抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体IgY的动物保护作用研究

目的通过连续观察蛇伤大鼠多项生理指标的动态变化,探讨不同时段施予血清（125u血清／mg蛇毒）同等效价但量加倍的抗蛇毒IgY对其心、肺功能保护的时效性。方法SD大鼠分为80、100、120min IgY保护组和蛇毒组共4组,戊巴比妥钠腹麻,按2倍LD50（1．272mg／kg）的剂量注入舟山眼镜蛇毒。连续3h记录呼吸频率、心电图和肌电等生理指标的动态变化,于注毒后80、100、120min分3个时段注入抗眼镜蛇毒IgY,比较各组大鼠的平均存活时间、保护率及心、肺、腓肠肌功能的差异。结果蛇毒组大鼠注入2倍LD5。的眼镜蛇毒后,平均存活时间为124．4min,存活率为0;80、100min IgY的存活率均达到或超过50％。但120minIgY组的保护作用不明显。与生理盐水组相比,各组心电图异常（心率减慢、ST段抬高）、呼吸频率减慢及肌电减弱多出现在100min以后。大鼠死亡前均出现潮式呼吸直至呼吸衰竭。结论应用与血清（125u血清／mg蛇毒）同等效价但量加倍的抗蛇毒IgY,可有效地减低蛇毒对机体心、肺、骨骼肌功能的损伤,提高生存率;与抗血清（125u血清／mg蛇毒）对蛇伤大鼠保护作用的结果相比,加量后保护作用更强．保护的有效时段有一定的延长。     

鸡血清与卵黄中抗中华眼镜蛇毒IgY动态变化研究

目的探索特异性IgY的产生和变化规律。方法用眼镜蛇毒原毒免疫产蛋母鸡,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,小鼠体外中和实验检测其生物活性。第1次免疫40周后,眼镜蛇毒攻击已免疫母鸡,检测攻击前后鸡血清中抗体效价变化情况,未经眼镜蛇毒免疫的母鸡作阴性对照。结果经免疫后第7天蛋黄中即可检测到抗体,经多次加强免疫,40周时蛋黄中还能保持高效价的抗体,通过分离纯化,此抗体可保护实验小鼠免受4 LD50眼镜蛇毒的攻击;同时,鸡血清中也保留着较高效价的抗体,可中和4 LD50以上的眼镜蛇毒。结论用眼镜蛇毒免疫鸡,经多次加强免疫,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,初步检测此抗体可中和4 LD50的蛇毒。     

抗甲型流感鸡卵黄抗体的制备及效价测定

目的:研究抗甲型流感卵黄抗体的制备与纯化,并探讨其效价随免疫时间的变化关系。方法:用灭活甲型流感病毒复合抗原免疫蛋鸡,用PEG6000对卵黄抗体进行分离提取,SDS-PAGE法对其进行分子量测定,考马斯亮蓝法对其含量和纯度进行测定,用微量凝集法检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果:提取得到的卵黄抗体重链分子量为66 kDa、轻链分子量分26 kDa,每毫升卵黄液可得到纯度为95.80%的卵黄抗体9.98mg,回收率93.01%;高效价持续时间90 d以上;免疫蛋鸡血清和卵黄中3种特异性抗体的消长规律基本相似,但抗体水平之间存在明显的差异。结论:采用灭活甲型流感病毒复合抗原免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度抗甲型流感卵黄抗体,为卵黄抗体在甲型流感防治中的应用研究奠定了基础。     

抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究

目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。     

用紫外分光测定眼镜蛇毒注射液有效成分

眼镜蛇毒注射液用于治疗风湿痛、慢性头痛、坐骨神经痛、三叉神经痛已二十余年副作用少。但眼镜蛇毒注射液中主要有效成分神经毒素的含量测定方法一直未解决,原来用Foiin法以控制蛋白质的量作为本品的有效含量。蛇类毒素近几年来用于治疗其它疾病逐渐     

乙醇对中华眼镜蛇毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对眼镜蛇毒毒性的影响。方法将眼镜蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,分别于小白鼠皮下注射、口服,将致死量蛇毒皮下注射后的小白鼠立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果小白鼠经皮下注射致死量眼镜蛇毒后,在局部注射50％（或异蛇米酒）、75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用;口服100倍皮下注射致死量眼镜蛇毒未发现有毒性表现,口服经50％乙醇处理后的眼镜蛇毒（100倍皮下注射致死量）未增加小鼠死亡率。结论眼镜蛇毒体外经过乙醇处理后毒性有所下降。口服少量的眼镜蛇毒是安全的。眼镜蛇毒与乙醇混合后口服未见蛇毒毒性增加。     

