细胞工程

910734 杂交瘤生长的局限性:能量代谢和氨生成的作用[英]/Newland,M.…//Cytotechnology.-1990,3(3).-215～229[译自DBA,1990,9(15),90-09008]综述了杂交瘤细胞生长过程中的能量代谢、氨生成及氨对细胞生长的抑制作用:(a)概括了培养哺乳动物细胞的重要代谢途径,(i)葡萄糖代谢,(ii)谷氨     

细胞工程

900623 分泌抗口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株[英]/Butchaiah, G. …∥ Acta Virol.-1989,33(2).-121～130[译自DBA,1989,8(15),89-09176] 将伍合在弗氏完全佐剂的20～30μg口蹄疫病毒(FMDV)抗原经皮下或皮内免疫5～7周龄的BALB/c小鼠,然后,在第4和第12周再用伍合在弗氏不完全佐剂中的等量的抗原经皮下加强注射2次。4周     

人内细皮胞培养物上清液(HECS):一种杂交瘤的生长因子

<正>人内皮细胞培养物上清液(HECS)对杂交瘤细胞有强烈的促进生长活性:融合后杂交瘤的产量,比在饲养细胞(如小鼠巨噬细胞和脾细胞)存在的条件下至少增加两倍以上。而且,当杂交瘤在单细胞水平培养时,HECS能代替饲养细胞,并大大提高杂交瘤的增殖能力。此外,人内皮细胞的存在延长了产生人免疫球蛋白的人-鼠杂交瘤的稳定性。因为杂交细胞在体外培养时是难以     

动物细胞培养及单克隆抗体

962115 对CD3-专性单克隆抗体进行PCR克隆和定序[英]/Thirion, S.…//Immunogenetics. -1995, 43(3).-167～168[译自DBA,1996,15(7),96-03879] 使被免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了CD3-专性单克隆抗体。从总RNA开始,从产抗CD3抗体的杂交瘤中制备cDNA。分离了     

小鼠杂交瘤细胞在双口滚动培养瓶中的生长及抗体分泌

研制了一种新的滚动式细胞培养装置(rolling culture system)和双口滚动瓶(double-mouthed roller).利用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞作为检验材料,对培养在双口滚动培养装置及常规T形瓶中的细胞生长和单抗分泌进行了比较.在滚动培养装置中(转速2～10 r/min)培养的细胞生长和抗体分泌皆增加30%以上.不同浓度的血清对细胞生长和抗体产量有一定影响,含5%血清的培养液中生长的杂交瘤细胞单抗产量最高;添加少量明胶可增加细胞生长和抗体产量.     

动物细胞培养及单克隆抗体

921346开发新的无蛋白无激紊培养基培养杂交容〔英叮Toyoda一K。…了Agrie.Biol.C丘em一1991,55(6)一1631~1633[译自DBA,1091,10Qs),91一10670二 配制一种新型不含蛋白和激素的培养基PHF,用以大规模培养小鼠和人杂交瘤。杂交瘤有IgGI小鼠一小鼠杂交瘤AZ(融合配偶体:x63.653,专性抗原:a一胎蛋白)、C7(NS~1,癌胚抗原)17(NS一i,IgE),以及IgM人一人杂交瘤HB4C6 (NAT一30,肺癌)。最佳培养基是在E一RDF(Kyokuto Seiyaku Kogyo,日本)基本组分中添加50声M柠檬酸铁、0.5产M亚油酸、10产M牛磺酸、10。井M乙醇胺和25nM亚硒酸盐。用P…     

分泌白细胞介素—2T细胞杂交瘤株的建立

本研究利用T淋巴细胞杂交瘤技术建立了能持续稳定地分泌白细胞介素—2(IL—2)的小鼠T淋巴细胞杂交瘤株,首先用刀豆蛋白A(ConA)活化BALB/C小鼠的脾细胞,然后使其与小鼠胸腺瘤细胞BW5147融合,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法从261个杂交克隆中筛选出至少30个分泌IL—2的T细胞杂交瘤株,对选出的一个杂交瘤细胞株FB4作了进一步研究,该杂交瘤株的染色体平均44(42～47)条,经传代培养、冻存和复苏后仍能持续稳定地分泌IL—2,用含2％小牛血清的DMEM完全培养基大量培养FB4杂交瘤细胞,制得含IL—2的培养上清,再经沉淀和凝胶过滤等步骤制得了部分纯化的IL—2,用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)技术检出了IL—2成分,其表观分子量(MW)约28KDa。     

番茄环斑病毒单克隆抗体的制备

以纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)为抗原,注射免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,经多次细胞筛选及克隆化,获得3株(A8、B7和G9)可分泌抗ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并以之分别制备小鼠腹水单克隆抗体。经酶联免疫吸附试验检测表明,该3株杂交瘤细胞腹水抗体效价在10-5～10-6之间,且均具有与ToRSV反应的特异性。     

