AFP-L3蛋白芯片的建立与应用

目的:建立一种可同时检测血清中甲胎蛋白(AFP)及甲胎蛋白异质体(AFP-L3)的蛋白芯片方法,为AFP-L3检测提供经济、便捷、省时、有效的新途径。方法:将鼠源AFP单克隆抗体和小扁豆凝集素点样固定在醛基玻片上,制备出AFP抗体和小扁豆凝集素蛋白芯片。利用抗原抗体特异性结合以及盐藻糖与小扁豆凝集素特异性结合的原理,用蛋白芯片方法检测血清样本中的AFP和AFP-L3。结果:肝癌血清39份,其中37份检测到AFP;26份肝癌血清中同时检测到AFP和AFP-L3,2份肝癌血清均未检测到AFP和AFP-L3。肝细胞癌组血清样本中AFP和AFP-L3水平明显高于健康对照组(P0.001),健康对照组与空白对照组统计学上无差异(P0.05)。结论:本研究成功地建立AFP和AFP-L3同时检测的蛋白芯片方法,与ELISA法和凝集素微量离心柱法相比,是一种切实可行,经济、便捷、省时、有效的方法。     

小鼠甲胎蛋白基因的扩增及其mRNA相对含量的测定

甲胎蛋白(AFP)是一个癌胚性蛋白,已被广泛用于肝癌早期诊断。近几年的研究发现,血清中AFP水平的升高,主要是由于肝细胞中AFP的信使核糖核酸(mRNA_(AFP))的量增加,即是由于AFP基因转录水平升高,而不是mRNA_(AFP)翻译活性升高所致。在肝癌发病机理和肝癌治疗研究中,人们逐渐将注意力集中在AFP基因调控的研究上,试图从整体或离体试验中,找出影响AFP基因表达的有关因子或药物,并已取得了一定进展。在转录水平上研究AFP基因调控,首先要解决mRNA_(AFP)的定量测定技术,应用互补于mRNA_(AFP)的单链DNA(cDNA)作探针,通过液相杂交进行测定是目前应用最普遍,也是最准确的方法。     

血清AFP、CEA与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值分析

目的:探讨血清甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)与肝癌患者临床病理分期和预后的关系及其诊断价值。方法:选取2010年3月至2014年4月期间我院就诊的90例肝癌患者作为肝癌组,并选择同期在我院进行体检的90例健康体检者作为健康组。统计两组的血清AFP、CEA水平及阳性率,比较不同TNM分期肝癌患者的血清AFP和CEA水平。分析肝癌患者的5年无复发生存率以及血清AFP和CEA水平对肝癌的诊断价值。结果:与健康组相比,肝癌组血清AFP、CEA水平及阳性率明显升高(P0.05)。Ⅳ期血清AFP和CEA水平最高,其次Ⅲ期,Ⅱ期次之,Ⅰ期最低(P0.05)。血清AFP、CEA阳性患者5年无复发生存率明显低于血清AFP、CEA阴性患者(P0.05),血清AFP、CEA联合诊断具有较高的敏感性和特异性。结论:肝癌患者的血清AFP和CEA水平升高,并随TNM分期增加而上调。血清AFP阳性以及CEA阳性患者的5年无复发生存率明显下降,血清AFP联合血清CEA检测在肝癌诊断中具有一定的临床价值。     

控制白蛋白和甲胎蛋白产生的分子机制——研究化学致肝癌物早期效应的系统

甲胎蛋白(AFP)的产生与发展和致癌活动相结合,提供了一个研究了体发生和癌形成时基因表达的分子控制系统。血清蛋白一白蛋白(ALB)和AFP虽有相似的理化性质,但它们是在不同情况下产生的。在大部分胎儿期间,AFP是主要的血清蛋白,浓度高达5毫克/毫升。胚胎AFP主要由正在发育中的肝脏和卵黄束细胞产生,ALB则是成年的主要血清蛋     

血清miR-21 及AFP 在大鼠肝癌发生过程中的动态表达比较分析

目的:分析血清miR-21在肝癌发生过程中的表达水平并将其与传统肝癌血清标志物甲胎蛋白(AFP)比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性。方法:二乙基亚硝胺(DENA)腹腔注射诱导建立大鼠肝癌模型,建模过程中收集造癌各个阶段的血清。Realtime-PCR检测血清miR-21的表达情况,ELISA法检测血清AFP水平。结果:与正常组及纤维化期大鼠相比,miR-21在肝硬化期、肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清均有不同程度上调(P<0.05),AFP在肝癌早、晚期的大鼠血清明显上调(P<0.05);与肝硬化期大鼠比较,肝癌早、晚期大鼠体内的miR-21表达显著上调(P<0.05),AFP在肝癌早期、肝癌晚期均显著上调(P<0.05)。结论:血清miR-21参与了肝癌发生的过程,对于肝癌发生的各个阶段均有很大的指示作用,可能作为肝癌预防和早期诊断的一个潜在标志物。     

