沉默FBI-1基因对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察短发夹状RNA (short hairpin RNA, shRNA)介导的人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子1 (FBI-1)基因沉默对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响。用qRT-PCR和Western blot分别检测FBI-1、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3和Survivin的mRNA和/或蛋白的表达水平;采用shRNA干扰技术沉默MDA-MB-231细胞中FBI-1基因的表达;用CCK-8法以及克隆形成实验检测细胞增殖;用流式细胞术检测细胞凋亡;用裸鼠皮下成瘤实验检测细胞的成瘤能力。结果显示,MDA-MB-231细胞的FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于正常乳腺上皮细胞MCF-10A;经shRNA靶向沉默FBI-1基因表达后,细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡率显著增高,伴随Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下调、Bax蛋白表达显著上调和Caspase 3活化,MDA-MB-231细胞的裸鼠皮下成瘤能力受抑制。以上结果提示,靶向沉默FBI-1基因表达可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋亡并抑制细胞的裸鼠皮下成瘤能力。     

基于核因子相关因子2/血红素加氧酶-1信号通路探讨异荭草素对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

摘要 目的：探讨异荭草素（ISO）对乳腺癌（BC）细胞恶性生物学行为及核因子相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路的影响。方法：体外培养人BC细胞系MDA-MB-231并分组：MDA-MB-231组、MDA-MB-231+ISO组（100 μmol/L ISO处理）、MDA-MB-231+ISO+OE-NC组（转染OE-NC后用100 μmol/L ISO处理）、MDA-MB-231+ISO+OE-Nrf2组（转染OE-Nrf2后用100 μmol/L ISO处理）。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测MDA-MB-231细胞增殖;流式细胞术检测MDA-MB-231细胞周期和凋亡;Transwell实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;Western blot检测Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白及凋亡蛋白表达。结果：与MDA-MB-231组相比,MDA-MB-231+ISO组、MDA-MB-231+ISO+OE-NC组细胞活力、S期和G2期细胞比例、迁移和侵袭能力、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Nrf2、HO-1、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白水平显著下降（P<0.05）,细胞凋亡率、G1/G0期细胞比例以及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著上升（P<0.05）。与MDA-MB-231+ISO组相比,MDA-MB-231+ISO+OE-Nrf2组细胞活力、S期和G2期细胞比例、迁移和侵袭能力、Bcl-2、Nrf2、HO-1、MMP-9蛋白水平显著上升（P<0.05）,细胞凋亡率、G1/G0期细胞比例以及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论：ISO可能通过抑制Nrf2/HO-1信号通路,抑制MDA-MB-231细胞恶性增殖、迁移和侵袭等行为。     

山柰酚通过线粒体凋亡通路诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的机制研究

本文旨在探讨山柰酚对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用及其可能的分子机制。用不同浓度的山柰酚处理细胞,CCK-8法检测山柰酚对MDA-MB-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A活力的影响,倒置显微镜观察各组细胞形态变化,克隆形成法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的改变,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt C)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的蛋白表达,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)的活性。结果显示,山柰酚体外可显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡,且对正常乳腺上皮细胞活力无影响,降低细胞线粒体膜电位,上调Bax、Cyt C的表达,下降Bcl-2和Cyclin D1的表达,增强Caspase-3、Caspase-9活性。结果表明,线粒体凋亡信号通路的激活是山柰酚诱导MDA-MB-231细胞凋亡的途径之一。     

辣椒碱对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制

本研究旨在观察辣椒碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响,并探讨其分子机制。乳腺癌MDA-MB-231细胞经不同浓度辣椒碱作用24 h后进行实验,采用CCK-8法检测细胞活性,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭率,采用Western blot检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中c-Src、p-c-Src(Tyr416)、黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)、p-FAK(Tyr576/577)、桩蛋白(Paxillin)、p-Paxillin(Tyr118)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中MMP2和MMP9的mRNA水平。结果显示,10~50μmol/L辣椒碱对MDA-MB-231细胞存活率无显著影响,100~500μmol/L辣椒碱显著降低MDA-MB-231细胞存活率(P0.05);与正常对照组比较,25和50μmol/L辣椒碱组MDA-MB-231细胞体外迁移率和侵袭率均显著降低(P0.05),c-Src、FAK和Paxillin蛋白的磷酸化水平均显著下降(P0.05),MMP2和MMP9的mRNA和蛋白表达水平均下降(P0.05);并且辣椒碱对MDA-MB-231细胞的上述作用具有剂量依赖性。以上结果提示,低浓度辣椒碱可剂量依赖性地抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭,其机制可能涉及辣椒碱对c-Src/FAK/Paxillin信号通路以及MMP2和MMP9表达的抑制。     

芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移的影响

目的:研究芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其作用 机制.方法:芹菜素处理MDA-MB-231细胞,MTT法及流式法检测细胞增殖、粘附和周期变化 ;Millicell小室检测新生血管形成、侵袭转移能力的改变;免疫细胞化学检测Bcl-2、Bax 、cyclinB1、VEGF、MMP-9、E-cd蛋白的表达差异.结果:芹菜素明显抑 制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋,G2/M期细胞比例由4.79%增至36.12%(P＜0.05 );细胞的黏附、新生血管形成 能力均显著降低;侵袭转移穿膜细胞数明显低于对照组,分别由88.67、106.33降至45.67、 68(P＜0.05);Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP-9蛋白表达明显降低;Bax,E-cd的表达则增 加.结论:芹菜素有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期, 诱导细胞凋亡;抑制 细胞粘附、新生血管形成、侵袭与转移的能力,其机制与抑制Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP 9表达,促进Bax、E-cd表达有关.     

SK-1基因敲除联合阿霉素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移

目的:将乳腺癌MDA-MB-231细胞的SK-1基因敲除,结合阿霉素对细胞增殖和迁移的抑制作用,研究乳腺癌的治疗新方法.方法:将阿霉素分 别感染野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞,3H-TdR掺入法分析细胞增殖,RT-PCR检测细 胞内SK-1的mRNA表达量,Western blot 检测SK-1蛋白表达及细胞凋亡相关因子caspase 3的蛋白表达,Transwell法分析细胞迁移. 结果:阿霉素感染MDA-MB-231细胞,抑制细胞增殖和迁移,细胞存活率明 显下降;阿霉素呈浓度依赖性及时间依赖性抑制SK-1 mRNA及蛋白水平表达;将SK-1基因敲 除,细胞迁移率下降,协同阿霉素的作用,迁移率进一步下降,且将导致细胞凋亡.结论: SK-1基因敲除可增强阿霉素对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用.     

二氢杨梅素抑制人乳腺癌细胞侵袭和下调MMP-2/-9蛋白表达研究

藤茶活性成分二氢杨梅素(3, 5, 7, 3′, 4′, 5′-六羟基-2, 3-二氢黄酮醇,DMY)体外对几种癌细胞具有抗增殖作用,但机制尚未完全清楚．本文研究DMY对人高转移型乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响,并探讨可能的机制．用MTT法检测DMY对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率;明胶酶谱分析明胶酶活力;基质金属蛋白酶(MMP-2/-9)的基因表达水平和蛋白质表达水平分别利用实时定量PCR和Western blot分析进行检测．Transwell模型检测DMY对肿瘤细胞侵袭的影响．结果显示,DMY以剂量依赖方式抑制MDA-MB-231细胞的增殖,作用48 h的IC50为73.6 mg/L．DMY显著抑制明胶酶活性和MMP-2/-9蛋白表达,并抑制MMP-2/-9 的mRNA表达水平．此外,DMY不依赖细胞毒作用和以剂量依赖方式抑制MDA- MB-231细胞的侵袭．这些结果提示：DMY能显著抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭和增殖, 其侵袭抑制的机制可能与其下调MMP-2/-9蛋白表达水平相关．     

