雅氏瓦螨对氟胺氰菊酯的抗性机理初探

用有效成分为1000μg/L的氟胺氰菊酯药液对雅氏瓦螨Varroa jacobsoniOudemans敏感个体的腹部表皮进行穿透性测定,结果表明药液无法通过表皮起毒杀作用。通过添加酶抑制剂多功能氧化酶(PBO)和酯酶(DEF)的增效测定,结果显示PBO在抗性和敏感螨中分别增加毒效为3.27和1.80倍;而DEF为3.23和1.67倍。反映在抗性蜂螨的抗药性与多功能氧化酶的活性有密切相关,也与酯酶活性有关。对抗性螨和敏感螨的羧酸酯酶的活力测定,显示出在抗性螨中酶活指数高140%以上。同时对酯酶电泳进行扫描,也发现抗性螨与敏感螨的峰值存在差异。     

甜菜夜蛾对氯氟氰菊酯抗性的表皮穿透机理

用三种方法测定了采自南京江浦的甜菜夜蛾Spodoptera exigua对氯氟氰菊酯的抗性。结果表明,抗性水平的次序为3龄幼虫点滴法（5 499.5倍）和5龄幼虫点滴法（3 973.2倍）＞3龄幼虫浸叶法（1 041.6倍）＞5龄幼虫叶片夹毒法（24.7倍）,因此该品系触杀毒力的抗性水平至少为胃毒毒力LD50的160倍。用¹⁴C标记氯氟氰菊酯测定甜菜夜蛾抗性和敏感品系5龄幼虫表皮穿透率结果表明,处理后8h,抗性品系5龄幼虫的表皮穿透率仅为敏感品系幼虫表皮穿透率的55.5%。证实表皮穿透率的降低是产生抗性的一个重要机理。     

狄斯瓦螨与蜜蜂的寄生关系

蜜蜂Apis spp.是重要的经济昆虫,也是研究最为深入和广泛的社会性昆虫。狄斯瓦螨Varroa destructor是蜜蜂的体外寄生虫,是对西方蜜蜂Apis mellifera蜂群健康危害最为严重的生物因子。近十多年来,由于全球蜂群损失现象严重,而同时以蜜蜂为代表的授粉昆虫的健康直接关系到农业生产和生态安全,关于狄斯瓦螨与蜜蜂的寄生关系的研究受到极大关注。作为社会性昆虫的一种体外寄生虫,狄斯瓦螨不仅需要适应蜜蜂个体的生长发育,借助蜜蜂化蛹期间的封盖期完成繁殖,同时还要能够逃避蜜蜂社会性行为的清理。本文从狄斯瓦螨的生物学特性以及其与寄主间的互作关系等方面进行论述,以期进一步理解寄生虫-无脊椎动物寄主(特别是社会性昆虫寄主)的相互作用,为寄生虫病学研究提供借鉴。     

狄斯瓦螨对杀螨剂抗性机制的研究进展

狄斯瓦螨Varroa destructor是严重危害西方蜜蜂Apis mellifera的主要寄生螨之一,由于杀螨剂长期大量、单一和连续使用,狄斯瓦螨对杀螨剂的抗性发展日趋严重,探明狄斯瓦螨抗性机制对于治理狄斯瓦螨具有重要意义。狄斯瓦螨抗性形成受遗传因素、人为操作因素及其他生态因素的影响,其抗性机制与化学杀螨剂的种类有关,目前研究较多的是靶标不敏感性机制和解毒代谢增强机制,对拟除虫菊酯类杀螨剂抗性机制研究较为透彻,而对有机磷类和甲咪类杀螨剂抗性机制研究有限。本文基于文献,阐述了狄斯瓦螨对拟除虫菊酯类、有机磷类和甲咪类杀螨剂抗性机制的最新研究进展,讨论了抗性治理的最新研究成果及该领域未来的研究方向,以期为狄斯瓦螨有效治理、杀螨剂的安全有效使用及新型杀螨剂开发等研究提供参考。     