血清GP73联合Dickkopf-1、AFP对肝细胞癌的诊断价值

目的:探讨血清高尔基体蛋白(GP73)联合Dickkopf-1、甲胎蛋白(AFP)对肝细胞癌的诊断价值。方法:收集2014年9月至2016年9月我院收治的117例肝细胞癌患者(肝细胞癌组)、80例乙型病毒性肝炎患者(肝炎组),以及随机选取的80例健康体检者(对照组)为研究对象,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组对象的血清GP73、Dickkopf-1、AFP水平,并分析其与临床病理特征之间的关系,分析GP73、Dickkopf-1、AFP联合对肝细胞癌的诊断价值。结果:肝细胞癌组血清GP73、Dickkopf-1、AFP水平高于肝炎组、对照组,且肝炎组血清AFP水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Child Pugh分级中B~C级肝细胞癌患者GP73、Dickkopf-1、AFP水平高于A级,差异有统计学意义(P0.05),不同分化程度、肿瘤直径、肿瘤数目患者的GP73、Dickkopf-1、AFP水平差异无统计学意义(P0.05)。GP73+Dickkopf-1+AFP对肝细胞癌诊断的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率均高于GP73、Dickkopf-1、AFP的诊断结果,差异有统计学意义(P0.05)。结论:血清GP73、Dickkopf-1、AFP在肝细胞癌中呈高表达水平,三者联合可明显提高对肝细胞癌的诊断价值,临床有重要的参考价值。     

miR-200a 及AFP 在肝癌、肝硬化患者血清中表达比较分析*

目的:分析miR-200a及AFP在肝癌、肝硬化患者血清中的表达水平并进行比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性。方法:临床收集肝正常、肝硬化、肝癌患者血液标本。运用实时定量PCR技术检测血清miR-200a的相对表达情况,血清AFP水平从临床资料中提取。结果:临床标本分析结果显示,miR-200a在肝硬化及肝癌患者中均显著下调(P<0.05),AFP仅在肝癌患者中出现异常表达。结论:血清miR-200a极大程度地参与了肝癌发生,对肝硬化及肝癌具有一定的诊断价值。     

甲胎蛋白与CT增强扫描对早期原发性肝癌的诊断价值

目的探讨血清甲胎蛋白(AFP)与X线计算机体层摄影术(CT)增强扫描对早期原发性肝癌的诊断价值。方法分析2014年9月~2015年9月40例早期原发性肝癌患者的血清AFP水平及CT结果。结果:早期原发性肝癌的确诊率血清AFP为72.5%、CT为85%。结论血清甲胎蛋白及CT增强扫描在早期原发性肝癌的诊断中起到关键性作用,为肝癌的早期治疗提供了有利的依据。     

孕中期双胎妊娠与单胎妊娠孕妇血清AFP与F-β-Hcg水平的比较

目的：检测双胎妊娠孕中期孕妇血清甲胎蛋白（AFP）和人绒毛膜促性腺激素游离B亚基（F-β-hCG）的水平,探索双胎妊娠时孕妇血清学筛查用于Down＇s胎儿高风险评估的AFP、F-β-hCG界定值。方法：收集双胎妊娠129例,孕中期（15～2l周）采集孕妇静脉血,用时间分辨荧光免疫分析技术测定血清AFP和F-β-hCG的浓度,并于分娩后随访,确定胎儿有无异常。另选2603例胎儿无异常的单胎妊娠作对照组。结果：129例双胎妊娠孕妇血清AFP浓度的中位教为98.98ng／ml,F-β-hCG浓度的中位数为32.20ng／mt;2603例单胎妊娠孕妇血清AFP和F-β-hCG浓度的中位数分别为52.15ng／ml和13.00ng／mt。双胎妊娠孕妇血清AFP和F-β-hCG的水平均明显高于对照组（P均〈0.01）。结论：鉴于双胎妊娠孕妇血清AFP和F-β-hCG水平明显升高,双胎妊娠的产前唐氏筛查风险评估时应引入正常双胎妊娠的AFP、F-β-hCG值。     

