叶下珠药材HPLC指纹图谱的比较研究

采用反相高效液相色谱法,对叶下珠药材不同产地、不同采收期、不同部位指纹图谱进行测定和比较分析,并与中成药叶下珠胶囊的HPLC指纹图谱进行了比较研究。结果显示:(1)建立了叶下珠药材的HPLC特征指纹图谱,标定18个共有峰,利用对照品指认4个峰;11批(来源地不同)叶下珠样品的HPLC图谱相似度(相合系数,均值)在0.89~0.99之间。(2)7批不同采收期的叶下珠药材的HPLC指纹图谱相似度在0.94以上,各共有峰的峰面积大多随生长期而增加,至10月5日达到最高,建议叶下珠药材应于每年的10月上旬进行采收。(3)不同部位叶下珠药材HPLC指纹图谱相似度分析发现,叶、果的相似度较高(0.98~0.99),根、茎的相似度较低(0.86~0.87),说明根、茎中各成分含量较低,建议采收叶下珠药材的地上部分即可。(4)比较叶下珠胶囊和叶下珠药材的指纹图谱,发现二者的化学成分非常相似,但峰面积差异较大,其差异可能是由于加工过程所致。该研究所建立的HPLC指纹图谱分析方法简便、重现性好,可用于叶下珠药材及中成药的鉴定与质量评价。     

山茱萸药材指纹图谱的研究

以乙腈—磷酸梯度洗脱,用高效液相色谱法建立山茱萸药材的指纹图谱。用方法学考察,表明其精密度高,重现性好。实验测定多批样品图谱,共确定10个共有指纹峰,采用相关系数法计算不同样品指纹图谱之间相似度,结果表明指纹图谱相似度大小与药材品质有关。     

胡黄连药材的指纹图谱研究

利用HPLC—DAD—MS法,研究胡黄连的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。采用C18色谱柱,甲醇-水（含0．1％的甲酸）梯度洗脱;流速为1．0mL／min,检测波长290nm;柱温为室温。对不同产地的胡黄连药材进行指纹图谱分析,通过HPLC—MS技术指认指纹图谱共有模式中共有峰的归属。比较5种产地胡黄连药材指纹图谱确定了16个共有峰,并指认了含量超过50％的胡黄连苷Ⅱ和苷Ⅰ。发现产地不同,其指纹图谱有差别。试验方法和结果具有较好的准确性和稳定性,可以为胡黄连药物研究提供参考资料,对胡黄连药材的质量评价具有重要的参考价值。     

白屈菜药材HPLC指纹图谱研究

本文建立了白屈菜药材的HPLC指纹图谱。采用DiamonsilC 18柱 (迪马公司 )为分析柱 ,以乙腈 0 0 1MKH2 PO4 梯度洗脱为流动相 ;柱温 35℃ ;流速 1ml/min :检测波长 2 90nm。在上述条件下可以很好的分离白屈菜的各类成分 ,得到的色谱图可作为白屈菜药材专属性的指纹图谱。     

甘草药材HPLC指纹图谱研究

研究用高效液相色谱法建立甘草药材指纹图谱的分析方法。采用Symmrtry shield RP18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,柱温25℃,检测波长254 nm。用上述方法确定了10批不同产地甘草药材的24个共有峰,建立了甘草药材指纹图谱的分析方法,该方法精密度、稳定性、重复性均较好,为甘草药材的质量控制标准提供了参考。     

肿节风药材HPLC指纹图谱研究

采用反相高效液相色谱法建立了肿节风药材的指纹图谱,色谱柱为Hypersil C18(4.6 mm × 250 mm,5 μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行二元梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35 ℃,检测波长300 nm.对10批不同产地的肿节风药材进行了检测,并应用"中药色谱指纹图谱相似度评价软件"生成了共有模式色谱图,共有16个色谱峰,各色谱峰分离情况良好.精密度、重复性和稳定性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%,符合指纹图谱要求.该方法简便,可靠,精密度、稳定性和重复性良好,可用于肿节风药材的质量评价.用该方法比较了肿节风药材不同部位指纹图谱的差异,为最佳用药部位的确定提供了理论依据.     

