高等植物叶绿体和线粒体免疫亲近性的研究

以火箭免疫电泳分析表明:大豆叶绿体抗体与大豆线粒体有免疫交叉反应,同时大豆线粒体抗体与大豆叶绿体也有免疫交叉反应,但是大豆线粒体的抗体与鼠肝线粒体之间无免疫交叉反应。这说明高等植物线粒体对叶绿体比之对动物线粒体在免疫特性上有更大的亲近性,亦即高等植物线粒体和高等植物的叶绿体有更大的同源性。经火箭免疫电泳、交叉免疫电泳和线状免疫电泳进一步分析表明:菠菜偶联因子抗体(AbCF_1)和大豆线粒体、大豆叶绿体间,大豆线粒体抗体与CF_1和大豆叶绿体之间,以及大豆叶绿体的抗体(AbC)与CF_1和大豆线粒体间有免疫交叉反应,说明两种换能器之间有免疫亲近性,并分别与CF_1存在免疫亲近性。这揭示两种换能器免疫亲近性的表现是由于存在共同物质基础所致,这内在共同物质基础是偶联因子。这个结果有力地支持高等植物叶绿体和线粒体在结构和功能上以及发生上存在同源性的观点,在理论上也为两种换能器的起源和演化上存在同源性提供了一些依据。     

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定

目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。     

植物体细胞杂交与胞质基因组的研究

高等植物性状主要由核基因控制,其遗传遵循孟德尔规律。现已证明：植物叶绿体和线粒体中也存在遗传物质ＤＮＡ（胞质基因）,含有整套的转录和翻译系统,能够合成蛋白质,高等植物的胞质基因组多数在有性杂交过程中表现为母性遗传。本文阐明了植物体细胞杂交与胞质基因组研究的关系及研究进展。     

洋葱鳞茎中肌球蛋白和肌动蛋白的免疫化学鉴定

制备了粘菌肌动蛋白抗血清和鸡骨骼肌肌球蛋白抗血清。用这两种抗血清,经对流免疫电泳,火箭电泳及酶联免疫吸附分析,证明了高等植物洋葱鳞茎中肌球蛋白和肌动蛋白的存在。     

高等植物氢化酶活性研究进展

氢化酶作为一种可催化氢气氧化与质子还原的金属酶,在生物体的氢代谢过程中发挥着关键作用。已有研究表明,氢气干预可对植物的生长发育和抗逆性产生积极影响,同时一些高等植物的内源性产氢现象也已得到证实,然而关于催化内源性产氢的氢化酶目前了解较少。虽然已有多项研究表明,叶绿体可能是高等植物产氢的关键部位,但是鉴于多种植物在种子萌发时仍然可以产氢,而种子萌发过程中叶绿体还没有生成,加上氢化酶在进化上与线粒体复合物Ⅰ具有同源性,在对氢化酶研究现状进行概述的基础上,提出了高等植物线粒体具有氢化酶活性的猜想,并总结了线粒体存在氢化酶活性的初步实验证据,以期为后续线粒体与氢化酶的关系研究提供参考依据。     

雄性不育水稻农垦58S的P61蛋白质是叶绿体ATP酶β亚基的同工型

Ｐ６１蛋白质是从水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ｓｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）雄性不育突变体农垦５８Ｓ（ＮＫ５８Ｓ）叶绿体中发现的一个蛋白质,微序列分析结果表明它的Ｎ端氨基酸序列与水稻和大麦叶绿体ＡＴＰ酶β亚基的一致。免疫印迹分析证明Ｐ６１与玉米叶绿体ＡＴＰ酶β亚基抗体有特异性的交叉反应。Ｐ６１与常规水稻“农垦５８”（ＮＫ５８）的β亚基的分子量基本相同,但其等电点偏碱性端,与β相差约０．３个ｐＨ     

适于基因组测序的高纯度的大豆线粒体基因组DNA提取方法

为满足高通量二代测序要求,本研究采用大豆黄花苗为试材,结合差速离心、蔗糖密度梯度离心及超速离心方法提取高纯度大豆线粒体基因组DNA(mt DNA)。结果表明,差速离心能够有效去除核基因组掺杂;超速离心与蔗糖密度梯度离心结合能够有效去除叶绿体污染。提取的mt DNA经琼脂糖凝胶电泳、紫外光度计检测及叶绿体和细胞核特异性引物检测表明,该方法提取的大豆mt DNA无叶绿体DNA及核DNA污染,且纯度高,可满足测序等对线粒体高纯度的要求,为研究大豆线粒体相关性状的机理奠定了坚实基础。     