生理性及病理性人体甲种胎儿蛋白分子异质性研究

为阐明人体组织处于生理及病理状态时合成及分泌的各种甲种胎儿蛋白(AFP)分子中糖基组成上的差异,本文采用刀豆球蛋白A(ConA)及扁豆凝集素(LCA)亲和双向放射免疫电泳(Aff-RIEP)分析人体羊水、孕妇、急性肝炎及原发性肝癌患者血清中各种不同来源的AFP。实验表明孕妇及肝炎血清中AFP在ConA及LCA电泳中呈现相似的电泳图谱,但与肝癌AFP有显著差异。在ConA电泳中,肝癌血清显示二种分子变异体,其中以ConA结合型为主,兼有小部分非结合型AFP,而肝炎及孕妇AFP仅为一种ConA结合型分子。然而,在LCA电泳中,肝炎及孕妇血清AFP却以LCA非结合型为主,兼有小部分结合型,但肝癌AFP却与之相反,以结合型为主,非结合型为次。上述结果提示癌性与非癌性AFP分子之间存在糖基组成及结构上的差异。     

肝动脉插管栓塞化疗后原发性肝癌血清AFP变化与疗效的关系

目的探讨肝动脉插管栓塞化疗(TACE)后原发性肝癌患者血清AFP变化与疗效的关系。方法对TACE治疗的64例原发性肝癌患者,于介入前、介入后1月,行上腹部CT检查以及测定患者血清AFP水平,观察其疗效和AFP值变化。结果有效组(包括PR组和SD组)44例介入前后AFP值比较差异具有显著性(P0.05),PD组20例介入前后AFP值比较差异有显著性(P0.05)。PR组(22例)和SD组(22例)介入前后AFP差值比较,差异无显著性(P0.50)。结论原发性肝癌患者血清AFP水平的变化对评价TACE疗效具有重要的临床价值。     

AFP阴性与阳性肝细胞癌免疫组化和免疫电镜的比较性研究

目的比较性研究AFP阴性与阳性原发性肝细胞癌超微结构特征及AFP和Tn (Thomsen-Friedenreich-related antigen)蛋白表达及意义.方法 43例原发性肝细胞癌组织和5例正常肝组织分为三组:对照组(正常肝组织,5例);AFP阳性肝细胞癌组 (血清AFP>10ng/ml,22例);AFP阴性肝细胞癌组(血清AFP<10ng/ml,21例).应用透射电镜、免疫组织化学和细胞图象分析技术对AFP阴性与阳性肝癌细胞超微结构及AFP和Tn蛋白表达进行观察,并进行AFP和Tn蛋白免疫电镜标记.结果 1. 免疫组织化学结果显示:在AFP阴性肝细胞癌组癌细胞中(1)Tn蛋白表达强度(0.1498±0.0371)明显高于AFP阳性肝细胞癌组(0.0685±0.0156)(P<0.01);(2)AFP蛋白表达强度(0.1269±0.0347) 低于AFP阳性肝细胞癌组(0.1852±0.0234)(P<0.01).2.透射电镜观察:在AFP阴性组肝癌细胞中,癌细胞最突出的形态特征是胞质内细胞器大多十分简单,唯游离多聚核糖核蛋白体十分丰富.而在AFP阳性组肝癌细胞中,癌细胞胞质内细胞器相对较多,特别是粗面内质网尤为丰富.此外,线粒体及高尔基器也较明显.3.免疫电镜标记显示:AFP蛋白阳性标记主要位于粗面内质网,Tn蛋白阳性标记多位于游离多聚核糖核蛋白体,粗面内质网仅见有散在阳性分布.结论 (1)AFP和Tn蛋白在AFP阴性与阳性肝细胞癌组织中具有差异性分布特征,Tn蛋白有望成为AFP阴性肝细胞癌诊断辅助指标之一.(2)透射电镜和免疫电镜观察表明:AFP和Tn蛋白在肝癌细胞中的合成部位明显不同.     

DAB致大鼠肝癌过程中免疫组化及免疫电镜研究

本文采用二甲氨基偶氮苯(DAB)诱发的大鼠肝癌模型,运用组织病理学、血清学、免疫组化及免疫电镜技术相结合的方法,对诱癌过程中各个不同时期肝脏的组织病理学变化及肝癌阳性标志物AFP的表达进行了动态观察。结果显示:早在血清AFP浓度上升和由卵圆细胞转变而来的小肝细胞表达AFP之前,肝小叶中就出现了散在的AFP阳性肝细胞,我们认为这种AFP阳性肝细胞可作为肝细胞癌前病变的早期征象之一。在AFP阳性的肝细胞内,AFP主要定位于核周间隙、粗面内质网和高尔基复合体。     

