免抗生物素、地高辛及异硫氰酸荧光素免疫血清的研制及应用

随着分子生物学、分子免疫学与免疫化学等学科的飞速发展,要求建立和提供高度灵敏的方法与试剂,以各种非放射测定技术取代敏感的放射标记测定技术。八十年代末以来,国外许多大公司象美国的Sigma等都制成了抗生物素(Biotin)、抗地高辛(Dig)和抗异硫氰酸荧光素(FITC)血清作为商品出售,但价格十分昂贵。为此,我们先后制成了活化Biotin和防化Dig标     

地高辛配基标记探针在流行性出血热尸检组织中原位分子杂交技术的应用和探讨

将地高辛配基(Dig)标记的探针应用于流行性出血热(EHF)尸检组织的石蜡切片中,进行原位分子杂交四例。方法要点:(1)采用Dig标记的探针及碱性磷酸酶系统、提高其敏感性;(2)为达到被检核酸的暴露彻底、准确,选择合适的消化酶;(3)选择适当的杂交温度和时间,防止了非特异性背景,并避免了组织脱片。结果表明此方法操作简便、安全、快速、敏感。     

地高辛素标记的探针快速检测HBV-DNA实验研究

应用核酸分子杂交技术,检测血清中HBV-DNA已成为诊断乙型肝炎病毒感染和判断其复制状态的重要手段。用同位素(~(32)P)标记核酸探针,进行分子杂交,虽然灵敏度高,但是由于具有半衰期短、探针不稳定、价格昂贵、对人体有害等因素,使之推广应用受到限制。目前国内外已有地高辛素(Dig)标记HBV-DNA探针进行斑点杂交实验,敏感性接近同位素探针水平。我们参照BM公司试剂盒方法及有关文献,建立Dig标记HBV基因探针方法,采用随     

Dig标记Era用于相应结合蛋白基因的钓取

Era是大肠杆菌生存繁殖必需的era基因产物,属G蛋白。作者推测它与其它G蛋白一样,有相应的结合蛋白存在。为了寻找Era结合蛋白及其基因,作者用Dig标记的Era对λZAP表达型大肠杆菌基因组DNA文库进行筛     

大肠杆菌基因组中存在Era亲和蛋白的基因

构建了一个大肠杆菌基因组DNA λ ZAP表达文库,以Dig标记的Era为探针,从4×10⁴噬斑中筛选到一个与探针呈特异结合的噬斑,说明大肠杆菌基因组中确有Era亲和蛋白基因存在.将该噬菌体中插段DNA前800 bp的测序结果与1996年底完成的大肠杆菌基因组全序列作同源性比较,发现该插段序列位于大肠杆菌基因组的第267 section.     

赭曲霉转化洋地黄毒苷的工艺优化和产物活性分析

以赭曲霉Rn405转化洋地黄毒苷的微生物转化工艺为研究对象,对助溶剂种类、底物浓度、金属离子种类和浓度等关键参数进行优化,确定的最优转化条件为:发酵培养基中添加1 mmol/L Mn2+离子,28℃,180 rpm振荡培养28 h时加入溶解于DMSO的底物溶液,使其终浓度为100 mg/L,然后在相同的条件下转化96 h。此时,底物的转化率和11α-羟基洋地黄毒苷元的生成率分别达到了100%和25.4%,比优化前分别提高了33.1%和14.5%。通过斯氏灌流法和Langendorff灌流法,探讨两个转化产物对蟾蜍和大鼠心肌细胞收缩能力的影响。结果表明,洋地黄毒苷元对心肌细胞收缩率的影响和底物洋地黄毒苷相当,而11α-羟基洋地黄毒苷元对心肌细胞收缩率的影响比底物洋地黄毒苷和洋地黄毒苷元均有所增强。     

小剂量洋地黄对急性心肌梗死PCI术后合并心力衰竭患者心率变异性的影响

目的:探讨早期应用小剂量洋地黄类药物对急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)行经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention,PCI)术后合并心力衰竭患者心率变异性(Heart rate variability,HRV)的影响。方法:入选32例在发病24小时内接受PCI治疗且合并心力衰竭的AMI患者,再灌注后随机分为洋地黄组(西地兰0.2 mg,n=17)和对照组(生理盐水20 m L,n=15)。在用药前、用药后30分钟、用药后3小时、用药后6小时、用药后12小时、用药后24小时进行5分钟HRV分析。结果:1洋地黄组的心率在用药6小时后显著小于对照组(P0.05);2洋地黄组SDNN在用药后3小时-6小时显著大于对照组(P0.05),两组RMSSD比较无显著统计学差别(P0.05);3洋地黄组LFnorm在用药后3小时-6小时显著大于对照组(P0.05);用药3小时后,洋地黄组HFnorm显著大于对照组(P0.05),LF/HF显著小于对照组(P0.05)。结论:小剂量洋地黄可以显著降低AMI PCI术后合并心力衰竭患者的心率、逆转迷走神经与交感神经活性的失衡状态,改善HRV。     