GPER介导的丹参酮ⅡA抗三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移作用机制研究

摘要 目的：基于体外细胞实验,探索丹参酮ⅡA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的抑制作用及其分子机制。方法：选取三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,利用细胞增殖实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞增殖的作用,并筛选适宜的药物浓度;应用划痕实验检测丹参酮ⅡA对MDA-MB-231细胞迁移率的影响;Western Blot法检测丹参酮ⅡA对G蛋白偶联雌激素受体（G protein-coupled estrogen receptor,GPER）及基质金属蛋白酶9（Matrix metalloprotein-9,MMP-9）表达的影响。结果：细胞增殖实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈剂量依赖性（P＜0.05）;划痕实验结果显示,丹参酮ⅡA可以抑制MDA-MB-231细胞迁移,且呈剂量依赖性（P＜0.01）,加入GPER特异性抑制剂G15后迁移率有所上升（P＜0.01）。Western Blot结果显示,丹参酮ⅡA可以显著下调GPER和MMP-9蛋白的表达水平并呈剂量依赖性（P＜0.05）,加入GPER特异性抑制剂G15后,MMP-9表达有所上升（P＜0.01）。结论：丹参酮ⅡA可以抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移,其机制可能与抑制GPER介导的MMP-9表达相关。     

生物钟基因PER2在人口腔鳞癌细胞中具有重要的抑癌作用

探讨生物钟基因PER2对人口腔鳞癌SCC9细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响和机理。利用RNA干扰技术沉默SCC9细胞中PER2基因,应用实时荧光定量PCR检测Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGFm RNA的表达改变;流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成率,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变。沉默PER2基因后,SCC9细胞凋亡指数显著降低(p0.05),细胞增殖指数、细胞迁移和侵袭能力显著升高(均p0.05)。PER2沉默后Ki-67、MDM2、Bcl-2、C-myc、MMP-2和VEGF m RNA的表达水平显著升高(均p0.05),p53、Bax和Timp-2 m RNA的表达水平显著降低(均p0.05)。研究表明,生物钟基因PER2通过调控Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGF影响癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。因此,对PER2的深入研究有可能为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。     

毛钩藤碱通过线粒体途径诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

本研究旨在观察毛钩藤碱对人乳腺癌细胞的抑制作用,并探讨其分子机制。选取人正常乳腺上皮MCF-10A细胞、乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),采用Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 9、cleaved-caspase 3以及胞浆中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的蛋白水平。结果显示,毛钩藤碱可显著降低MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活率,且该作用呈时间和剂量依赖性(P0.05);毛钩藤碱作用MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞48 h的IC50分别为447.79和179.06μmol/L;毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡和MMP去极化(P0.05),促进线粒体释放Cyt C(P0.05),激活caspase 9和caspase 3(P0.05),这些作用均可被线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)特异性阻断剂环孢素A(cyclosporin A,CsA)显著抑制(P0.05);此外,毛钩藤碱显著下调MDA-MB-231细胞Bcl-2蛋白水平并上调Bax蛋白水平(P0.05)。以上结果提示,毛钩藤碱可诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡,这可能与其调低Bcl-2/Bax蛋白比值,从而引起MPTP持续开放和Cyt C释放,最终导致caspase 9和caspase 3活化有关。     

C-藻蓝蛋白对乳腺癌细胞的抗癌作用研究

C-藻蓝蛋白具有抗癌、抗氧化、抗炎活性等多种功能,然而其对乳腺癌细胞的抗癌作用及机制尚不明确。本研究应用不同浓度(0~500μg/mL)的C-藻蓝蛋白处理人乳腺癌细胞系MDA-MB-468。研究显示,C-藻蓝蛋白以剂量依赖性方式抑制MDA-MB-468细胞的增殖并降低细胞的菌落形成能力。C-藻蓝蛋白通过上调了Fas和cleaved-caspase 3的表达并下调Bcl-2的表达来诱导细胞凋亡。C-藻蓝蛋白处理以剂量依赖性方式显著降低COX-2的表达并抑制细胞迁移能力。C-藻环蛋白以剂量依赖性方式促进p38 MAPK和JNK的磷酸化,p38 MAPK和JNK抑制剂处理可显著抑制C-藻红蛋白诱导的细胞死亡。本研究表明C-藻蓝蛋白能够抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞迁移能力。C-藻蓝蛋白的抗癌机制可能与激活p38 MAPK和JNK信号传导有关。     