木瓜药材HPLC指纹图谱研究

以熊果酸为参照物,利用高效液相色谱（HPLC）梯度洗脱,测定了19批木瓜（Chaenomeles speciosa（Sweet） Nakai）样品。建立了药用木瓜的高效液相指纹图谱,为评价控制药用木瓜的质量提供了依据。色谱柱为YPW—Kromasil TM—C18柱（250mm×4．6mm,5μm）（美国迪马公司）;流动相：甲醇（A）一1％冰醋酸（B）,流动相A为甲醇,流动相B为1％冰醋酸水溶液。检测波长290nm,柱温30℃,流速10mL／mjn,进样量20μL。通过分析19批木瓜样品得到的高效液相指纹图谱有11个共有峰,多数峰都可以达到较好分离且19批次相似度符合。因此药用木瓜的指纹图谱特征性及专属性强,可用于药用木瓜的质量控制。     

中江丹参药材指纹图谱研究

建立四川中江丹参药材的指纹图谱,以期完成中江丹参GAP重要的一环;HPLC法建立丹参脂溶性提取物的指纹图谱;10批中江丹参材指纹图谱符合国家药品监督管理局2000年颁发的关于中药材指纹图谱技术要求;该图谱可作为中江丹参药材质量控制标准之一。     

维吾尔药材地锦草HPLC指纹图谱的研究

目的:建立地锦草高效液相色谱指纹图谱。方法:Shim-pack ODS C18(150 mm×4.6 mm.i.d.,5.0μm)为色谱柱,甲醇-0.1%磷酸水系统为流动相(梯度洗脱),检测波长为272 nm,柱温为30℃。结果:测定了产于新疆的10批地锦草的指纹图谱,标定了13个共有指纹峰,方法学考察结果符合指纹图谱技术要求。经计算机模拟相似度计算软件计算,相似度大于0.9。结论:建立的HPLC指纹图谱分析方法可作为地锦草的鉴别方法之一,为地锦草的质量控制提供了依据。     

不同品种玫瑰花药材的HPLC指纹图谱研究

目的:建立中药玫瑰花的高效液相色谱指纹图谱,为科学评价和有效控制其质量提供可靠的方法。方法:用HPLC-UV方法测定了11份玫瑰花样品,采用中国药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价2004A系统建立了玫瑰花药材指纹图谱,并进行相似度评价和聚类分析。结果:11份玫瑰花样品的HPLC指纹图谱有18个共有峰,有10份样品相似度都在0.8以上,聚类分析时归为一类。结论:建立了玫瑰花不同品种的HPLC指纹图谱,并比较了其之间的差异,该方法稳定、可靠、精密度高、重复性好,可为中药玫瑰花的质量评价体系的建立提供科学依据。     

三叶半夏和掌叶半夏凝集素原核表达及特性研究

通过原核表达获得大量具有生物活性的三叶半夏和掌叶半夏凝集素,比较分析两种半夏凝集素的异同,并深入探讨半夏凝集素和亚基之间凝集活性的差异。结果表明,掌叶半夏凝集素的凝集活力为三叶半夏凝集素的4倍,凝集素第三个活性位点两个氨基酸的差异可能是引起三叶半夏和掌叶半夏凝集素凝集活性不同甚至药理作用不同的主要原因。原核表达系统获得的凝集素亚基不能凝集兔血红细胞。该研究为深入探讨两种半夏凝集素的区别,及半夏凝集素和亚基之间凝集活性的差异打下了基础,也为解决半夏资源紧缺提供了一个可能的方法。     