医药其它

921792利用变铅,链.菌生物转化洋地黄毒试元【英〕/Dahiya,J.5.了Indian J.Mierobiol一1991,31(3)一251~256〔译自DBA,1991,20 (21),91一12157〕 将悬浮于Tween一80的洋地黄毒贰元(1g)加人到4日龄的变铅青链霉菌生长培养基中,于26~30℃下温育21天。温育后,离心和浓缩培养液,然后用氯仿一甲醇(3:1)抽提。对抽提液进行硅胶TLC,并经Nueleosil5Cis上的HPLC分离和纯化产物。收集到6种级分,对其进行MS、PMR和CMR光谱分析。经鉴定这些物质为洋地黄毒贰元、17一夕一H一洋地黄毒贰元、3一epi一17一声一洋地黄毒贰元、17一声一H一aeovenos…     

毛花洋地黄植物与培养细胞之间的羟化能力的关系

为了寻找具有高羟基化能力的细胞株系，首先研究了毛花洋地黄培养细胞的羟化能力与原植物的羟化能力和地戈辛含量之间的关系，分析了各种不同的细胞系对β－甲基洋地黄毒甙的生物转化活性，这些不同的细胞系是来源于各种具有不同地戈辛含量和羟基化率的毛花洋地黄植物，实验结果表明，培养细胞的羟化能力与原植物的羟化能力之间不存在相应的依附关系。     

毛花洋地黄植物与培养细胞之间的羟化能力的关系

为了寻找具有高羟基化能力的细胞株系，首先研究了毛花洋地黄培养细胞的羟化能力与原植物的羟化能力和地戈辛含量之间的关系，分析了各种不同的细胞系对β－甲基洋地黄毒甙的生物转化活性，这些不同的细胞系是来源于各种具有不同地戈辛含量和羟基化率的毛花洋地黄植物，实验结果表明，培养细胞的羟化能力与原植物的羟化能力之间不存在相应的依附关系。     

内源性洋地黄样物质

近年来发现人和动物体内存在一种内源性洋地黄样物质,该物质对Na-K-ATP 酶能竞争抑制[~3H]-哇巴因与Na-K-ATP 酶的结合,能与地高辛抗体产生交叉结合反应。它具有利尿、排钠、强心和收缩血管等作用。该物质可能产生于下丘脑,高钠摄入和血容量扩张为其释放的有效刺激。内源性洋地黄样物质的性质和作用,与排钠激素、内源性钠泵抑制因子以及血管敏化因子等相似,可能是同一种或同一类物质。内源性洋地黄样物质参与高血压发病机理。     

地高辛抗血清阻断内洋地黄素对心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的：探讨地高辛抗血清对大鼠实验性心肌缺血／再灌注损伤（MI／R）的心肌氧化应激的影响。方法：采用左冠状动脉前降支结扎30min,复灌45min建立在体大鼠MI／R模型。SD大鼠随机分成假手术组、缺血／再灌注模型组、生理盐水组、维拉帕米组、小、中、大剂量地高辛抗血清组：于再灌注45min后检测左室心尖部缺血区心肌中内洋地黄素含量、心肌细胞膜Na^＋,K^＋-ATP酶和SOD活性以及MDA含量,光镜下观察心肌组织形态学变化。结果：MI／R组和生理盐水组大鼠心肌组织内洋地黄素水平明显升高,细胞膜Na^＋,K^＋-ATP酶活性明显下降,心肌组织SOD活性降低,MDA水平升高。治疗组包括维拉帕米组均能减轻心肌组织结构损伤,降低MDA水平,部分恢复SOD活性;但只有地高辛抗血清能降低心肌组织内洋地黄素水平,恢复心肌细胞膜Na^＋,K^＋-ATP酶活性。结论：地高辛抗血清通过拮抗内洋地黄素,恢复心肌细胞膜Na^＋,K^＋-ATP酶活性,从而减轻缺血／再灌注时的氧自由基损伤。     

钠钾ATP酶的信号转导功能新进展

钠钾ATP酶不仅是主动跨膜转运钠钾离子的载体蛋白,而且可能作为内源性洋地黄物质的受体参与信号转导。它通过在质膜上与小窝蛋白、Src激酶之间的相互作用,并在细胞内借助Src激酶反式激活上皮生长因子受体,组装信号转导的复合物激活信号转导的级联反应,从而介导内源性洋地黄物质增加心脏和血管的收缩性、促进正常细胞肥大或增殖、促进肿瘤细胞的凋亡等作用。研究内源性洋地黄物质与钠钾ATP酶结合后激活的信号转导通路将有助于明确它在病理生理条件下的重要性,有可能为治疗高血压和肿瘤提供新思路,并深化对细胞内信号转导机制的认识。     

