壳聚糖微球分散体系的抑菌性研究

以乳化交联法制备的壳聚糖微米微球(CMs)为试验材料,研究其对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌行为,并对其浓度因素、粒径因素和抑菌机理做了探讨。结果表明CMs的抑菌作用随其浓度的增加和粒径的减小而增强。在浓度<0.7 mg/mL时,CMs对细菌的生长具有先抑制后促进的作用;当浓度≥0.7 mg/mL时对细菌有杀灭作用。CMs对两种细菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.8、1.4 mg/mL和1.0、1.8 mg/mL,表明壳聚糖微球对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有明显的抑制作用,且金黄色葡萄球菌对微球抑制作用的反应比大肠杆菌更敏感。扫描电子显微镜观察发现,细菌能迅速贴附在CMs表面,并且贴壁后的细菌发生了明显的形态变化,有的甚至完全被破坏。     

利用生物可降解海藻酸钙微球保护苏云金杆菌晶体与芽胞免受紫外线降解

采用基于注射挤压器的液滴形成技术制备包裹了苏云金杆菌晶体和芽胞的海藻酸钙凝胶微球.通过调节该装置的活塞重量和空气压力,获得了平均直径为20μm的微球.SDS-PAGE分析与平板菌落涂布实验表明,凝胶微球可有效减少紫外线对苏云金杆菌晶体和芽胞的损伤作用.利用小菜蛾进行的毒力生测发现,凝胶微球可有效防止紫外线引起的晶体和芽胞杀虫毒力的下降.本研究的液滴形成技术也可适用于其它微球包裹过程.     

载荷壳聚糖微球的海藻酸钠水凝胶的制备

目的:在支架材料上引入具有控释行为的微球,旨在通过微球包裹生长因子,通过生长因子的缓慢释放从而促进种子细胞的生长分化。方法:本实验通过在海藻酸钠水凝胶中负载具有控释功能的壳聚糖微球,并通过在微球中包载溶菌酶从而达到控制壳聚糖降解速率的功效。实验研究了不同搅拌速度下壳聚糖微球的形貌及粒径大小,通过扫描电镜对壳聚糖微球及复合支架的形貌进行了观察,通过紫外光吸收法测试了微球的载药量及包封率,并研究了壳聚糖微球在体外的降解行为等。结果:制备的壳聚糖微球表面较光滑,溶菌酶的包封率在25.78%-41.89%之间,载药量在15.20%-24.44%之间。包封溶菌酶的微胶囊在降解9天后壳聚糖分子量下降了70.40%,载荷微球的复合凝胶孔洞增多,孔洞大小均匀。结论:此复合材料有望作为载荷软骨相关生长因子的支架模型,从而解决软骨组织工程中种子细胞匮乏的问题。     

载荷壳聚糖微球的海藻酸钠水凝胶的制备

目的：在支架材料上引入具有控释行为的微球,旨在通过微球包裹生长因子,通过生长因子的缓慢释放从而促进种子细胞的生长分化。方法：本实验通过在海藻酸钠水凝胶中负载具有控释功能的壳聚糖微球,并通过在微球中包栽溶茵酶从而达到控制壳聚糖降解速率的功效。实验研究了不同搅拌速度下壳聚糖微球的形貌及粒径大小,通过扫描电镜对壳聚糖微球及复合支架的形貌进行了观察,通过紫外光吸收法测试了微球的载药量及包封率,并研究了壳聚糖微球在体外的降解行为等。结果：制备的壳聚糖微球表面较光滑,溶菌酶的包封率在25．78％41．89％之间,载药量在15．20％-24．44％之间。包封溶茵酶的微胶囊在降解9天后壳聚糖分子量下降了70．40％,载荷微球的复合凝胶孔洞增多,孔洞大小均匀。结论：此复合材料有望作为栽荷软骨相关生长因子的支架模型,从而解决软骨组织工程中种子细胞匮乏的问题。     

尺寸均一的壳聚糖微球的制备及其作为胰岛素控释载体的研究

采用新型微孔膜乳化技术制备了载胰岛素的壳聚糖微球。研究表明,要制备粒径均一的壳聚糖微球,必须将亲水性膜修饰成疏水性;制得的微球粒径和所采用的膜孔径之间存在很好的线性关系,使得微球粒径可控;以胰岛素为模型药物,主要考察了交联剂用量和交联时间对微球表面形态、药物包埋率和微球体外释药特性的影响。结果表明当氨基与醛基的摩尔比为1∶0.7、交联时间为1h时,所得载药微球的包埋率最高,随着戊二醛用量的增加和交联时间的延长,药物体外释放速率减慢。     