血清PIVKA-Ⅱ和AFP联合检测对肝细胞癌的临床诊断价值研究

摘要 目的：探讨血清异常凝血酶原(Protein induced by vitaminK absence or antagonist-Ⅱ,PIVKA-II)和甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)联合检测对肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的临床诊断价值。方法：选择169例HCC患者、141例肝硬化患者、66例慢性乙肝患者和100例健康体检者为研究对象,分别检测和比较其血清AFP、PIVKA-Ⅱ含量。进一步分析血清AFP、PIVKA-Ⅱ含量的相关性及其诊断HCC的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度,绘制ROC曲线,比较血清AFP、PIVKA-Ⅱ及二者联合检测诊断HCC的ROC。结果：(1)HCC组血清AFP、PIVKA-Ⅱ水平均显著高于肝硬化组、慢性乙肝组及健康对照组,差异具有统计学意义(P值均<0.05)。(2)与参考线下面积相比,AFP、PIVKA-ⅡROC曲线下面积均显著增加,差异具有统计学意义(P<0.01); 且PIVKA-Ⅱ的曲线下面积(AUC=0.790)明显大于AFP(AUC=0.708)。(3)PIVKA-Ⅱ在对HCC诊断的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度方面均优于AFP;AFP+PIVKA-Ⅱ联合检测敏感度和阴性预测值最高(P<0.05),准确度维持在75 %左右。(4)HCC患者血清AFP和PIVKA-Ⅱ水平并无显著相关性(P>0.05)。结论：血清PIVKA-Ⅱ可作为临床辅助诊断原发性肝癌的重要指标,与AFP联合检测可提高原发性肝癌的检出率。     

超声造影参数联合血清AFP、DKK1在原发性肝癌与转移性肝癌鉴别中的临床价值

目的：探讨超声造影参数联合血清甲胎蛋白（AFP）、分泌型蛋白Dikkopf-1(DKK1)鉴别原发性肝癌（PLC）与转移性肝癌（MLC）的价值。方法：选取2020年2月至2022年12月我院收治的92例PLC患者（PLC组）、95例MLC患者（MLC组）,所有患者均接受超声造影检查和血清AFP、DKK1水平检测。受试者工作特征（ROC）分析超声造影参数联合血清AFP、DKK1鉴别PLC和MLC的价值。结果：PLC组始增时间、增强速率、50%倾斜率低于MLC组（P<0.05）,峰值时间、增强强度,血清AFP、DKK1水平高于MLC组（P<0.05）。始增时间、增强速率、50%倾斜率、峰值时间、增强强度、AFP、DKK1鉴别PLC与MLC的曲线下面积为0.725、0.655、0.716、0.697、0.761、0.695、0.754,联合应用鉴别PLC与MLC的曲线下面积为0.882,高于单独鉴别。结论：联合超声造影参数和血清AFP、DKK1在PLC和MLC鉴别中具有较高效能,优于单独影像或血清指标鉴别。     

磁共振扩散加权成像联合血清AFP、CA125、CEA、CA199检测在早期原发性肝癌中的诊断价值研究

摘要 目的：研究磁共振扩散加权成像（DWI）联合血清甲胎蛋白（AFP）、糖类抗原125（CA125）、癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）检测在早期原发性肝癌（PHC）中的诊断价值。方法：选取我院自2017年9月开始至2020年5月收治的63例早期PHC患者纳入研究,记作肝癌组,再取同期我院收治的61例良性肝病患者记作对照组。对所有受试者均实施DWI扫描,比较两组DWI图像信号强度。检测并比较两组血清AFP、CA125、CEA、CA199水平,以受试者工作特征（ROC）曲线分析上述各项血清学指标水平检测和DWI诊断早期PHC的效能。另外,比较PHC淋巴结转移患者和无淋巴结转移患者血清AFP、CA125、CEA、CA199水平。结果：肝癌组DWI信号强度为高信号人数占比高于对照组（均P<0.05）。肝癌组血清AFP、CA125、CEA、CA199水平均高于对照组（均P<0.05）。血清AFP、CA125、CEA、CA199水平联合DWI诊断早期PHC的曲线下面积、灵敏度以及特异度均高于上述各检查方式单独检测。PHC淋巴结转移患者的血清AFP、CA125、CEA、CA199水平均高于无淋巴结转移患者（均P<0.05）。结论：DWI联合血清AFP、CA125、CEA、CA199检测诊断早期PHC的价值较高,且淋巴结转移患者的血清AFP、CA125、CEA、CA199水平明显升高。     