抗蛇毒血清滴眼治疗眼镜蛇毒致眼外伤

目的观察单价抗眼镜蛇毒血清溶液滴眼治疗中华眼镜蛇毒(Naja naja atra,Chinese cobra)不慎进人眼睛引起外伤中毒性急性角膜炎的临床效果。方法观察1992～2002年我院急诊救治眼镜蛇喷毒或加工蛇毒时不慎蛇毒进人眼睛引起外伤性急性角膜炎8例男性病人,从受伤到就诊时间最快15min,最慢50min。就诊后立即用生理盐水冲洗受伤眼睛,紧接着给予单价抗眼镜蛇毒血清溶液滴人患眼0．5h后,用氯霉素眼药水、可的松(或地塞米松)眼药水交替滴眼,直至痊愈。结果使用抗蛇毒血清滴眼后局部疼痛、异物感等症状在20min内得到缓解,3天内眼睑红肿、结膜充血等角膜炎症状消失。8例病人均治愈,未留有后遗症。结论：单价抗眼镜蛇毒血清滴眼治疗中华眼镜蛇毒致眼外伤是非常方便有效的方法,可能与其能迅速中和眼睛内残留的蛇毒有关。     

中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的动物实验研究

目的对中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的6种治疗方法,通过动物实验进行疗效优劣比较,找出最佳治疗方法。方法用中华眼镜蛇毒制作动物家兔局部组织损伤模型,分别采用6种不同的治疗方法进行局部治疗,观察其疗效。结果6种治疗方法从优到劣依次是：抗蛇毒血清局部注射-糜蛋白酶局部注射-蛇伤药酒外敷-坏死组织早期切除-局部烧灼法-局部组织切开冲洗。结论中华眼镜蛇伤致局部组织损伤的治疗方法应首选抗蛇毒血清局部注射和糜蛋白酶局部注射,其次选用蛇伤药酒外敷．     

眼镜蛇毒抗炎成分研究概况

<正>蛇毒是一种天然的生物学资源,是由蛇毒腺分泌的混合物,主要用于防卫和消化捕获的食物。蛇毒具有特殊的腥味,弱酸,其中含有多种生物活性物质,属于生物毒素。主要含神经毒素、心脏毒素、蛇毒因子和神经生长因子等,不同蛇种分泌的蛇毒成分也有所差异。蛇毒含水量在70%左右,每100ml毒汁中可得干毒20~29g。蛇毒的干物质中90%以上是蛋白质,是其毒性和生物学活性的主要成分。祖国传统医学认为,眼镜蛇及其毒性成分可通经络,祛风湿,并具有强     

舟山眼镜蛇毒抗肿瘤有效组分分离及其抑瘤作用研究初探

目的从舟山眼镜蛇(Naja atraCantor)蛇毒(snake venom,SV)中分离得蛇毒组分,探讨SV及其分离组分的LD50和抑制肿瘤的作用。方法采用凝胶柱层析方法从蛇毒中分离得到了前Ⅰ1、Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ2及Ⅳ等7种组分。采用急性毒性实验、MTT法,研究SV及其7种SV分离组分的LD50和抑制肿瘤的作用。结果 SV经Sephadex G-50层析,可分离为前Ⅰ、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ5个组分,根据峰面积大小排列:ⅢⅡⅠⅣ前Ⅰ。5个组分再经Sephadex G-25柱层析,可获得7个脱盐组分:前Ⅰ1、Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ2及Ⅳ。通过急性毒性实验,明确Ⅳ的毒性最大,其次为Ⅲ2及Ⅲ1,三者的LD50值均低于SV;而Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2的毒性均小于SV,前Ⅰ1几乎无毒。SV组分Ⅲ2和Ⅳ的抑瘤作用最强,在高浓度(20μg/ml)时对实验中的2种人肿瘤细胞的抑制率均达到60%以上。结论从SV中分离得到了前Ⅰ1、Ⅰ1、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅲ1、Ⅲ2以及Ⅳ7种组分;组分Ⅳ毒性最强,依次为Ⅲ2Ⅲ1SVⅡ2Ⅱ1Ⅰ1前Ⅰ1;SV及其7种分离组分对2种人肿瘤细胞株(SGC-7901、A549)的生长抑制有一定的特异性,而不同的SV分离组分对同一肿瘤细胞抑制作用亦有差异。     

舟山眼镜蛇毒CTX1层析分离的流速优化

目的 比较3种流速的CM-Sepharose FF阳离子交换层析柱分离舟山眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒(snake venom,SV)的柱效,为SV的分离纯化提供实验依据.方法 (1)采用3种流速CM-Sepharose FF阳离子交换层析柱分离舟山眼镜蛇蛇毒;(2)反向高效液相法分析各组分的纯度及内标法...     

