测定粒单系集落刺激因子的~3H-TdR掺入的微量培养方法

在小鼠骨髓细胞体外微量液体培养中,通过观察DNA合成时~3H-TdR掺入量的变化,来测定粒单系祖细胞的增殖状态。实验结果表明:此方法具有培养周期短,操作较简单,节省培养材料和被测样品量少等优点。在与体外半固体琼脂CFU-GM培养法相配合中,能正确反应出被测样品对粒单系祖细胞的增殖状态和增殖能力。     

一种测量细胞面积的显微光度方法

细胞生物学研究中广泛应用显微分光光度计测定单个细胞中特定物质的含量。通常在测含量的同时还要求获得单个细胞内此种物质分布的面积。对形状规则的被测物质,一般常用目镜测微尺测出长度,再算出面积。但这种方法不仅费时,费力,而且不适于测量形状不规则的单个细胞。我们在采用双区法,在测量物质含量的同时,可以很方便地测出不规则形状细胞內被测物质所占的面积。显微分光光度计测量物质含量的方法中常用的有两种——双区法和双波法。在公式推导中有一项被测物面积:B(1-F),其中(1-F)是测量光阑面积中含有被测物部份所占的百分数,B是测量光阑面积。在双区法中(1-F)=(1-T)/(1-T~*)(其中T~*是测量     

一种测量细胞面积的显微光度方法

细胞生物学研究中广泛应用显微分光光度计测定单个细胞中特定物质的含量。通常在测含量的同时还要求获得单个细胞内此种物质分布的面积。对形状规则的被测物质,一般常用目镜测微尺测出长度,再算出面积。但这种方法不仅费时,费力,而且不适于测量形状不规则的单个细胞。我们在采用双区法,在测量物质含量的同时,可以很方便地测出不规则形状细胞内被测物质所占的面积。显微分光光度计测量物质含量的方法中常用的有两种——双区法和双波法。在公式推导中有一项被测物面积:B(1—F),其中(1—F)是测量光阑面积中含有被测物部份所占的百分数,B是测量光阑面积。     

精浆酸性磷酸酶微量检测法的研究

世界卫生组织（ＷＨＯ）１９９２推荐的精浆酸性磷酸酶（ＡＣＰ）测定的方法国内尚未见报道。本文在ＷＨＯ方法基础上结合微量测定,即用９６孔板替代比色杯,试液总量减少至３００－５５０ｕｌ;用酶联免疫检测仪替代分光光度计,可连续比色,直接打印结果,９６人份样品比色仅需５分钟。该法操作简便、快速、样品量、试剂量少、重复性、直线线性好,适合实验室的精液分析。     

一种检测聚丙烯酰胺凝胶中蛋白质免疫活性的方法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)已成为最有效的分离蛋白质手段。在免疫学研究中,经常遇到的问题是从聚丙烯酰胺凝胶中回收被分开的蛋白质组分,然后测其免疫活性。从聚丙烯酰胺凝胶中回收蛋白质的方法已有许多报道,其中以Hartvig的方法为最简便。该法以溴酚蓝为指示剂,利用电泳系统本身使     

一种改进的动物线粒体DNA提取方法

线粒体DNA(mtDNA)已被广泛用于动物群体遗传学和进化生物学的研究,并取得了许多有意义的结果。有效的mtDNA提取方法无疑是开展这方面研究的前提。关于动物mtDNA的提取方法,国内外已有不少报导。概括起来,可分为:1)氯化铯超速离心法,2)柱层析法,3)DNase法,4)碱变性法。本文报道了一种改进的碱变性提取法,与其它方法相比,具有应用范围广、简便、经济等优点。     

树木外生菌根真菌：美味红菇对几种病原菌活性的拮抗作用

<正> 本文报道树木外生菌根真菌:美味红菇(Russula delica)对树木、农作物、及人体的12种病原菌拮抗作用的试验结果。经平皿筛选测试表明,美味红菇对所测病原菌株的活性均有明显的拮抗作用。关于美味红菇的拮抗作用,目前国内外尚未见报道,现将其初步抗菌筛选结果报道如下: 材料和方法 (一)材料 1.待测菌根真菌:彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius);美味红菇(Russula delica);劣味乳菇(Lactarius insulsus);点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus);831菌。     