蝎毒多肽提取物的抗血管生成作用

用不同浓度的东亚钳蝎素的多肽提取物PESV(4～20μg／ml)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察HUVEC增殖活性和凋亡变化,增殖活性检测采用BrdU掺入的ELISA法,凋亡水平和凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的检测采用流式细胞术检测;用鸡胚尿囊膜(CAM)显示PESV对血管生成的抑制作用。结果显示,PESV抑制HUVEC的增殖,而对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖无明显影响;PESV作用72h后,HUVEC凋亡相关基因Bcl-2表达降低,Bax表达增加,凋亡细胞比例增至10．5％,明显高于对照组;0．5mgPESV能明显抑制CAM新生血管的形成。因此,PESV具有良好的体外抗肿瘤血管生成活性,PESV作为一种肿瘤血管抑制剂的天然药物来源,其有效成分和药理作用有待进一步研究。     

槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞的凋亡作用及机制研究

摘要 目的：探讨槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞的凋亡作用,并探讨其作用机制。方法：采用活细胞计数法(CCK-8)测定槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞增殖的作用,分别采用细胞划痕实验和Transwell实验测定槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞迁移和侵袭的影响,采用流式细胞术测定槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞凋亡的作用,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹法(West-blotting)测定槲皮素对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞Fas、FasL、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白表达的影响。结果：槲皮素（50~200 μmol/L）作用乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞 24 h、48 h和72 h对其增殖具有显著的抑制作用,并且呈浓度依赖性（P<0.05）;细胞划痕实验中槲皮素50 μmol/L和100 μmol/L可使乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞划痕宽度较对照组显著增加（P<0.05）;Transwell试验中槲皮素50 μmol/L和100 μmol/L可使乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435穿膜细胞较对照组显著降低（P<0.05）;槲皮素50 μmol/L和100 μmol/L可使乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞凋亡率较对照组显著升高（P<0.05）;槲皮素50 μmol/L和100 μmol/L可使乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞中Bcl-2 mRNA表达较对照组显著降低（P<0.05）,Fas、FasL和Bax mRNA表达较对照组显著升高（P<0.05）;槲皮素50 μmol/L和100 μmol/L可使乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞中Bcl-2 蛋白表达较对照组显著降低（P<0.05）,Fas、FasL和Bax 蛋白表达较对照组显著升高（P<0.05）。结论：槲皮素可促进乳腺癌细胞的凋亡,可能与其通过作用Fas/FasL凋亡信号通路而激活外源性凋亡途径,通过作用Bcl-2凋亡信号通路而激活内源性凋亡途径有关。     

沉默CXCL1基因抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移、侵袭的研究

为探讨CXCL1基因对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移、侵袭作用的影响,该研究设计针对CXCL1基因的小干扰RNA,用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定试验分别在RNA和蛋白质水平上检测干扰效率;采用流式细胞术学技术检测细胞的周期和凋亡情况;采用transwell迁移和侵袭试验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。结果显示,与siRNA-NC组细胞相比,siCXCL1-1、siCXCL1-2、siCXCL1-3细胞中CXCL1基因的mRNA和蛋白表达均下调,且si CXCL1-3干扰效率最高,mRNA及蛋白表达水平分别降低了75%(p<0.01)和46%(p<0.01)。细胞凋亡试验和细胞周期试验结果显示,沉默CXCL1基因后对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的凋亡和周期无明显影响,差异无统计学意义(p>0.05)。transwell小室迁移和侵袭试验显示,沉默CXCL1基因能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭能力(p<0.01)。研究成果为临床乳腺癌中以CXCL1基因为靶点的分子治疗提供了理论依据。     

淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡及迁移的影响

观察淫羊藿苷对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡及迁移的影响。B16细胞经不同浓度的淫羊藿苷处理后,采用MTT法检测其对B16细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色法观察B16细胞形态的变化,Annexin VFITC/PI双染法检测B16细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的改变。同时,细胞划痕实验及Transwell小室迁移实验检测淫羊藿苷对B16细胞迁移能力的影响。与对照组相比较,淫羊藿苷能明显抑制B16细胞的增殖,且具有浓度依赖性。B16细胞形态由树突状变为固缩圆球状,染色质凝集,细胞凋亡率升高,相关蛋白Bax和Caspase-3的表达升高,Bcl-2的表达降低。另外,淫羊藿苷对B16细胞的迁移能力也具有明显抑制作用,并呈现浓度依赖性。由此可知淫羊藿苷能有效抑制B16细胞的增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移能力。     

