植物生长素通过ABP1促进细胞膜泡的外排运输

为了研究植物生长素结合蛋白ABP1(auxin binding protein 1)对膜泡运输的调控,将烟草生长素结合蛋白基因ABP1 cDNA分别构建成可诱导型表达的过表达和干扰表达载体,并将绿色荧光蛋白GFP与烟草分泌载体膜蛋白SCAMP2(secretory carrier membrane protein 2)融合进行细胞的膜泡标记,转化植物模式细胞BY-2后分别获得了转ABP1和antiABP1的两类膜泡标记转基因细胞系。以雌二醇诱导ABP1、antiABP1表达后,结合生长素处理,通过扫描激光共聚焦观察了细胞的膜泡运输变化。当诱导ABP1在细胞内过量表达后,以吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid,IAA)处理细胞,在细胞核膜及周围内质网膜、细胞质膜以及其他细胞内膜系统都观察到强烈的荧光信号,说明细胞内膜泡运输更为活跃;当诱导antiABP1在细胞内干扰表达时,在细胞核附近维持有较强烈的荧光信号,而细胞质膜及两细胞间隔的荧光信号明显减弱,表明抑制ABP1表达显著抑制了细胞膜泡的外排运输。在ABP1经诱导过表达后,加入IAA处理细胞,在0~6 min时间段内间隔性观察了细胞膜泡对生长素的时间响应,在这段时间内细胞核周围及内膜系统的荧光信号明显增强,细胞质膜的荧光强度没有明显的变化,表明细胞核与内膜系统间存在活跃的膜泡运输,内膜系统向细胞质膜间的外排膜泡运输也逐渐加强。因此,可以证明ABP1参与生长素信号响应,增强细胞膜泡的外排运输。     

一种毫微秒荧光谱去卷积处理方法及其在生物膜研究中的应用

本文介绍了在大分子荧光寿命测量中,为消除测量系统响应时间的影响,对荧光谱进行去卷积处理的一种方法.该方法由实测的响应函数和荧光函数计算出响应矩阵和荧光矩阵,再用单指数函数拟合实测荧光谱的尾部,用迭代法求解.方法比较简单,也比较实用.我们用自制的NSY-1毫微秒荧光谱仪及所设计的微机程序,测试了荧光探剂Merocyanine 540(MC540)标记的脂质体以及重设线粒体H—ATP酶脂酶体的荧光寿命ι.它们的寿命分别为1.63ns和1.30ns.这一明显差别提示测量荧光寿命可作为研究生物膜膜脂—蛋白质相互作用的一种手段.     

DPH标记法研究杀虫剂对二化螟线粒体膜流动性的影响

以DPH为荧光探剂,采用荧光偏振法研究了几种常用农药对二化螟Chilo supperssalis(Walekr)线粒体膜流动性的影响。结果表明,DPH是一种有效的荧光探剂,可以用来研究线粒体膜脂的流动性。不同种类的农药对二化螟线粒体膜的流动性都有一定的影响,但是以三氟氯氰菊酯、高效氯氰菊酯和硫丹影响较大,甲胺磷、三唑磷和克百威影响较小。三氟氯氰菊酯和高效氯氰菊酯可使膜的流动性下降,而硫丹、甲胺磷、三唑磷和克百威则使膜的流动性增强。对膜影响较大的三氟氯氰菊酯和硫丹对膜流动性的影响,还存在一定的剂量-效应关系。另外,膜的流动性受温度的影响很大,在温度分别为17、27、37℃的条件下,在药剂浓度为1×10-4mol/L时,甲胺磷在3个温度下对膜的流动性影响都很小,在误差范围内几乎没有影响;硫丹不同温度下都使膜的流动性增强,而三氟氯氰菊酯则使膜的流动性降低。     

温度对脂质囊泡中单体菌紫质分子结构和光电响应的影响

本实验用人工双分子平板膜系统(BLM)测量了紫膜碎片和在DMPC脂质襄泡膜中的单体菌紫质分子的光电响应以及与温度的关系(处理温度17℃至31℃).温度对紫膜碎片的光电响应影响不大,但对单体菌紫质分子的光电响应有明显影响.用园二色(CD)方法相应地观察了温度对紫膜碎片和单体菌紫质分子在可见波长范围内的CD谱的影响 同样观察到温度对单体菌紫质分子的CD谱有明显影响.两者的影响很可能与脂质襄泡中DMPC的相变温度有关.     

外源性层粘连蛋白对腹水型肝癌细胞内微丝组装和细胞游动的作用

本文研究外源性层粘连蛋白与癌细胞膜上受体结合调节胞内肌动蛋白微丝组装与改变细胞游动之间的关系,以及影响膜上层粘连蛋白受体的侧向扩散运动及膜脂分子流动性变化之间的关系.用各种荧光技术,如荧光显微米,荧光漂白恢复技术和荧光流式细胞术得到了明显的证据.层粘连蛋白与肝癌细胞膜有结合,使分散的腹水肝癌细胞粘连聚集,并膜下周动蛋白微丝增加,当把癌细胞分开则细胞从原位游动很大距离.如不分离粘连的细胞可减少其脱落和转移.层粘连蛋白与受体结合则受体的侧向扩散系数减小,膜脂流动性降低,使膜上分子运动受影响,对癌的生长不利.     

肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能及其影响因素

本文利用激光扫描共聚焦显微镜及荧光漂白后荧光回复技术对人肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能及其影响因素进行了观察。结果发现,体外培养的肾小球系膜细胞在融合生长状况下,相邻两细胞有间隙连接结构形成。不同浓度的血管紧张素Ⅱ对肾小球系膜细胞间隙连接的通讯功能具有促进作用,而甲基强的松龙则具有抑制作用。     

滤光膜对黄檗离体再生能力及其生理生化指标影响

以黄檗（Phellodendron amurense）无菌苗茎段为材料,MS附加1.5 mg·L^-1 BA和0.5 mg·L^-1 NAA为基本培养基,研究了不同滤光膜对黄檗茎段离体再生影响,并对再生过程中生理生化指标变化进行了研究。结果表明,蓝膜对不定芽再生有着明显的促进作用,再生频率达75.4%,平均每个外植体再生的不定芽数为14.7,其次为荧光和黄膜,红膜和绿膜不利于芽的分化。同时发现,蓝膜和荧光有较高的叶绿素含量、较低的chla/b比值。抗氧化酶的活性和可溶性蛋白的含量以蓝膜最高,荧光次之,绿膜最低。     

双歧杆菌的完整肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的影响

目的探讨分叉双歧杆菌的完整肽聚糖（WPG）对巨噬细胞膜脂流动性的影响。方法首先分离培养昆明小鼠腹腔巨噬细胞,然后以WPG刺激巨噬细胞,再用细胞膜磷脂荧光探针标记细胞,最后采用激光共聚焦显微镜结合激光漂白后荧光恢复技术检测巨噬细胞的膜脂流动性。结果WPG刺激组反映小鼠腹腔巨噬细胞膜脂流动性的平均荧光恢复率明显高于对照组（P〈0.01）。结论分叉双歧杆菌的完整肽聚糖可提高巨噬细胞膜脂流动性。     

He—Ne激光照射离体鼠巨噬细胞对线粒体跨膜电势的影响

目的：研究Ｈｅ－Ｎｅ激光照射鼠巨噬细胞对线粒体跨膜电势的影响,及其与激光剂量的关系。方法：用亲脂性阳离子荧光染料Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３对鼠巨噬细胞线粒体作荧光标记,以不同的激光剂量照射,采用图像分析系统（ＩＡＳ）和荧光显微镜观察线粒体跨膜电势荧光强度的变化。结果：低功率Ｈｅ－Ｎｅ激光照射５,１０,１５ｍｉｎ,激光剂量分别为０．６４９,１．３８８和２．０８２Ｊ／ｃｍ＾２,巨噬细胞线粒体跨膜电势荧光     

γ辐射对红细胞膜流动性的影响

我们实验以红细胞膜作为材料,使用ANS和DPH荧光探针测量红细胞膜的荧光强度和偏振度。发现γ辐照红细胞膜剂量从4.6×10~3拉德增至148×10~3拉德,而ANS和DPH的荧光强度随剂量的增加而降低,荧光偏振度随剂量的增加而增加,这些结果表明γ辐照引起红细胞膜流动性降低。但荧光强度的减少并不伴随荧光光谱的变化。ANS与γ辐照的膜结合量也没有改变,因此荧光强度的减少可能是由于在辐照的膜中ANS荧光量子产率的降低。在我们的实验中γ辐射对ANS探针所引起的荧光变化较DPH灵敏,看来γ辐射首先影响膜蛋白。     

缺锌对大鼠红细胞膜生物物理性质的影响

利用激光衍射仪,荧光分光光度法,ＥＳＲ等牲物理技术和缺锌大鼠模型,研究缺锌对大鼠红细胞膜生物物理性质的影响,实验结果表明缺锌使大鼠红细胞的变形能力增大,稳定性降低,红细胞膜脂的流动性和膜蛋白的运动性增加,支持了锌具有维持膜结构和功能和生理作用的理论;为膜结构和功能的改变是缺锌病理变化主要原因的假说提供了实验依据。     

血红蛋白对人红细胞膜脂质分子侧向运动的影响

用荧光漂白恢复法测定了血红蛋白对红细胞膜脂质分子侧向扩散的限制作用.血红蛋白主要是通过和内侧膜脂质的结合而产生影响的,pH6及PH7.7时都显示出效应的存在.和膜结合较强的高铁血红蛋白,表现出对膜脂质侧向扩散亦有较大的限制作用.     