四季桔试管苗基因组DNA微量提取方法

本试验以四季桔试管苗为试材,进行基因组DNA微量、快速提取方法的研究。结果表明:采用改良CTAB法,仅需20mg样品、2.5h就能获得高纯度、高质量的DNA,这是目前木本植物样品量最小的DNA提取方法;提取的DNA能直接被限制性内切酶BamHⅠ酶切,也能进行PCR扩增,可用于进一步的分子生物学研究。     

合成寡核苷酸的简易纯化方法

由手工或机器合成寡核苷酸到使用它们的过程中,纯化步骤经常成为速度限制因素,因为目前采用的常规纯化方法比较繁复,特别当样品数和每份样品量多时,往往难以满足工作的需求。有鉴于此,1986年Lloyd等报道了一个简易的纯化方法,似可克服上述不足。笔者从1986年以来曾多次参照Lloyd等法(仅在某些细节上略作改变)纯化由合成机合成的脱氧寡核苷酸片段(其长度为30-mer—50-mer),效果不错,在此作一介绍,以供参考。     

酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

蛋白质定量方法虽然较多,但有些方法操作费时,如凯氏定氮法和Lowry氏法;有些方法需要的样品量较大,如用751型分光光度计进行紫外线吸收法测定;有些方法灵敏度不高,如双缩脲法。为弥补上述不足,我们试用酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,现将实验报告如下。     

幽门弯曲菌的中草药敏感试验

自从Warren和Marrshall报道幽门弯曲菌(Campylobacter Pyloridis 以下简称CP)感染与胃炎和消化性溃疡密切相关以来,国内外相继有类似报道,但中草药对该菌抗菌作用的研究尚未见报道,本文通过预试选择20种中草药和两种方剂对50株幽门弯曲菌进行抑菌和杀菌试验,现报告如下。 1.材料与方法 1.1 药物来源及药液制备中草药购自当地医药公司。将被测单味药或复方药分别置于1000ml烧杯中.加10倍蒸馏水浸泡3小时,以文火煎煮30分钟,过滤于烧杯中。剩余药渣再加适量蒸馏水进行第二次煎煮,过滤。两次药液合并后以蒸馏水补足或以文火浓缩至药液体积与药物原重量相等,其浓度即为100％(W/V),灭菌备用。     

应用酶联免疫吸附试验诊断先天性风疹病毒感染

妊娠期风疹病毒感染的危害性,国内外均有报道,我们在开展风疹血清流行病学调查的基础上,试图以酶免疫吸附法对风疹病毒感染作出特异性诊断。     

泥河湾盆地上沙嘴石制品

泥河湾盆地上沙嘴出土石制品34件,包括石核、石片、石器和断块,并伴随纳玛象头骨与马和犀等的牙齿化石。上沙嘴石制品最初发现于1972年,报道后在国内外引起强烈反响。1980年该地点的时代被修改为晚更新世。近年来的考察再次表明,上沙嘴地点就位于下更新统泥河湾组,且得到了古地磁测年为距今160~170万年的确认。     

TA29—Barnase基因导致油菜雄性不育的研究

利用杂种优势可以使作物达到高产优质的目的,而杂种优势利用的主要途径之一是作物雄性不育性的利用。由于传统育种方法的费时费力,所以通过基因工程法来快速获得作物雄性不育系,已被国内外学者广为重视,并有了相关的报道[1～3]。但这些转基因不育系很少是生产品种,其不育性稳定情况也少有探讨。本文通过根癌农杆菌介导法,将TA29-Barnase雄性不育基因转化到油菜生产品种中,并就其分子学和生物学检测及其不育性稳定情况作一简要报道。1　材料和方法1.1　植物材料及农杆菌菌株植物转化材料为优质高产的甘蓝型油菜(Brassicanapus)生产品种“浙…     

显微分光光度计测量细胞内物质含量的两种方法——双区法和双波法的比较

一、前言根据显微分光光度计测得被测物质的透射光、反射光、荧光等的光强可确定物质的含量。其中透射法的原理是基于朗伯-比尔定律。此定律在被测物质均匀分布的情况下才能成立。化学样品很易满足这一条件。但生物样品,特别是细胞样品由于其所含物质的不均匀分布及其形状不规则,满足不了此种条件,测量结果必然产生误差。为消除这一误差,人们引入了双区法、双波法和扫描法。本文只就前两种方法     