蜜蜂抗狄斯瓦螨机制的研究进展

狄斯瓦螨Varroa destructor已蔓延至世界各地,给养蜂生产带来巨大挑战,被认为是世界养蜂业的主要威胁。因此,抗螨机制的研究和抗螨蜂种的培育显得尤为重要,而掌握蜜蜂的抗螨机制则是成功培育抗螨蜂种的前提条件。本文从行为、生理及分子机制等多个不同角度对国内外蜜蜂抗狄斯瓦螨机制研究的最新进展进行了详细的阐述。尤其是从分子水平研究蜜蜂的抗螨机制对选育抗螨蜂种具有重要意义,将为利用分子遗传辅助标记筛选方法和先进的生物工程技术并结合传统的育种手段成功培育出具有抗螨性能的优良蜜蜂品系奠定基础。     

蜜蜂寄生螨—狄斯瓦螨的研究进展

狄斯瓦螨Varroa destructor是对世界养蜂业危害最大的蜜蜂寄生虫,严重危害蜜蜂封盖幼虫、蛹和成蜂,并携带和传播蜜蜂病毒,造成蜂群生产力严重下降乃至全群毁灭。狄斯瓦螨的有效防治措施的研发有赖于对其研究进展的了解,本文综述了以下3方面的研究概况:1)狄斯瓦螨的繁殖特性;2)对蜜蜂的危害;3)主要防治方法。以期为蜂螨相关的研究和应用奠定基础。     

中草药精油对蜜蜂狄斯瓦螨的熏杀效果

在实验室条件下测定10种中草药精油对蜜蜂狄斯瓦螨Varroa destructor Anderson&Trueman的熏蒸效果,通过测定中草药精油对蜜蜂和螨的毒性,筛选出具有杀螨活性而对蜜蜂较安全的中草药精油。结果表明:中草药精油对蜜蜂都有一定的毒害;而在对蜜蜂无毒性的剂量下,48h时茴香油、丁香油、肉桂油分别能引起92.5%、54%和12%的螨死亡,显著高于对照组(P<0.05);根据初步筛选结果,选择茴香油和丁香油进行进一步毒力测定,结果表明48h时茴香油对螨的LD50为0.949μL,蜜蜂的LD50为4.033μL;丁香油对螨的LD50为0.795μL,蜜蜂的LD50为1.965μL。茴香油在48h时有着较高的选择比(蜜蜂的LD50/螨的LD50=4.250);GC-MS鉴定茴香油最主要成分是茴香脑(占总成分的88.72%),丁香油的主要成分是丁香酚(68.28%)和石竹烯(20.79%)。可见,茴香油和丁香油在控制狄斯瓦螨的应用上具有很大潜力。     

斜纹夜蛾对氯氟氰菊酯不同抗性水平与解毒代谢酶的关系

为探讨斜纹夜蛾Spodoptera litura (Fabricius)对氯氟氰菊酯抗性水平与解毒代谢酶之间的关系, 以泰安郊区对氯氟氰菊酯抗性为543.7倍的斜纹夜蛾田间种群为材料, 研究了药剂汰选与否的抗性动态及不同抗性水平的解毒代谢酶活性变化。结果表明: 室内继代饲养至第30代, 不接触任何药剂的抗性下降至102.3倍, 用氯氟氰菊酯汰选28代后, 抗性上升到3 049.3倍, 而在药剂汰选至第14代, 抗性已至2 593.8倍时, 停止用氯氟氰菊酯汰选, 到第30代的抗性又降至786.3倍。表明斜纹夜蛾抗氯氟氰菊酯田间种群, 在无药剂选择压力时抗性水平会显著下降, 继续给予药剂汰选会使抗性水平显著上升。检测斜纹夜蛾田间种群5龄幼虫中肠酯酶和谷胱甘肽S-转移酶活性, 发现与敏感种群有显著性差异, 而多功能氧化酶O-脱甲基活性与敏感种群的差异不明显; 给予氯氟氰菊酯药剂汰选, 酯酶、谷胱甘肽S 转移酶和多功能氧化酶O-脱甲基3种酶的活性均呈显著增加趋势; 停止用氯氟氰菊酯汰选后, 3种酶的活性又呈显著下降趋势; 不接触任何药剂, 随着饲养世代数的增加, 其酯酶和谷胱甘肽S-转移酶的活性也呈下降趋势。结果提示斜纹夜蛾幼虫酯酶、谷胱甘肽S-转移酶和多功能氧化酶O-脱甲基活性的提高是斜纹夜蛾对氯氟氰菊酯抗性上升的重要原因。     