均匀设计法优化硝酸咪康唑微球的制备工艺

目的：以均匀设计法筛选优化硝酸咪康唑苹果酸化壳聚糖微球的制备工艺,提供可控性及预测性,并对微球稳定性和药物释放规律进行研究。方法：采用乳化交联法制备微球。采用U5（53）试验表进行试验,分别考察各处方的制备的微球的形态和粒径、载药量和包封率。利用SPSS软件进行多元线性回归拟合,得到方程及优化工艺条件。结果：优化方程的预测值与实验值之间有较好的吻合性。制备出的微球可以在室温（25℃）条件下保存;微球的药物释放动力学可用一级动力学方程来描述。结论：本实验通过均匀设计法优化硝酸咪康唑微球的制备工艺预测性好且制备的微球性能良好。     

新城疫壳聚糖微球疫苗免疫效果的研究

鸡新城疫是由新城疫病毒引起的鸡的一种急性、烈性、高度接触性传染病,是危害养禽业的最严重疫病之一。控制新城疫最根本的措施是进行有效的疫苗接种,目前常用的疫苗是弱毒活疫苗和灭活疫苗,但二者在实际应用中均存在一定的局限性。口服微球疫苗可以诱导较强的粘膜免疫;同时还能够诱导产生系统的体液免疫和细胞免疫,已成为ND疫苗研究的热点。以壳聚糖为囊材,新城疫La Sota抗原液为芯材,戊二醛为交联剂,制备出新城疫壳聚糖微球疫苗,通过了实验室安全检验和效力检验。将新城疫壳聚糖微球疫苗与LaSota活疫苗和新城疫油乳剂灭活苗分别免疫SPF鸡,利用MTT、血凝抑制法(HI)和ELISA等分别检测不同疫苗免疫后的细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫抗体IgA,并在当免疫鸡HI抗体降到23的情况下进行了攻毒试验。结果表明,新城疫壳聚糖微球疫苗安全性好,免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫、体液免疫和局粘膜免疫,具有较好的保护作用。     

左旋多巴甲酯在PLGA微球的稳定性研究

目的：考察左旋多巴甲酯在PLGA微球中的稳定性并探讨其稳定方法。方法：利用HPLC的方法考察了左旋多巴甲酯在不同pH值和光照的环境中和微球里的稳定性。结果：左旋多巴甲酯在pH3中稳定,在微球中也可以稳定一周。结论：包封左旋多巴甲酯在PLGA微球中,是一种有效地保护了左旋多巴甲酯在微球中的活性,可以实现长效缓释,是一种可行的方案。     

可控性释放NGF的京尼平- 壳聚糖微球的研究

目的:在体外研究京尼平-壳聚糖微球可控性释放具有生物活性的神经生长因子的可行性。方法:采用"乳化-化学交联"技术制备包埋神经生长因子的京尼平-壳聚糖微球,京尼平为化学交联剂;应用扫描电镜、粒径分布、体外缓释动力学及细胞生物活性分别对微球的性能进行研究。结果:京尼平-壳聚糖微球表面光滑,平均粒径在5.1~50.5μm之间;京尼平的浓度可影响微球在体外释放神经生长因子的速度,经高浓度京尼平交联的微球能减缓并持续释放神经生长因子;此外,从京尼平-壳聚糖微球释放的神经生长因子可维持PC12细胞的生物活性,提高NGF生物利用率。结论:京尼平-壳聚糖微球能有效缓释具有生物活性的NGF超过14天,为神经退行性疾病的治疗提供一种治疗策略。     

海藻酸钠壳聚糖微球作为药物载体的研究进展

海藻酸钠壳聚糖微球是具有生物粘附性且能结合和传递大分子药物的天然高分子材料,且在生物医学领域具有广阔应用前景的药物载体。它具有生物黏附性、生物相容性、生物可降解性、对人体无毒性且能够结合和传递大分子药物的天然高分子材料。海藻酸钠壳聚糖微球作为载药微球具有提高药物的生物利用度、延长药物的作用时间等优点。国内外近些年已将其应用于药剂学领域,以及将其作为药物载体经微球化与药物结合形成给药系统的研究也在逐步开展并取得了较多成果。本文主要阐述海藻酸钠壳聚糖微球的主要生物特性、作用特点及其在医学领域中应用的研究进展,并对其应用前景进行探讨。     

Stability and maturation of E. coli ribosomal RNA.

The kinetics of rRNA maturation were investigated in a rifampicin permeable strain of E. coli during exponential growth in glucose minimal medium. The method used involves isotopic labelling of rRNA, and separation of precursor and mature forms by gel electrophoresis. The maturation of both 16s and 23s rRNA was found to follow first order kinetics. The mean life time of the precursors was found to be about 1.5 min. In glucose minimal medium all pulse label in precursors was recovered in mature rRNA, i.e. nascent rRNA is stable.     