强心甙向肌力作用的机制探讨

强心甙是指洋地黄类和洋地黄样强心性配糖体,它们主要作用于心脏,加强心肌的收缩力,长期来用以治疗充血性心力衰竭,收得良好效果,但其作用机制仍未彻底阐明,本文拟从强心甙与心肌代谢、收缩元素、离子转运等三个关系方面,对此加以探讨。强心甙与心肌代谢一、心肌的生化特性与一般代谢     

Digoxigenin标记核酸探针分子杂交技术探讨

Dig标记和检测试剂盒中的封阻试剂配制成0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%六种浓度,65～68℃温度时,溶解时间分别为10、15、20、35、40、45分钟;预杂交,在免疫测定中进行封阻,背景反应最小,其次是不预杂交,在免疫测定中进行封阻,再次是预杂交,在免疫测定中不封阻;标记探针保存在-20℃,至少可稳定18个月,同一探针重复使用三次可获得满意效果.以上结果表明,DigDNA标记和检测系统将代替~(32)p标记及其检测系统.     

异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin)标记的RNA探针在丁型肝炎病毒核酸杂交中的应用

应用异羟基洋地黄毒甙元(Digoxigenin)标记的RNA探针,检测了人和黑猩猩血清及肝脏中丁型肝炎病毒核酸,并与~(32)P标记同一探针做了比较。结果表明,异羟基洋地黄毒甙元标记的RNA探针的杂交效果与同位索探针一致(同源cDNA0.2pg),可用于人和动物血清及肝脏标本内HDV核酸的检测。     

胺碘酮、洋地黄联合治疗复发的心房纤颤疗效观察

目的:探讨在治疗复发性心房纤颤的过程中应用胺碘酮和洋地黄的效果。方法:随机从2013年1月至2015年1月来我院治疗复发性心房纤颤的患者当中选出110例,将其随机分为两个小组,对其中一组患者采用单独运用胺碘酮的方法进行治疗,作为对比组;对另外一组患者则采用胺碘酮和洋地黄联合应用的方法,作为观察组,分别对两组患者治疗效果和复律后持续窦律有效率进行记录和分析。结果:经过对两组患者的相关数据分析后可以看出,观察组患者的治疗有效率明显高于对比组,同时观察组患者的复律后持续窦律有效率也要高于对比组,两组数据之间存在较大差异,具有统计学意义(P0.05)。结论:在对复发性心房纤颤患者进行治疗的过程中,采用小剂量胺碘酮联合洋地黄的方法进行治疗能够有效提升治疗效果,并且不良反应率较低,值得在临床实践应用当中进行推广。     

催化信号放大系统在原位杂交检测中的应用研究

CSA ( Catalyzed Signal Amplification;催化信号放大 )法首次由 Bobrow等 [1]报道应用免疫酶联和蛋白电泳转移膜的检测 ,1 992年 Adams等[2 ] 将该方法应用于免疫组织化学中 ,Kerstens等 [3 ]又将该方法应用于原位杂交 ( ISH)。应用于免疫组织化学检测较传统的 PAP、ABC、LSAB和 En Vision法相比具有较高的敏感性 ,比 LSAB法要敏感 50 0～1 0 0 0倍 ,较 En Viion法敏感 50～ 1 0 0倍 ,而且稳定性高 ,背景低等特点。本实验室已引进该方法 ,应用于免疫组化和原位分子杂交组化 ,其原理 :杂交后 ,经洗 ,Dig标记探针接生物素化抗 D…     

钾钙离子对於洋地黄收缩期停止作用的影响

鉀鈣離子能分別對抗和增強洋地黃類藥物的強心作用,早成藥理學上確定的事實。對於過去的有關文獻,最近已由Baker氏加以扼要的評述。前人的實驗,多觀察灌注液中鉀鈣量的改變對於洋地黄強心作用的影響,對於洋地黄作用已發展至收縮期停止時究竟如何,則較少詳細觀察。從實驗治療觀點,離體蛙心的收縮期停止係洋地黃中毒終點的良好指標,對此終點的任何改變,在洋地黃中     

大白鼠脑M胆碱受体的溶脱

 本文报告膜蛋白溶脱剂溶脱大鼠脑M胆碱受体的结果,其中0.5％CHAPS,0.35％洋地黄皂苷和10％甘油的混合液效果较好,可溶脱30％的受体,并得到22％有活性的受体。溶脱的受体有较好的稳定性,与膜结合受体有同样的配体结合特异性,可饱和性及可逆性。平衡结合及动力学研究表明溶脱受体和膜结合受体对[~3H]QNB有类似的亲和性。