抗B型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其鉴定

本文用纯化B型葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫Balb/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化共获6株能稳定分泌抗SEB的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。通过将以混合佐剂(降植烷 FIA的混合物)和杂交瘤细胞同时注射制备McAb腹水的方法与常规法相比较,不仅量多(多1.56～1.84倍),而且活性好(高1个数量级)。初步鉴定表明:6株McAb均属IgGl亚类;其培养上清和腹水的ELISA滴度分别为10~(-3)～10~(-4)和10~(-5)～10~(-8)。它们与SEA均不起反应,其中3株(Sl.B4和E7)与SECl有轻微交叉反应;都能被10μg/m的SEB完全阻断等。说明其免疫学活性及特异性均较良好。     

抗鸡新城疫病毒单克隆抗体的研制

我们于1984年开始以鸡新城疫病毒(NDV)强毒株F48E8为抗原,研究抗鸡新城疫病毒单克隆抗体,得到两株杂交瘤细胞系:NDV-Hy-23和NDV-Hy-33。经3次克隆后,这两株杂交瘤细胞系均能稳定地分泌高滴度抗鸡新城疫病毒特异抗体,培养上清中McAb的免疫荧光滴度为1:50～1:100,小鼠腹水中Mc-Ab的免疫荧光滴度为1:100,000～1:1,000,000。免疫扩散试验证明:NDV-Hy-23分泌小鼠IgG1型抗     

细胞工程

叨1185搅拌生物反应器中用于抗体生产的低蛋白无血清培养基喋】/Bla,y,H.D.…jl Bioteehnol.Lett一1989,11(7)一455一460降自DBA,1989,8(19),8卜11533] 要在搅拌培养槽中大规模生产单克隆杭体(MAbs),必需一种低蛋白无血清的培养基.将杂交瘤l台7.1(^TCC HB58)培养在搅拌培养槽内,以进行培养优化.无血清培养基DIF由Iscove氏和Ham氏F12培养基按卜1组成,再添加10mg/l铁饱和人类转铁蛋白,和10mg/1牛胰岛素.将脂肪酸(FA)鳌合到牛血清白蛋白(BSA)上.对低蛋白培养基IFP来说,BSA一FA可用0.1%PEG 20 000代替.尽管在极低的蛋白含量下,但…     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了4株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素(rHuEPO)单克隆抗体(McAb)的小鼠杂交瘤细胞系:BⅡ1B5、DⅡ6B9、MⅡ1H4、GⅠ3E7,用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定,其分泌的McAb的类型分别是:IgM、IgM、IgG1和IgG2a。间接ELISA法测定细胞上清的效价为1×10~(-2)～1.25×10~(-1),腹水效价为1×10~(?)～1×10~(?)。培养上清经ELISA鉴定,与IL-2、GM-CSF、IFN-α等细胞因子均无交叉反应。只与rHuEPO特异性结合。     

细胞工程

<正> 852628 限定伴随人类T细胞表面糖蛋白的T细胞白血病单克隆抗体SN2[英]/Seon,B.K.…//J.Immunol.-1984,132(4)-2039～2095[译自DBA,1984,3(13),84-06314]从一个白血性T细胞系,MOLT-4的膜分离得糖蛋白,经纯化,在弗氏完全佐剂中制备成白血病抗原给小鼠腹腔注射。用聚乙二醇使免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细     

动物细胞培养及单克隆抗体

930909磁性处疆培鼍I|基促进杂交囊生长[英]/Pedraza,A.…/Biotechn01.Tech.一1992,6(4).一329'334~译自DBA,1992,11(17),92-09883] 小鼠杂交瘤细胞系CB-IFNA2.4产生抗重组干扰素-a-2b的IgGl单克隆抗俸(MAb)。将杂交窟培养在磁化RPMI-1640培养基中。培养基补加10％新生牛血清、2raM谷氨酰胺、0.4graM丙酮酸钠和40#g/ml庆大霉素。直径0.3cm的Tygon灭嚣管(总长75cm)外包永久性磁铁,使培养基以0.1和0.0002ml/秒的流量循环通过该管(1--,5次)使培养基磁化。磁场强度为0.02、0.05、0.09和O.1T。细胞子37℃下,处于静止生长期培养(10万…     