采用滤袋技术快速测定杜仲叶片中杜仲胶含量

采用滤袋技术依据减重法原理测定了杜仲叶片中杜仲胶含量。通过正交设计比较了不同滤袋孔径、样品量和提取时间对提取效果的影响,并采用该方法比较了同一产地不同品种、同一品种不同产地的杜仲叶中胶含量的差异。结果表明,不同孔径的提取效果差异显著(F=3.685,p=0.043),样品量和提取时间对提取效果无显著影响。适宜的测定条件是样品量0.1 g、滤袋孔径25μm/10μm、提取时间60 min。滤袋法测得的‘华仲6号’胶含量为4.49%,传统碱煮法为3.64%。同一产地不同品种、同一品种不同产地的杜仲叶中胶含量差异极显著(F=92.689,P=0.001),其中郑州的‘华仲11号’含量最高,平均为7.00%,灵宝的‘华仲12号’含量最低,为4.28%。生产杜仲胶的原料应标明品种、产地以及树龄,这样有助于合理评估预期产量和生产成本。     

四种真菌油脂提取方法的比较研究

采用索氏法、超临界CO2萃取法、酸热法和有机溶剂法分别提取雅致枝霉、拉曼被孢霉、少根根霉、畸雌腐霉和橙黄红酵母的油脂,从样品要求、最小样品量、仪器要求、处理样品能力及油脂得率等方面对4种提取方法进行综合评价,并对索氏法、超临界CO2萃取法和酸热法提取的雅致枝霉油脂的脂肪酸组成进行气相色谱分析。索氏法的油脂得率最高,但耗时较长;超临界CO2萃取法和酸热法的油脂得率相近,较索氏法略低,但酸热法更为简便,单位时间内样品处理能力强;有机溶剂法提取效果最差。我们建立的酸热法是一种适合油脂及多水饱和脂肪酸高产菌株筛选的简便、有效的真菌油脂提取方法。     

基于ATP的微菌含量样品快速检测方法的研究

本实验分别采用ATP生物发光法和营养琼脂平板培养法对血透用水中微量细菌总数进行检测,针对ATP检测方法在微菌含量样品检测中的应用限制,设计并实现了新的集菌方式和进样方式。首先将被测样品中的微量细菌浓缩到集菌膜上,再原位使其充分裂解,然后取微量液体进行测试,这样解决了现有ATP生物发光监测仪微量进样测试要求的弊端。通过这种改进,成功实现了利用ATP发光法快速检测微量浓度菌液。利用该检测装置和测试方法,我们尝试了检测0-100CFU/mL的被测样品,并用平板培养法进行定标,实验结果表明:在2—100CFU/mL被测范围内,其线性度和灵敏度较好,相关系数达到0.99887。这就为微菌含量样品快检领域提供了新的可尝试的实验方法和机遇。     

改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase简称SOD)的测活方法很多。目前,国内外采用的连苯三酚自氧化法,其测定缓冲液均用HCl配制,而Cl~-对SOD有一定的抑制作用。为了提高SOD对超氧阴离子(O_2~-)的竞争能力,本法改用K_2HPO_4KH_2PO_4缓冲液。实验表明,改良法不仅比在TrisHCl缓冲液中测定灵敏度提高了50％,而且因减少了SOD的加入量,使酶被O_2~-所饱和。实验还表明,SOD在自氧化速率30—65％范围内,酶的加入量与抑制率成线性关系,见图1。     

四种真菌油脂提取方法的比较研究*

采用索氏法、超临界CO₂ 萃取法、酸热法和有机溶剂法分别提取雅致枝霉、拉曼被孢霉、少根根霉、畸雌腐霉和橙黄红酵母的油脂 ,从样品要求、最小样品量、仪器要求、处理样品能力及油脂得率等方面对 4种提取方法进行综合评价 ,并对索氏法、超临界CO₂萃取法和酸热法提取的雅致枝霉油脂的脂肪酸组成进行气相色谱分析。索氏法的油脂得率最高 ,但耗时较长 ;超临界CO₂ 萃取法和酸热法的油脂得率相近 ,较索氏法略低 ,但酸热法更为简便 ,单位时间内样品处理能力