泳，冬眠特异蛋白的发现

目的 比较冬眠期、冬眠前后、活动期尖吻蝮蛇毒的组分.方法 聚丙烯酰胺凝胶电泳.结果 发现了冬眠期尖吻蝮蛇毒中有一个特异性增强的蛋白质成分,进入冬眠几天后,该成分就可以检测到,出眠几天后及活动期蛇毒中不可见.结论 该成分应该与尖吻蝮冬眠密切相关,暂且称其为"冬眠特异蛋白".     

尖吻蝮蛇毒研究进展

蛇毒是从毒蛇头部毒腺分泌的有毒液体,是一种重要的天然动物毒素,其主要成分是蛋白质,具有广泛的生物学活性,现已被应用于溶栓、抗癌、止血、止痛等方面。传统上蛇毒分为神经毒、血循毒与混合毒。尖吻蝮是我国十大剧毒蛇之一,其毒液主要作用于血液系统,引起出血、肿胀与局部组织坏死。已经发现尖吻蝮蛇毒多属丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶屯家族,部分蛋白质可能属于去整合素家族[1]。现就尖吻蝮蛇毒生理活性及药理应用等方面的研究进展综述如下。     

湖南尖吻蝮蛇毒出血毒素的圆二色性和化学修饰

用远紫外ＣＤ谱研究了湖南产尖吻蝮蛇毒的两个出血毒素的溶液构象,计算得ＤａＨＴ－１的α螺旋、β折叠、无规卷曲分别为２３．４％、３１．３％、４５．３％。随ＰＨ的增大或减小,峰位蓝移,酸性条件下的变化比碱性条件下的变化大。构象单元含量计算表明：α螺旋减少,无规卷曲增多,β折叠基本未变,温度和ＰＨ对ＣＤ谱的影响相似,５０℃时峰位蓝移,α螺旋减少,无规卷曲增多,ＥＤＴＡ对ＣＤ谱影响显著,０．０２ｍｏｌ／ＬＥ     

尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）生长过程不同时期排毒量及蛇毒组分的变化

对人工培育的4个年龄段尖吻蝮蛇毒和野生成体尖吻蝮蛇毒进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果显示：3龄以前尖吻蝮蛇毒蛋白电泳图谱,无论是在分带、泳动率及相应组分的量等方面,均呈现一定的差异,但随着尖吻蝮蛇龄的增长,蛇毒蛋白电泳图谱与野生成蛇蛇毒蛋白电泳图谱越来越接近。3龄尖吻蝮生长发育达到性成熟,其蛇毒蛋白电泳图谱与野生成蛇趋于一致。蛇毒组分的变化,提示了尖吻蝮的生长发育进程。     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮蛇毒中纯化出两个出血毒素。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸分别占２３％和２４％。ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具     

尖吻蝮蛇毒去纤酶及其临床应用研究

Ottyang,C.等(1967)从尖吻蝮(Agkistrodon acutus)蛇毒中分离纯化得到凝血酶样成分,分子量33500,由17种263个氨基酸组成,具有体内去纤作用,但未见用于临床的报道。杉原久义等(1978)也从尖吻蝮蛇毒中分离纯化得到了一个促凝组分,分子量52000,具有精氨酸酯酶和凝血酶活性,未见体内血液学效应及临床应用的报道。我们从1974年起,对尖吻蝮蛇毒凝血酶样酶进行7较为系统的研究,并研制成“去纤酶注射液”,于1978年首先用于临床,1981年鉴定通过。这是我国最先研制并用于临床的蛇毒酶制剂。它由四个凝血酶样同工酶组成,其分子量分别是33500,68000,19500,30000;它们均由17种氨基酸组成,但组成     

尖吻蝮(Deinagkistron acutus)生长过程不同时期排毒量及蛇毒组分的变化

对人工培育的4个年龄段尖吻蝮蛇毒和野生成体尖吻蝮蛇毒进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳分析.结果显示3龄以前尖吻蝮蛇毒蛋白电泳图谱,无论是在分带、泳动率及相应组分的量等方面,均呈现一定的差异,但随着尖吻蝮蛇龄的增长,蛇毒蛋白电泳图谱与野生成蛇蛇毒蛋白电泳图谱越来越接近.3龄尖吻蝮生长发育达到性成熟,其蛇毒蛋白电泳图谱与野生成蛇趋于一致.蛇毒组分的变化,提示了尖吻蝮的生长发育进程.     

皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分的荧光特性

用荧光光谱方法研究了皖南尖吻蝮蛇蛇毒中纤溶组分。研究了Ａｃｒ对ＦＰ内源发光的影响,结果表明,每个ＦＰ分子含有多个Ｔｒｐ残基,这些Ｔｒｐ残基约有８３％可被Ａｃｒ所淬灭,而且这些Ｔｒｐ残基位于ＦＰ分子的较疏水环境中。     

王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用

目的 探讨王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抑制作用。方法 王锦蛇血清与不同剂量的尖吻蝮蛇毒分别混合后,注射到小鼠背皮下,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗出血活力;腹腔注射此混合物后,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒的抗毒效价;先后注射尖吻蝮蛇毒和王锦蛇血清,测定王锦蛇血清对尖吻蝮蛇毒引起的死亡、组织损伤和炎症的抑制、保护和治疗作用。结果 1ml王锦蛇血清可完全抑制10mg（干重）的尖吻蝮蛇毒的出血活力;1ml王锦蛇血清可中和11mg（干重）尖吻蝮蛇毒的致死活力;王锦蛇血清对由尖吻蝮蛇毒引起的致死、组织损伤和炎症有显著的抑制、保护和治疗作用。结论 王锦蛇血清是尖吻蝮蛇毒的强抑制剂,可能成为未来新的蛇伤治疗药物的原料。     

尖吻蝮幼蛇就地和异地人工养殖研究

目的研究尖吻蝮（Deinagkistrodon acutbus）幼蛇在人工养殖过程中的技术难关,探讨尖吻蝮幼蛇生长缓慢的原因,以提高幼蛇的成活率和生长率。方法采用湖南省永州市野生尖吻蝮种蛇产卵孵化的幼蛇,在原产地永州与非原产地广西南宁进行幼蛇的人工饲养对比实验,观察在不同地域人工饲养的尖吻蝮幼蛇的生长速度。结果尖吻蝮幼蛇在本地及异地人工饲养均获得成功,尤其以南宁人工饲养的幼蛇最为明显,2010年9月饲养至2011年8月,幼蛇均重从（13．8±1．8）g增长至（198．8±80．6）g,最重的个体体重达350g。两地饲养的幼蛇均可自行捕食中华蟾蜍、老鼠及活小鸡、鸭苗,仅用1年时间将野生尖吻蝮子代幼蛇人工饲养成功。结论尖吻蝮幼蛇在本地及异地人工饲养是可行的。     

Purification and Immunoprotection Evaluation of AaHIV from Complex Venom Metalloproteinases of Deinagkistrodon acutus

The aim of this study was to investigate the immunoprotective effects of AaHIV in mice. After purification, a 12% sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS‐PAGE) was performed. Bicinchoninic acid was used to determine the molecular weight and concentration of AaHIV. AaHIV, venom complex (VC), and phosphate buffered saline (PBS) were subsequently used to immunize the mice three times, and the blood was sampled 1 week after the third immunization to determine the serum immunoglobulin G (IgG) antibody titer. A skin‐bleeding inhibition assay and toxin‐eliminating assay were performed on the immunized mice. The purity and concentration of AaHIV were 86.6% and 1.20 mg/mL, respectively. The AaHIV group exhibited higher antibody titers than the VC group. The survival rate of the AaHIV group (7/10) was significantly higher than that of the PBS group (0/10) (P = 0.0031). The high titer of antibodies induced by AaHIV partially neutralized the bleeding activity of the Deinagkistrodon acutus venom complex.     

尖吻蝮自然越冬洞穴的结构观察

为了解决尖吻蝮在人工饲养条件下难以安全越冬的问题 ,在黄山地区对尖吻蝮的自然越冬进行了数年的调查 ,陆续观察了 2 3个越冬洞穴的结构。初步总结了尖吻蝮自然越冬的生态 ,并用数据和图示方式较详细地报道了尖吻蝮自然越冬洞穴的构造 ,介绍了人工饲养过程中保证尖吻蝮安全越冬的管理方法。     

尖吻蝮人工养殖灌喂技术研究

目的探讨采用灌喂器人工灌喂尖吻蝮技术的可行性。方法采用湖南京湘源蛇类养殖有限公司自主研制的灌喂器人工灌喂尖吻蝮,观察记录随机抽取的30条尖吻蝮幼蛇及30条尖吻蝮成蛇在机器灌喂后每条幼蛇的体重数据,每3个月测量1次,观察12个月统计尖吻蝮的体重增长情况,并与常规灌喂方法饲养的尖吻蝮进行比较。结果灌喂器饲养的尖吻蝮幼蛇成活率为86.67%,平均体重达（482.39±40.19）g;灌喂器饲养的尖吻蝮成蛇成活率为96.67%,平均体重达（1346.13±117.51）g。而同期常规灌喂技术饲养的尖吻蝮幼蛇全部死亡,尖吻蝮成蛇成活率为76.67%,平均体重（878.56±82.39）g。结论人工灌喂器饲养的尖吻蝮幼蛇及成蛇的体重增长快速,成活率高,值得推广。     