复方虎杖高效液相色谱指纹图谱的研究

采用高效液相色谱法,建立了复方虎杖指纹图谱的分析方法。色谱条件为：ZORBAX C18（150mm×4．6mm,5um）,检测波长310nm,柱温：25℃,流动相：甲醇（0～85％）：5％乙酸溶液（100％-15％）,梯度洗脱70min。通过分析,确立了复方虎杖指纹图谱的22个共有峰。10批样不同产地的药材指纹图谱具有较好的相似度。该方法准确可靠,重复性好,可用于复方虎杖药材及其制剂的质量控制。     

一株产凝集素的三叶半夏内生真菌的研究

研究三叶半夏内生真菌及其凝集素,旨在为半夏内生真菌及其凝集素的开发利用提供依据。对三叶半夏块茎内生真菌分离、纯化,液体发酵培养代谢产物,无水乙醇提取总蛋白,兔血红细胞检测其凝集活性,筛选出菌株gs1,其总蛋白对兔血红细胞凝集活性显著。使用甘露聚糖-Sepharose 4B亲和层析柱纯化菌株gs1总蛋白,得到凝集素。Brandford法定量检测分析表明,1000 ml gs1发酵培养液中含有9.58 mg 凝集素。SDS-PAGE 电泳分析显示该凝集素为单一条带,分子量约为12 kDa。凝集活性实验表明,该凝集素对兔、大鼠和小鼠的血红细胞具有凝集作用,对兔血红细胞效果最显著;而对人（A＼B＼O＼AB型）和鸡的血红细胞无凝集作用。糖结合活性实验表明,甘露糖对该凝集素的凝集活性具有抑制作用。通过初步分类鉴定,菌株gs1为半知菌亚门,丝孢纲,丛梗孢目,丛梗孢科,曲霉属。     

Effect of different plant growth regulators on micro-tuber induction and plant regeneration of Pinellia ternate (Thunb) Briet

An efficient micropropagation system for Pinellia ternate (Thunb) Briet, a traditional Chinese medicinal plant, has been developed. Petiole and lamina of P. ternate were used as explants and cultured on Murashige and Skoog (MS) medium containing different concentrations of different plant growth regulators. The results indicated that low concentration of 2,4-dicholorophenoxy acetic acid (2,4-D), indole-3-acetic acid (IAA) and α-naphthalene acetic acid (NAA) were suitable for micro-tuber induction, but callus induction rate increased with increasing concentrations of growth regulators. Tubers induction rates of petiole and leaf were (81.8 %–100 %) and (89.4 %–96.0 %) respectively, when 0.2 mg l⁻¹ 2, 4-dicholorophenoxy acetic acid, indole-3-acetic acid or α-naphthalene acetic acid were present in the medium. Tubers induction rates of petiole and leaf cultured on MS medium supplemented with 0.2–0.5 mg l⁻¹ 6-benzyl amino purine (6-BAP) were (94.1 %–100 %) and (96.0 %–100 %) respectively. When the concentration of 2,4-dicholorophenoxy acetic acid, α-naphthalene acetic acid and 6-benzyl amino purine was increased to 2.0 mg l⁻¹, callus induction rates of petiole and leaf were 100 % and 98.2 %, 91.0 % and 36.0 %, 62.3 % and 70.0 %, respectively. Different concentration of kinetin (KT) and zeatin (ZT) had no significant effect on micro-tuber induction of petiole. Most petioles showed polarity during the cultivation of explants, when supplemented with different concentrations of auxin or cytokinin in the MS medium.     

萆薢类药材的HPLC指纹图谱研究

应用HPLC方法测定了薯蓣属根状茎组10种1亚种1变种植物23个样本,建立了萆薢类药材总皂苷元粗提物的HPLC指纹图谱.色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C_(18)柱(4.6×250 mm,5 μm),流动相为乙腈-水,柱温30℃,检测波长为203 nm.结果表明,用上述条件所建立的指纹图谱共标示出7个共有峰,且可较全面地反映萆薢类药材的皂苷元类成分,为萆薢类药材薯蓣属根状茎组植物鉴别及质量控制提供一种方法.     