抗天花粉蛋白IgE单抗的抗独特型抗体及其鉴定

为了研究抗独特型抗体对天花粉蛋白特异的IgE反应的调节作用,建立了分泌针对天花粉蛋白的IgE单抗的独特型决定簇的大鼠-小鼠异种杂交瘤细胞株(6 C_5)。以分泌抗天花粉蛋白IgE单抗的小鼠淋巴细胞杂交瘤细胞株(TE—1)诱生的腹水,通过免疫亲和层析,分离得到TE-1单抗免疫Wistar大鼠。将免疫大鼠脾细胞与小鼠骨髓细胞(NS-1)进行异种间细胞融合,通过严格的筛选和克隆化,最终得到3侏生长稳定、连续分泌抗体的异种杂交瘤细胞株(6 C_5、3 E_3和8 G_6),并能顺利地经受冰冻保种和复苏。用间接ELISA法对所获得的单抗进行鉴定,即比较三个单抗对下列包被抗原的反应性,其中包括TE-1(天花粉蛋白特异的IgE单抗)、3A 12(天花粉蛋白特异的IgA单抗)、ADNP和142(抗DNP IgE单抗,来自两个不同的杂交瘤株),以及M Ig(正常小鼠血清Ig)。结果表明6C_5单抗只与TE-1呈阳性反应,对其余各种包被抗原的反应均呈阴性,说明杂交瘤株6C_5具有抗TE-1单抗独特型决定簇的特异性,实验经多次重复,因此可以结论,成功地建立了一株能分泌抗独特型抗体的异种淋巴细胞杂交瘤株。此外,8G_6与所有包被抗原均呈强阳性,说明它具有抗各类小鼠Ig共同决定簇的特异性。3 E_3的特异性尚未最终确定。在方法学上的改进包括细胞融合时所用的HAT选择培液中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的剂量较常量加倍,而氨基喋呤的剂量较常量减半。并且缩短在HAT培液中和HT培液中培养时间。这些可能为杂种淋巴细胞杂交瘤株的建立提供了有利条件。为了保证ELISA检测的特异性,作包被抗原的TE-1单抗与免疫大鼠用的TE-1单抗的来源不同,它来自无血清培养液培养的TE-1的上清液。同时,间接ELISA法所采用的酶联第二抗体(兔抗大鼠Ig),通过小鼠Ig的吸收等,证明其与小鼠Ig无交叉反应后才使用。     

高滴度单克隆抗体杂交瘤细胞系获得途径的探讨

为探索获得能分泌较高价单克隆抗体杂交瘤细胞系的途径,比较了用不同免疫方法得到的小鼠脾细胞制备杂交瘤,对其产生有效瘤和高价抗体分泌瘤的影响。用不使小鼠致病的病毒(如NDV)或巳灭活的病毒作为抗原时,以较高浓度加佐剂、长间隔(30天)、多次免疫效果较好。用能使小鼠感染的病毒作为免疫原时,以活病毒的亚致死剂量感染小鼠,取其脾细胞制备杂交瘤,效果最理想。有效杂交瘤产率高,分泌高效价抗体的杂交瘤细胞系也多。探讨了从免疫方法着手,定向研制高价单克隆抗体杂交瘤细胞系的可行性。     

细胞工程

<正> 853881 区别poly(ADP-Rib)不同结构的单克隆抗体[英]/Kawamitsu,H.…//Biochemistry.-1984,23(16).-3603～3609[译自DBA,1984,3(24),84-11867]以混于甲基化牛血清白蛋白中、并用弗氏完全佐剂乳化的多聚腺苷二磷酸核糖[po-ly(ADP-Rib)]为抗原,对BALB/c小鼠进行3次腹腔免疫注射。用聚乙二醇(PEG)     

文摘

030 0 2 9搅拌式生物反应器悬浮培养水母雪莲细胞的研究〔中〕/黄艳… //生物工程学报 .- 2 0 0 1,17(5 ) .- 5 6 1～ 5 6 5应用 2L通气搅拌式生物反应器一步批式培养水母雪莲细胞。采用倾斜式搅拌桨代替透平桨 ,研究了搅拌转速、通气量和接种量对细胞生长和黄酮合成的影响 ,发现在 75r/min、70 0～ 10 0 0L/min和 4 .0～ 5 .0gDCW /L接种量下细胞生长和黄酮合成比较好。经过 12d培养细胞干重达 13.8gDCW /L ,黄酮产量 4 16mg/L ,黄酮含量占细胞干重的 3.0 %。水母雪莲细胞生长及黄酮合成的进程表明 ,黄酮积累与细胞生长呈正相关。对细…     

环境保护及农业废物利用

951871用江河沉积物进行水溶性高分手量多羧酸的厌气生物降解[英]/Matsumura,S.…,Chem.Lett.-1992,9.一1859～1862[译自DBA,1992,11(23),92—133373 利用江河黑色沉积物作为接种物,在厌气条件下使指定作为生物降解功能聚合物的高分子置多羧酸钠生物降解到与在通气条件下同样的程度。每个生物降解槽(8升)装有BOD试验溶液1.8升、厌气预培养的微生物源200ml及试验聚合物(多聚卢-DI一-苹果酸钠,=羧酸钠直链淀粉和二羧酸钠木聚糖),用氮吹洗,并在烈碚中于2 7|℃培养,每天搅拌两次,每次1小时。根据凝胶渗透色谱和培养基的总有机碳评估生物降…     

草鱼生长激素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

用经草鱼生长激素(gcGH)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/O-Ag14)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,得到7株阳性杂交瘤细胞株,其中2株为强阳性。交叉试验表明,这些杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)同大鳞大马哈鱼生长激素(sGH)、大鳞大马哈鱼促性腺激素(sGTH)及牛生长激素(bGH)均不起反应。小鼠腹水McAbs滴度高达1:1280000。受体-gcGH-McAb夹心试验表明,McAb确与有活性的gcGH有特异反应。用间接ELISA方法可检测到浓度为0.125#g/ml的gcGH。