聚丙烯酰胺凝胶—并列抗体凝胶交叉免疫电泳

聚丙烯酰胺凝胶—琼脂糖凝胶交叉免疫电泳具有设备简单,操作方便和分辨力高等优点,为分析鉴定抗原,抗体以及它们之间的相互关系提供了较灵敏的手段。Van DerRiet 和 Viljoen 报告了另一种简便的免疫电泳法,从杂有多种抗原的混合物中检出特异性抗原:混合抗原在含有相应抗体的凝胶中电泳时产生免疫沉淀物,游离抗原继续自由地“滤过”该抗体凝胶,到达相邻的另一块空白凝     

烟草雄性不育系叶绿体中DNA小质环分子的发现

R.J.Kemble等(1980)报道:在玉米雄性不育系的线粒体中,发现有分子量很小的一种线粒体DNA小质环分子,并认为这种小质环与雄性不育具有某种相关性。Green(1976)在伞藻的叶绿体DNA中,也曾观察到有4.15μm大小的DNA小质环分子,但在高等植物的叶绿体中,则尚未见到有类似的报道。     

烟草雄性不育系叶绿体中DNA小质环分子的发现

R.J.Kemble等(1980)报道:在玉米雄性不育系的线粒体中,发现有分子量很小的一种线粒体DNA小质环分子,并认为这种小质环与雄性不育具有某种相关性。Green(1976)在伞藻的叶绿体DNA中,也曾观察到有4.15μm大小的DNA小质环分子,但在高等植物的叶绿体中,则尚未见到有类似的报道。     

高等植物细胞质雄性不育分子机理的研究进展

从线粒体DNA、叶绿体DNA和线粒体质粒DNA方面较详细地阐述了高等植物细胞质雄性不育的分子机理及最新进展;探讨了细胞核DNA和细胞质DNA之间的相互关系。     

在玉米线粒体基因组内的叶绿体DNA序列

目前,研究家们发现除了在核基因中具有叶绿体DNA片段外,在许多种高等植物的线粒体基因组中也具有叶绿体DNA序列。采用限制性内切酶进行研究发现,在玉米线粒体基因组内至少存在三个重要的叶绿体DNA序列:(i)1,5-二磷酸核酮糖羧化酶的大亚     

小麦线粒体表面存在肌球蛋白

证明了小麦 (TriticumaestivumL .)线粒体上存在肌球蛋白。通过免疫印迹鉴定发现小麦线粒体蛋白重链与抗体进行交叉反应 ,其分子量略高于动物骨骼肌肌球蛋白的重链 ,经计算 ,该蛋白的分子量为 2 10kD。通过电镜观察到溶液中的F_肌动蛋白可以和NEM (N_ethylmaleimide)处理的线粒体结合 ,并发现F_肌动蛋白可以激活线粒体悬浮液的ATP酶活性 ,证明线粒体外膜的外表面存在肌球蛋白     

高等植物叶绿体表达重组蛋白研究进展

近年来,基因工程技术发展迅速,许多重组蛋白得以表达。其中利用植物生物反应器表达特异药物蛋白为人类一些重要疾病的预防和治疗提供了新途径。植物叶绿体遗传转化和表达系统成为目前植物生物反应器的研究热点。因结构和遗传上的特殊性,高等植物叶绿体在重组蛋白表达方面具有独特优势,外源基因表达量高、定点整合,而且叶绿体母系遗传特性保证了生物安全性。很多重要药用蛋白质在植物叶绿体中表达成功。烟草作为高等植物叶绿体转化模式植物,在疫苗抗原、抗体等药物蛋白和其他重要重组蛋白表达方面取得显著进展。高等植物叶绿体遗传转化也为叶绿体基因的表达和调控机制的研究提供新的技术和方法。文中从叶绿体遗传转化原理、载体构建、重组蛋白和重要药物蛋白在叶绿体中的表达以及重组蛋白表达对植物代谢和性状影响等多个角度,对高等植物叶绿体遗传转化体系研究的新进展进行了综述,以期为叶绿体表达平台的开发和重要药用蛋白质的表达提供新思路。     

植物叶绿体互补作用的研究——Ⅰ.杂交双亲叶绿体的互补作用

本文报道水稻“三系”叶绿体和大豆叶绿体希尔反应(光还原DCIP)的互补作用的结果。水稻(或大豆)杂交双亲叶绿体在体外等量混合时,其希尔反应活性大于两亲本叶绿体的平均值。实验结果表明:(1)水稻不育系+恢复系或保持系+恢复系的混合叶绿体有明显的互补作用;而不育系+保持系的混合叶绿体无互补作用。(2)提取叶绿体后的上清液与叶绿体混     