眼镜蛇毒中一个弱纤维蛋白原水解活性金属蛋白酶的纯化和性质研究

通过蛋白层析从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的纤维蛋白原水解酶atrase A. Atrase A是一个分子量为64.6 kD,等电点为pH 9.6和中性糖含量为4.16%的碱性单链糖蛋白.它具有弱的纤维蛋白原α链水解活性.该活性能被金属螯合剂EDTA, EGTA,1,10 phenanthroline和还原剂DTT完全抑制,而PMSF只能部分抑制该活性,大豆胰蛋白酶抑制剂对其没有影响, 表明atrase A属于金属蛋白酶. Atrase A具有水肿活性和金黄色葡萄球菌抑制活性.它对A549 和K562 细胞没有细胞毒性,但能使贴壁生长的A549细胞解离悬浮. Atrase A没有纤维蛋白、azocasein 、BAEE水解活性,对ADP、胶原诱导的血小板聚集没有明确的抑制作用. 经小鼠皮下注射后没有发现其有出血毒活性.     

眼镜蛇毒对成年大鼠下托Nestin表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对成年大鼠下托巢蛋白（Nestin）阳性神经细胞表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较Nestin阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠下托的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠下托Nestin阳性神经细胞比生理盐水组、正常对照组表达明显增强（P〈0.01）.结论眼镜蛇毒对大鼠下托Nestin表达有上调作用.     

眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回Nestin表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回巢蛋白（Nestin）免疫反应阳性表达的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、眼镜蛇毒组,每组8只。采用SABC免疫组织化学染色法观察齿状回Nestin的表达。结果与正常对照组、生理盐水组相比较,眼镜蛇毒组齿状回Nestin免疫反应阳性表达明显增强（P〈0.01）。结论眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回Nestin的表达有上调作用,可能与促进内源性神经干细胞增殖有关。     

舟山眼镜蛇毒神经生长因子的亲和层析分离

用层析和制备SDS-PAGE法纯化舟山眼镜蛇(Najanajaatra Cantor)毒神经生长因子(NGF),免疫家兔获得抗血清。用辛酸-硫酸铵沉淀法初步纯化IgG,蛋白A-Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,并与CNBr活化的Sepharose4B偶联,采用亲和层析法对舟山眼镜蛇毒神经生长因子进行分离纯化。产物经过SDS-PAGE检测呈一条带,并显示了良好的生物学活性。纯化NGF最大比活性为5.0×104U/mg蛋白,亲和常数为4.35×108L/mol,亲和层析分离NGF得率比传统分离方法得率提高35.2%,该方法为NGF的大量提取提供了技术支持。     

L-amino acid oxidase from Naja atra venom activates and binds to human platelets

An L-amino acid oxidase （LAAO）, NA-LAAO, was purified from the venom ofNaja atra. Its N-terminal sequence shows great similarity with LAAOs from other snake venoms. NA- LAAO dose-dependently induced aggregation of washed human platelets. However, it had no activity on platelets in platelet-rich plasma. A low concentration of NA-LAA O greatly promoted the effect of hydrogen peroxide, whereas hydrogen peroxide itself had little activation effect on platelets. NA-LAAO induced tyros＇mephosphorylationofanumber ofplatelet proteins including Src kinase, spleen tyrosine kinase, and phospholipase C γ2. Unlike convulxin, Fc receptor γchain and T lymphocyte adapter protein are not phosphorylated in NA-LAAO- activated platelets, suggesting an activation mechanism different from the glycoprotein VI pathway. Catalase inhibited the platelet aggregation and platelet protein phosphorylation induced by NA-LAAO. NA-LAAO bound to fixed platelets as well as to platelet lysates of Western blots. Furthermore, affinity chromatography ofplatelet proteins on an NA-LAAO- Sepharose 4B column isolated a few platelet membrane proteins, suggesting that binding of NA-LAAO to the platelet membrane might play a role in its action on platelets.     

眼镜蛇毒注射液对动物心血管系统神经系统及呼吸系统影响的研究

本文报告眼镜蛇毒注射液对动物的神经系统无不良影响;不影响猫、大鼠的血压;注射三种剂量后对家兔、猫、大鼠三种动物的心电图波形不产生影响,可使心律稍有降低,但在２．５小时后恢复正常;眼镜蛇毒注射液低剂量组对动物呼吸频率无不良影响,中高剂量组槿使呼吸频率销有下降,但在２．５小时后恢复正常。