甜菜夜蛾不同世代对氯氟氰菊酯抗性减退及多功能氧化酶系活性变化

在室内用人工饲料连续饲养和未用药剂筛选条件下,测定了采自田间对氯氟氰菊酯产生高水平抗性甜菜夜蛾Spodoptera exigua (Hübner)种群的抗药性及其多功能氧化酶系活性的变化情况。用点滴法测定不同世代3龄幼虫抗性结果为：室内F₁代LD₅₀值为 0.9672 μg/头,抗性倍数为4 836.0倍,以后各世代逐渐降低,至F₄₃代LD₅₀值为0.0325μg/头,抗性倍数为162.5倍,抗性水平下降了29.8倍。用浸叶法测定不同世代3龄幼虫抗性结果为：室内F₁代LC₅₀值为185.6 mg/L,抗性倍数为964.7倍,以后各世代也逐渐降低,至F₄₃代LC₅₀值为9.2 mg/L,抗性倍数为47.8倍,抗性水平下降了20.2倍。与敏感品系相比,该田间种群室内饲养至F₄₃代仍处于较高的抗性水平,抗性减退缓慢,很难恢复到敏感水平。测定甜菜夜蛾田间种群室内F₂、F₂₀和F₄₁代及敏感品系5龄幼虫中肠微粒体甲氧试卤灵-O-脱甲基酶、乙氧试卤灵-O-脱乙基酶、芳香基羟基化酶及艾氏剂环氧化酶活性,结果表明：与敏感品系相比,田间种群甲氧试卤灵-O-脱甲基酶和艾氏剂环氧化酶的活性仅F₂代显著较高,F₂₀和F₄₁代差异不显著,乙氧试卤灵-O-脱乙基酶和芳香基羟基化酶的活性F₂、F₂₀和F₄₁代均显著较高。结果提示甜菜夜蛾抗性水平可能与其体内微粒体多功能氧化酶系活性有密切关系。     

大蜂螨对一些气味物质的趋性

狄斯瓦螨Varroa destructor Anderson & Trueman是意大利蜜蜂Apis mellifera Spinola的主要外寄生螨。雌成螨在幼虫巢房封盖前不久侵入幼虫巢房,并开始繁殖为害。从雌成螨在一个很短的时间内进入蜜蜂幼虫巢房,以及雄蜂幼虫巢房蜂螨的寄生率明显高于工蜂幼虫巢房的现象,表明蜜蜂幼虫体表一些信息素(semiochemicals)可能起着重要的引诱作用。作者对与大蜂螨相关的19种气味物质进行筛选,并对封盖前工蜂幼虫和雄蜂幼虫表皮挥发物进行气谱及气-质联谱测定。结果表明:雄蜂6龄幼虫对大蜂螨的引诱作用显著高于丁香水等10种气味物质。工蜂和雄蜂末龄幼虫体表挥发物的共有组份是9-二十三烯(C23H46),但它在雄蜂幼虫中所占的比例要明显高于工蜂幼虫。工蜂幼虫的特有主要组分是十八烷(C18H38)和9-甲基十九烷(C19H40);而雄蜂幼虫的特有主要组分是二十五烷(C25H52)和二十三烷(C23H48)。     

Genes important for survival or reproduction in Varroa destructor identified by RNAi