叶绿体陪伴蛋白在几种藻类中的存在和分布

用豌豆叶绿体陪伴蛋白（ｃｈ－ｃｐｎ６０）的杭体对衣藻和多种蓝藻细胞提取液作Ｗｅｓｔ－ｅｒｎｂｌｏｔ分析表明：真核的衣藻和原核的有异形胞丝状蓝藻的一种鱼腥藻中存在一种与豌豆ｃｈ－ｃｐｎ６０抗体有交叉反应的蛋白,其一个亚基的分子量与豌豆该蛋白的分子量相似,而另一亚基的分子量高于豌豆的β亚基分子量。绿藻和丝状蓝藻中这一蛋白在热处理后含量增加,而经－２０℃冷处理１２ｈ后含量明显下降。在单细胞蓝藻中则检测不到这种蛋白。     

叶绿体的遗传

叶绿体是绿色植物进行光合作用的场所。关于叶绿体结构及其光合过程的生理机制已经得到了比较充分的研究。叶绿体遗传的研究也在深入。现已明确,叶绿体包含着相对独立的遗传系统和进行光合作用所必需的全部酶系统。本文将对叶绿体的遗传系统、遗传方式和机制的研究成果作一简介。叶绿体的遗传系统与线粒体不同,功能性的叶绿体主要存在于绿色的、光合组织细胞里。高等植物的叶绿体呈扁平状,直径约7μm,厚约3—4μm,靠双层膜游离于细胞质里。外被里面为基质,其成     

兔抗人和大鼠烧伤皮肤毒素提取物的免疫血清制备及抗原性分析

为进一步确证和研究人和大鼠烧伤毒素提取物的抗原性及其特征,以及同以新鲜皮制成的提取物在免疫学特性方面的异同,将人和大鼠烧伤皮肤与新鲜皮肤的提取物,经各种生物化学分析及定量后,分成四组,每组(?)只兔子,分别以福氏完全佐剂抗原、不完全佐剂和水剂抗原免疫,制成(?)种免疫血清。对上述抗血清先后经过免疫双相扩散、单相扩散、免疫电泳、火箭免疫电泳等方法的分析,结果表明,兔抗人和大鼠烧伤皮肤毒素提取物的抗原性较强,(?)双扩和免疫电泳上均出现一很强的抗原成分,抗体效价可达1∶16～1∶32(双扩);而人和大鼠新鲜皮肤提取物的抗原性很     

栽培大豆中一个线粒体atp６基因的分离与鉴定

线粒体ＡＴＰ酶（mtATPase)复合体在高等植物生命活动中起重要作用。从栽培大豆（Glycine max(L.)Merr.)中分离鉴定了一个新的mtATPase第六亚基（ＥＣ３．６．１．３４）基因（atp６）,它编码具２２３个氨基酸的ＡＴＰ６亚基,是所有已克隆的atp６基因中最短的一个,并把它命名为atp６copy3(atp６-3)。通过对９种栽培大豆的ＰＣＲ分析及序列分析表明atp６－３广泛在于栽培大豆中,以atp６－３为探针对大豆重组近交系的ＲＦＬＰ分析初步表明栽培大豆线粒体有父性遗传的可能性。水杨酸处理明显抑制atp６的表达,并对其可能作用进行了鉴定。     

美洲型与欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7蛋白的截短表达和鉴定

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) Nsp7蛋白具有较强的免疫原性,且在美洲型(NA)和欧洲型(EU) PRRSV之间免疫原性差异显著,是抗体分型检测的理想靶抗原.本研究采用原核表达系统分别表达和纯化了NA和EU PRRSV Nsp7蛋白,Western blotting分析表明重组蛋白与相应血清型抗体有较强的免疫反应,但特异性较差,与另一血清型抗体仍存在一定的免疫反应,预示两种血清型PRRSV Nsp7蛋白存在免疫交叉反应抗原表位,全长表达不能用于分型诊断.利用生物学软件分析NA和EU PRRSV Nsp7的相似抗原表位,采用融合PCR缺失其编码序列后,经表达纯化获得NA-△Nsp7和EU-△Nsp7两种截短蛋白,蛋白大小约为43 kDa,Western blotting分析表明NA-△Nsp7和EU-△Nsp7可分别与相应血清型抗体发生特异性反应,且无免疫交叉反应,为NA和EU PRRSV分型抗体检测试剂的研制奠定了基础.