外源MeJA对高温胁迫下半夏抗氧化系统和胁迫基因的影响

研究叶面喷施外源MeJA对高温胁迫下半夏的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性的影响;对脯氨酸(Pro)、丙二醛(MDA)、可溶性糖含量及有效成分含量的影响;对小分子热激蛋白(sHSP)等胁迫相关基因表达的影响。将生长状况一致的半夏植株在40℃高温下进行胁迫处理,实验组喷施50μmol·L^-1的外源MeJA溶液,空白组喷施等量的水,分别在处理2、6、12、24、48 h时进行取样,对样品进行指标测定。结果发现,在40℃高温下,喷施一定浓度的外源MeJA可以提高半夏叶片的SOD、POD、APX活性,降低MDA质量分数,增加脯氨酸及可溶性糖含量;对半夏有机酸含量无明显影响。2个细胞质型小分子热激蛋白和GRRBP蛋白,在MeJA处理后表达量显著增加。由此得出结论:喷施外源MeJA可以增强半夏中部分抗氧化酶的活性,保护半夏的细胞膜,增强细胞的渗透调节能力,且外源MeJA可能增加半夏高温胁迫响应基因的表达。     

生半夏、南星水提物对人胃癌BGC823细胞的侵袭力及HIF-lαmRNA蛋白表达的影响

摘要目的：观察生半夏、南星中药水提物对缺氧环境中人胃癌细胞株BGC823细胞HIF-lα蛋白表达和侵袭力的影响。方法：运用CoCl2（氯化钴）诱导BCG823细胞缺氧,使得细胞中HIF-1α蛋白表达升高．实验组加入生半夏、南星水提物对细胞进行预处理,然后在进行缺氧诱导。通过甲基噻唑基四唑法（MTT）检测细胞活性,使用Transwell检测细胞侵袭能力变化,RT-PCR、Weste-rn blotting分别检测HIF-lαmRNA及蛋白含量及变化。结果：生半夏、南星水提物能抑制人胃癌BGC823细胞的增殖;生半夏、南星水提物均能抑制缺氧诱导胃癌细胞的侵袭力,并且能降低HIF-1αmRNA及蛋白表达。结论：生半夏、南星水提物可抑制人胃癌BGC823细胞的增殖,抑制人胃癌BGC823细胞侵袭力,可能通过降低HIF-1α蛋白表达有关。     

中国半夏属植物亲缘关系的SRAP分析

利用序列相关扩增多态性(SRAP)标记对中国半夏属植物5个种的亲缘关系进行了研究.38个引物组合在半夏属植物的5个种中共扩增出752条清晰的谱带,其中628条谱带具有多态性,多态性比率为83.51％,显示出较高的多态性比率;各物种间的遗传相似系数在0.6513～0.7312之间,聚类分析和主坐标分析结果表明,5种半夏属植物被聚为两大类:掌叶半夏单独聚为一类(Ⅱ),而其它4个种聚为一类(Ⅰ).第Ⅰ类可再分为A和B两个亚类:A亚类包括半夏和石蜘蛛;B亚类包括盾叶半夏和滴水珠.滴水珠和盾叶半夏的亲缘关系最近,其次是半夏和石蜘蛛,而掌叶半夏和其它4个种的亲缘关系都较远,这说明掌叶半夏与半夏属其它种呈姐妹群关系.本研究结果对我国半夏属植物资源的开发利用与保护具有重要意义.     

半夏的繁殖生物学研究

对“泰半夏”（Ｐｉｎｅｌｌｉａｔｅｒｎａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｂｒｅｉｔ．）的块茎和珠芽栽培观察结果表明：（１）不同繁殖体的叶形和珠芽所发生的变化与实验用的播种材料有关,珠芽发生频率与叶形变化呈正相关;（２）半夏倒苗既是对不利环境条件的一种适应,也是一种有效的无性繁殖方式;（３）半夏有性繁殖是属于同株异花传粉类型,但与无性繁殖相比,有性繁殖在种质繁衍上仅起着次要作用。