竹红菌甲素对红细胞膜内脂双层的微扰

本文以荧光探针为手段,以人红细胞膜为材料,测量了膜偏振度的改变,荧光探针能量转移,荧光峰的蓝移和甲素激发峰的分裂。结果表明在有竹红菌甲素存在时,红细胞膜偏振度增加,探针荧光强度减小,荧光峰蓝移。甲素浓度增加时,上述现象更加明显,即它们之间有正的相关关系。同时,甲素激发光谱的a带发生分裂。据此,我们认为甲素对红细胞膜内脂双层产生明显微扰,甲素与红细胞膜间存在着相互作用。在甲素浓度较大时,它主要是渗入到红细胞膜脂双层的深层部位(膜脂肪酸链的12—16位)。     

紫膜的紫外荧光及分子内的能量转移

以可见光为作用光照射天然紫膜,紫膜蛋白被280nm紫外光激发所发射的荧光强度比对照略有降低.比较天然紫膜、漂白紫膜与菌蛋白三者的紫外荧光强度,前两者无显著变化,但菌蛋白的荧光强度比天然紫膜的荧光强度大2-3倍,表明生色团对蛋白质荧光可能有猝灭作用.用280nm波长光照射紫膜的暗适应形式,可使其转变成光适应形式.若有羟胺存在,以紫外光照射也可使紫膜漂白.光漂白的作用光谱,其紫外部分与紫膜蛋白部分的吸收光谱重合得很好.上述实验证明紫膜蛋白部分吸收的能量可以转移到生色团上,即紫膜存在分子内的能量转移     

DPH标记细胞膜的动力学与膜脂流动性的荧光偏振校正测量

用稳态荧光技术测得经过校正的荧光成分,由此算出用DPH标记的细胞膜的偏振度。方法是作荧光偏振值在随时间变化的曲线,将其外推至零标记时间求出该时间的荧光偏振值。用此法测定了艾氏腹水癌细胞的膜流动性。结果表明流动性比用整个细胞测得之值小,说明膜脂的有序程度和包装密度比胞浆中的脂大。实验结果和用三房空模型分析所得的理论值符合较好,提示荧光探剂的标记过程主要受分子扩散所控制。     

用荧光漂白恢复技术研究竹红菌乙素在小鼠肝癌细胞内的扩散过程

利用竹红菌乙素自身的荧光特征,在ＦＰＲ装置上直接测定了乙素在ＡＨ细胞内的侧向扩散系数和荧光漂白的恢复率。实验结果表明乙素在ＡＨ细胞内的扩散系数Ｄ＝３．２×１０＾－９ｃｍ＾２／ｓ＾－１荧光漂白恢复比率Ｒ＝９７．８％,上述实验说明乙素在细胞膜内与生物大分子之间没有形成共价键形式的结合状态。     

脂肪族类两亲物对肌浆网膜脂区结构的影响

C18饱和脂肪酸和胺可增加DPH标记肌浆网(SR)的荧光偏振度,而C18单不饱和脂肪酸。胺和醇则使其偏振度下降。加入MgATP,可除去单不饱和脂肪胺引起的DPH标记的荧光偏振度下降,并使之高于未加脂肪胺的对照水平。饱和酸及相应胺可使标记于膜脂中层和深层的TAS和12AS的荧光偏振度上升,不饱和酸及相应胺和醇仅使12AS荧光偏振下降。说明脂肪族类两亲物对SR膜流动性的影响与脂肪链饱和程度有关。饱和者主要使膜中、深层流动性下降.不饱和者主要使膜深层流动性升高。     

几种不同条件下竹红菌甲素的光谱特性

本文报道了不同浓度竹红菌甲素的吸收光谱.甲素在不同比例的二甲基亚砜与HEPES溶液中的荧光光谱,试验了甲素与几种生物物质的结合,说明脂溶性的甲素能与类脂很好的结合,甲素光照后对红细胞膜的损伤大于白蛋白和色氨酸,说明生物膜是甲素光敏作用较好的靶.     

外源胆固醇对水稻根端线粒体膜流动性的影响

应用荧光探剂 1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)观察外源胆固醇对水稻极端线粒体膜流动性的影响。结果表明,无论外源胆固醇通过水培根系吸收或是直接添加给予水稻根端线粒体,都能使DPH与线粒体结合后的荧光强度减弱,使荧光偏振度和微粘度降低,增加水稻根端线粒体膜流动性。     

膜脂状态在Mg~2+对线粒体H~+-ATP酶影响中的作用

对猪心线粒体H-ATP酶体系中膜脂在Mg~(2 )的激活功能中起极重要的作用。通过DPH外源荧光探针和5-NSESR探针测膜脂表层Mg~(2 )作用影响的研究表明Mg~(2 )首先对膜脂作用,增加膜脂的有序性。TU颗粒和复合体的酶、色氨酸残基内源荧光偏振度测定的结果表明Mg~(2 )可进而影响内嵌蛋Fo,最终导致F_1上功能位点的构象和功能的变化。但膜脂的原始状态对Mg~(2 )起作用是重要的。