尖吻蝮仔蛇的人工模拟生态养殖试验

目的通过建立一个适应于尖吻蝮仔蛇生长发育的稳定的多功能生态系统的人工模拟生态养殖蛇场,以最大限度地降低仔蛇的饲料成本,从而达到降低人工养殖尖吻蝮蛇的成本。方法选取一个室外围墙式养蛇场作为试验基地。设计为适应于蛇、蛙、昆虫、蚯蚓、小杂鱼等动物生长繁衍的人工模拟生态环境,建立一个稳定的多功能蛇场生态系统,以尖吻蝮蛇100条,在试验以前随机抽取10条测量其体重和体长,并以活体动物饲料喂养法和科学饲养管理法进行试验养殖,并在进入第一、第二次冬眠前均随机抽取10条蛇仔测其体重和体长。结果本次试验与本蛇场室内人工饲养尖吻蝮仔蛇相比,不仅在体重、体长和肥满度方面均相差不大,而且仔蛇的存活率还有所提高。结论表明该人工模拟生态养殖蛇场能够满足尖吻蝮仔蛇生长发育的需要,达到了预期的目的。     

蕲蛇酶抗小鼠实验性肿瘤转移作用研究

目的：探讨从尖吻蝮蛇毒中分离得到的具有凝血酶样酶活性的蕲蛇酶抗实验性肿瘤转移作用。方法：用尾静脉注射体外培养的黑色素瘤Ｂ１６和肉瘤Ｓ－１８０细胞的小鼠肺转移模型,注射瘤细胞前后分别腹腔注射药物,２０天后处死小鼠,计数肺表面转移瘤结节数。结果蕲蛇酶剂量在２－５ＡＵ／ｋｇｉｐ能明显减少Ｂ１６在Ｃ５７ＢＬ小鼠及Ｓ－１８０在昆明鼠的肺转移结节数,但对转移瘤小鼠的生命无明显的延长作用。结论蕲蛇酶具有抗小鼠实     

尖吻蝮的人工繁育

In this article, we report our first experience of successful artificial propagation about the five paced pit viper ( Deinagkistrodon acutus ) and breeding to its second filial generation. In May, 1994, 18 adult snakes (8 males, 10 females) were captured in field, and were reared in man made environment. In July and August of the same year, 5 females laid 134 eggs in total (26 8±5 26), which were artificially incubated into 123 hatchlings. 100 hatchlings (average body weight 12 13±1 50 g)were selected to feed. Three years later, 58 snakes were alive (livability 58%). In September of 1997, April and May of 1998, some of the 58 snakes copulated. From July to August of 1998, 6 females laid 64 eggs in total, 58 of which were fertilized, and 54 were incubated into hatchlings in September of 1998. Therefore, we had successfully bred the second filial generation of the five paced pit viper in complete artificial environment.     

尖吻蝮和舟山眼镜蛇初生幼体的捕食性攻击行为

毒蛇捕食行为通常可以分为3个阶段:攻击前、攻击和攻击后阶段,其中攻击阶段在整个行为过程中起着决定性的作用。用数码摄像机拍摄了4个体温下尖吻蝮和舟山眼镜蛇幼体捕食小白鼠的行为过程,通过分析10个行为变量来比较两者捕食性攻击模式的差异并检测温度对攻击行为的影响。两种蛇对猎物产生明显不同的攻击反应。攻击前,尖吻蝮感应猎物能力相对较弱,头部移动速度缓慢,准备时间较长;攻击时,尖吻蝮头部移动速度显著大于舟山眼镜蛇;攻击注毒后两种蛇均释放猎物,尖吻蝮头部回缩至攻击前状态的时间间隔相对较短。体温显著影响两种蛇的攻击行为。在检测的温度范围内,两种蛇都在28℃体温条件下感应猎物能力达到最好;温度效应对尖吻蝮攻击速度的影响显著,但对舟山眼镜蛇不显著。不同蛇类捕食行为模式以及对体温变化反应的差别可能主要与其利用感觉器官、生境条件上的种间差异有关。     

Age-related Variation in Snake Venom： Evidence from Two Snakes （Naja atra and Deinagkistrodon acutus） in Southeastern China

In this study we explored electrophoretic profiles, enzymatic activities and immunoreactivity of neonate and adult venoms from two snakes （Naja atra and Deinagkistrodon acutus） coexisting in southeastern China. Age-related variation in electrophoretic profiles was found in both species and proteolytic and fibrinogenolytic activity was higher in neonate than adult venoms. Neonate D. acutus venom had higher 5＇ nucleotidase, PLA2, hyaluronidase and gelatinolytie activity, but lower esterolytic activity, than adult venom. Neonate and adult D. acutus venoms showed identical phosphomonoesterase, LAO and fibrinolytic activities. Neonate N. atra venom had higher phosphomonoesterase and LAO activity, but lower 5＇ nucleotidase, PLA2, hyaluronidase and Ache activities than adult venom. Neonate and adult N. atra venoms showed similar gelatinolytic activity. Further, age-dependent immunoreactivity was found in both species, and cross-reactions between homologous venoms and antiserums were closely related to venom composition. We speculate that age-related variation in venom characteristics is possibly driven by evolutionary forces associated with ontogenetic shifts in dietary habits, competition and predation pressure.