Cluster and Fold Stability of E. coli ISC-Type Ferredoxin

Iron-sulfur clusters are essential protein prosthetic groups that provide their redox potential to several different metabolic pathways. Formation of iron-sulfur clusters is assisted by a specialised machine that comprises, among other proteins, a ferredoxin. As a first step to elucidate the precise role of this protein in cluster assembly, we have studied the factors governing the stability and the dynamic properties of E. coli ferredoxin using different spectroscopic techniques. The cluster-loaded protein is monomeric and well structured with a flexible C-terminus but is highly oxygen sensitive so that it readily loses the cluster leading to an irreversible unfolding under aerobic conditions. This process is slowed down by reducing conditions and high ionic strengths. NMR relaxation experiments on the cluster-loaded protein also show that, once the cluster is in place, the protein forms a globular and relatively rigid domain. These data indicate that the presence of the iron-sulfur cluster is the switch between a functional and a non-functional state.     

Efficiency of phage protein synthesis in lambda-infected E. coli minicells

Phage lambda major head protein, the gene E product, has been identified among other phage proteins synthesized in lambda-infected Escherichia coli minicells, separated by SDS-acrylamide gel electrophoresis. On stained gels, the same protein has also been detected among total (bacterial and phage) proteins of lambda-infected minicells. The contribution of lambda proteins to the total protein content of lambda-infected minicells was found to be about 12% following 30 min lambda-infection. The inhibition of lambda early protein synthesis (shown by other authors in nucleate bacterial cells) practically does not occur in minicells; this may be the reason of the observed high efficiency of phage protein synthesis.     

大肠杆菌启动子特征参数的统计分析

首先统计了683条大肠杆菌sigrna70启动子序列的每个位点单碱基频率,并计算了每个位点单碱基体现保守性的M1（1）值和相应涨落限,从而获得多个大于涨落限的保守位点。其次,对大肠杆菌的转录起始位点到翻译起始位点的距离进行了统计,发现这个距离的范围是0-1000bp。大肠杆菌启动子还分布于一些特定的基因间和编码区,分别是的DIV基因间,55％的TAN基因间和6％的编码区。这些启动子的特征是启动子辨识的重要参数。     

Stability of the unique anticodon loop conformation of E.coli tRNAfMet.

Initiator tRNAs have an anticodon loop conformation distinct from that of elongation tRNAs as detected by susceptibility to S1 nuclease. We now find the anticodon loop conformation of E. coli tRNAfMet to be stable under different salt conditions as detected by using S1 nuclease as a structural probe. In contrast, a conformational change is observed in the T- and D- loop of this tRNA in the absence of added Mg2+. This change can be suppressed by spermine. Even under those conditions effecting a change in T- and D- loop conformation, the anticodon loop does not change. This suggests that the conformational shift is controlled by Mg2+ and restricted to the D- and T- loop region only without affecting the anticodon domain. The use of S1 nuclease as a conformational probe requires the use of kinetic studies to determine the initial cleavage sites. Thus, the use of a strong inhibitor which immediately stops the action of this nuclease is necessary. ATP is shown to be such an inhibitor.     

天冬氨酸酶E.coli融合表达研究

以大肠杆菌基因组DNA为模板,设计引物扩增得到天冬氨酸酶基因,将其重组于胞内融合表达型T载体中,重组质粒转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)。SDS-PAGE分析表明,工程菌经IPTG诱导,表达大量表观分子量约75kD的融合蛋白。经试验,工程菌细胞具有较高的天冬氨酸酶活性,融合形式的酶最适温度37℃,最适pH8.5,融合伴侣DsbA的存在对酶活没有影响。     

大肠杆菌周质蛋白提取工艺的研究

研究了精氨酸缓冲液在不同浓度、pH值及提取时间下的周质蛋白提取率,并以溶菌酶法、渗透压休克法作为对比。结果表明浓度0.4 mol/L,pH值8.0,提取时间为45 min时,周质目的蛋白达到0.89 mg/g湿菌,相比其他方法,周质蛋白提取率分别提高93%、187%。实验得到一种高效、方便的大肠杆菌周质蛋白提取工艺,为周质表达的重组蛋白大规模生产奠定了基础。     

整合子与多重耐药大肠埃希菌相关性研究

目的探讨整合子在多重耐药大肠埃希菌耐药性中的作用。方法对临床分离的93株多重耐药大肠埃希菌的I、Ⅱ型整合酶基因进行检测,并分析药敏结果。结果多重耐药临床分离株中Ⅰ型整合子阳性率为60.2%。所检出整合子共有3种长度即1000、1600和2000 bp;主要携带aadA和dfrA类基因盒;未检出Ⅱ型整合子。结论整合子形成是细菌产生多重耐药的重要原因。     

斑马鱼干扰素基因工程菌发酵条件及稳定性研究

采用液体传代的方法,研究表达斑马鱼干扰素(IFN)工程菌株pRSET-B-zIFN的遗传稳定性,并对其发酵工艺进行了优化.结果表明,构建的工程菌株遗传稳定性良好,在没有选择压力的情况下,传代100次质粒稳定性仍然保持100%,菌落形态及生长情况与原代菌无明显区别,SDS-PAGE结果显示zIFN表达量无明显差异.发酵条件研究表明,工程菌在LB培养基中,接种量为1%,诱导剂终浓度为0.1 mmol/L,zIFN的表达量最高.