The Varroa mite,(Varroa destructor),is the worst threat to honey bee health worldwide.To explore the possibility of using RNA interference to control this pest, we determined the effects of knocking down various genes on Varroa mite survival and reproduction.Double-stranded RNA (dsRNA)of six candidate genes (Da,Pros26S,RpL8, RpL11,RpPO and RpS13)were synthesized and each injected into Varroa mites,then mite survival and reproduction were assessed.Injection of dsRNA for Da (Daughterless)and Pros26S (Gene for proteasome 26S subunit adenosine triphosphatase)caused a significant reduction in mite survival,with 3.57%±1.94% and 30.03%±11.43% mites surviving at 72 h post-inj ection (hpi),respectively.Control mites injected with green fluorescent protein (GFP)-dsRNA showed survival rates of 81.95%±5.03% and 82.36 ±2.81%,respectively. Injections of dsRNA for four other genes (RpL8,RpL11,RpPO and RpS13)did not affect survival significantly,enabling us to assess their effect on Varroa mite reproduction.The number of female offspring per mite was significantly reduced for mites injected with dsRNA of each of these four genes compared to their GFP-dsRNA controls.Knockdown of the target genes was verified by real-time polymerase chain reaction for two genes important for reproduction (RpL8,RpL11)and one gene important for survival (Pros26S). In conclusion,through RNA interference,we have discovered two genes important for mite survival and four genes important for mite reproduction.These genes could be explored as possible targets for the control of Varroa destructor in the future.     

蜜蜂巢房大小影响狄斯瓦螨的繁殖行为

在具有相同类型幼虫的雄蜂和工蜂巢房中,人工接入狄斯瓦螨Varroa destructorAnderson&Trueman,比较巢房大小不同,对于螨繁殖的影响。结果显示:狄斯瓦螨在具有工蜂幼虫的工蜂房(WW)中的繁殖率为94.4%,而在具有工蜂幼虫的雄蜂房(WD)中繁殖率只有27.7%,差异极显著。在具有工蜂幼虫的工蜂房中,每只雌螨产出后代的平均数为3.35±1.56只;在具有工蜂幼虫的雄蜂房中每只雌螨产出后代的平均数为0.49±0.93只,差异极显著。表明:在具有相同类型幼虫存在的情况下,狄斯瓦螨喜欢较小的巢房,狄斯瓦螨在较小巢房中的繁殖能力明显高于较大的巢房。     

狄斯瓦螨和蜜蜂病毒对意大利蜜蜂蜂群越冬的影响

越冬期是蜂群损失最主要的阶段.通过比较分析45个意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica蜂群在繁殖越冬蜂前的狄斯瓦螨Varroa destructor寄生率和病毒感染情况、越冬表现及越冬期存活蜂群的病毒感染情况等,探究与越冬期蜜蜂健康紧密相关的影响因素.结果表明,繁殖越冬蜂前蜂群的狄斯瓦螨寄生率与蜜蜂...     

蜜蜂幼虫血淋巴游离氨基酸和微量元素含量的差异对其抗螨特性的影响

重新界定的外寄生螨类---狄斯瓦螨Varroa destructor(Anderson and Trueman),严重危害全世界的西方蜜蜂Apis mellifera。但是对其原始寄主东方蜜蜂Apis cerana不构成可见的危害。在西方蜜蜂群中,狄斯瓦螨在雄蜂房和工蜂房都能进行繁殖。在其亚洲的原始寄主东方蜜蜂群中,它们可以寄生于雄蜂和工蜂,但在工蜂房中不育。蜜蜂的血淋巴是狄斯瓦螨生存和繁殖需要摄取的惟一食物来源,推测血淋巴中的某种物质含量会影响狄斯瓦螨的繁殖。对中华蜜蜂Apis ceranaFabricius和意大利蜜蜂ApismelliferaL.工蜂和雄蜂封盖幼虫血淋巴中游离氨基酸和与营养有关的微量元素含量进行了比较,发现其存在明显差异,并推测这些差异与东方蜜蜂抗螨能力强有关。     

Characterization of microsatellite markers for the apicultural pest Varroa destructor (Acari: Varroidae) and its relatives

Sixteen microsatellite loci were isolated and characterized for Varroa destructor using two procedures to screen genomic libraries. Together with those previously designed, they provide useful markers for the study of this harmful apicultural pest whose populations on Apis mellifera are poorly variable. Observed variability has been expressed as the number of alleles because heterozygosity is only rarely present. The defined primers have been assayed on another species of the same genus (V. jacobsoni) and almost half of them successfully cross‐amplified and revealed polymorphism. These results suggest that the microsatellites isolated here should prove useful for population studies in different Varroa species.