miR-224在原发性肝癌患者血清中的表达及意义

目的：原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,PHC）作为常见的恶性程度极高的肿瘤,严重威胁着人类的生命。miR-224是近年来发现的一个肿瘤相关miRNA分子,在肿瘤的发生及发展过程中发挥着重要的作用。本研究通过测定原发性肝癌患者血清中miR-224的表达水平,探讨血清miR．224与原发性肝癌预后的关系。方法：采用实时荧光定量RT-PCR（Real-timeRT．PCR）方法。分别检测40例原发性肝癌患者,20例慢性肝炎患者,20例慢性肝硬化患者及20例正常人的血清标本中miR-224的表达水平。分析血清miR-224的表达水平与AFP和MMP-9的相关性。结果：原发性肝癌患者血清miR-224的表达水平明显高于正常人、慢性肝炎和慢性肝硬化患者（P〈0．05）。皮尔森相关分析结果显示原发性肝癌患者血清miR-224的表达与AFP和MMP．9呈正相关。血清miR-224低表达组术后复发／转移率显著低于高表达组,术后生存率则高于高表达组（P〈0．01）。结论：miR-224在原发性肝癌患者的血清中呈高表达,其血清表达水平与原发性肝癌的临床预后密切相关。这提示我们,miR-224可能成为新的原发性肝癌检测标记物和潜在的原发性肝癌预后分子标志物。     

miR-224 在原发性肝癌患者血清中的表达及意义

目的：原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC) 作为常见的恶性程度极高的肿瘤,严重威胁着人类的生命。 miR-224 是近年来发现的一个肿瘤相关miRNA 分子,在肿瘤的发生及发展过程中发挥着重要的作用。本研究通过测定原发性肝 癌患者血清中miR-224 的表达水平,探讨血清miR-224 与原发性肝癌预后的关系。方法：采用实时荧光定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)方法,分别检测40 例原发性肝癌患者,20例慢性肝炎患者,20 例慢性肝硬化患者及20 例正常人的血清标本中miR-224 的表达水平。分析血清miR-224 的表达水平与AFP和MMP-9的相关性。结果：原发性肝癌患者血清miR-224 的表达水平明显高 于正常人、慢性肝炎和慢性肝硬化患者(P<0.05)。皮尔森相关分析结果显示原发性肝癌患者血清miR-224 的表达与AFP 和 MMP-9 呈正相关。血清miR-224 低表达组术后复发/转移率显著低于高表达组,术后生存率则高于高表达组(P<0.01)。结论： miR-224 在原发性肝癌患者的血清中呈高表达,其血清表达水平与原发性肝癌的临床预后密切相关。这提示我们,miR-224 可能 成为新的原发性肝癌检测标记物和潜在的原发性肝癌预后分子标志物。     

大鼠移植性肝癌(BERH-2)的研究 Ⅰ.建株、形态和超微结构及甲胎蛋白的研究

1974年在Wistar品系大鼠用DENA诱发得原发性肝癌,移植于同品系幼鼠建立了一株AFP为阳性的大鼠移植性肝癌,命名为BERH-2。病理鉴定为肝细胞肝癌,至今已三年多,传至第70余代,目前生长稳定。利用免疫学方法测定这株BERH-2肝癌的原发灶及建株过程中各代宿主的血清,AFP恒呈阳性。超微结构表明存在着基质电子密度不同的两类细胞。BERH-2肝癌的生长与宿主血清中AFP含量的增加呈平行的正相关。     

血清AFP,CEA,CA125单独或联合检测对原发性肝癌早期诊断的临床价值研究

目的:探讨血清中甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)单独以及联合检测对于原发性肝癌的早期诊断临床价值。方法:选择2012年1月~2016年6月在我院检验科确诊的120例原发性肝癌患者作为观察组,并以80例健康志愿者作为对照组,检测和比较两组的AFP、CEA和CA125水平,分析血清AFP、CEA、CA125单项及联合检测检出原发性肝癌的阳性率和约登指数。结果:观察组血清AFP(319.53±35.78 ng/mL)、CEA(81.4±27.8 ng/mL)、CA125(20.67±4.61 ng/mL)水平均明显高于健康对照组(P0.05)。血清AFP、CEA、CA125在单独检测时诊断原发性肝癌的敏感性分别为65%(78/120)、75%(90/120)和60%(72/120),而三者的联合检测能够使检测的敏感性达到92%(112/120),显著高于单独检测时的敏感度(P0.05)。血清AFP、CEA、CA125单项检测约登指数均显著低于联合检测(P0.05)。结论:相较于血清AFP、CEA、CA125的单独检测,三者联合检测可明显提高原发性肝癌的检出率。