白藜芦醇对人子宫内膜癌细胞系AN3CA 增殖和凋亡效应 及其机制探讨

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人子宫内膜癌细胞AN3CA的增殖抑制和凋亡诱导效应及可能存在的机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)法检测Res对AN3CA的增殖影响;流式细胞术检测Res对细胞周期分布和凋亡影响;荧光实时定量PCR检测Res对细胞Bcl-2、Bax和MMP-9mRNA表达水平的影响;Western Blot方法检测Res对PCNA、Bcl-2、Bax及ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平的影响。结果:Res对子宫内膜癌细胞AN3CA具有显著的生长抑制作用(P<0.01),呈时间-剂量依赖性;不同浓度Res处理细胞G0/G1期比例显著增加伴随S期细胞数的减少;细胞凋亡率明显增高,200μmol/l Res处理48h凋亡率可达30.96%±2.041%(P<0.01)。与对照组相比,Res能抑制PCNA的蛋白表达量,增加Bax和降低Bcl-2转录和蛋白水平的表达量。Res在短时间内(0.5-1h)激活ERK1/2的磷酸化表达但随着作用时间延长(4-48h)其表现为抑制效应。结论:Res具有抑制AN3CA细胞增殖,诱导细胞G0/G1期阻滞和凋亡的效应。Res诱导凋亡可能是通过上调Bax,下调Bcl-2发挥作用,其抗癌作用机制可能与ERK1/2通路失调相关。     

UPF1在乳腺癌细胞中的表达与作用的研究

目的：观察UPF1在乳腺癌中的表达,对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭的影响,及其可能的作用机制。方法：使用生物信息学方法分析UPF1在乳腺癌组织中的表达及作用,构建UPF1小干扰RNA(siRNA)并转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞株,构建外源性的UPF1低表达的重组细胞,通过实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测重组细胞中UPF1的表达水平;CCK-8法检测细胞的增殖;划痕愈合实验及Transwell小室法分别检测细胞横向和纵向迁移以及侵袭能力;实时荧光定量PCR法检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase, MMP9)以及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)标志物E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达量的变化;蛋白质印迹法检测MMP2、E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化。结果：生物信息学分析表明UPF1在乳腺癌肿瘤组织中高表达,与免疫细胞浸润相关,并与抑癌基因表达呈正相关,mRNA水平进一步验证UPF1在...     

半边旗二萜类成分PAG通过ROS诱导肝癌细胞凋亡的作用研究

探讨半边旗二萜类成分Pteisolic acid G(PAG)对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及作用机制。用不同浓度的PAG处理HepG2细胞后,采用MTT法检测细胞存活率;采用PI单染法检测细胞周期分布;采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;采用RT-PCR和Western Blotting检测细胞内mRNA和蛋白表达情况;采用DCFH-DA法检测细胞内ROS水平,采用ROS抑制剂乙酰半胱氨酸(NAC)评价PAG细胞增殖抑制作用对ROS的依赖性。结果表明,在24 h、48 h和72 h时,PAG可剂量依赖性地抑制HepG2细胞的增殖(p0.05),IC_(50)分别为64.8μmol/L,38.5μmol/L和24.8μmol/L;用药24 h时PAG可剂量依赖性地使HepG2细胞阻滞在G_2/M期,同时增加HepG2细胞凋亡率(p0.05);PAG可剂量依赖性地降低HepG2细胞内Bcl-2 mRNA和caspase 3、PARP、Bcl-2蛋白的表达(p0.05),增加Bax mRNA和actived-caspase 3、cleaved-PARP、Bax蛋白的表达(p0.05)。当使用1 mmol/L的ROS抑制剂NAC预处理HepG2细胞时,PAG对HepG2细胞增殖抑制作用被显著阻断。上述结果表明,半边旗二萜类成分PAG可提高Bax/Bcl-2的基因和蛋白表达比值,从而诱导肝癌细胞HepG2凋亡,该作用可能是通过升高细胞内ROS水平来实现的。     

Nampt及高糖高胰岛素微环境对人顺铂耐药肺癌细胞株增殖和转移的影响

摘要 目的：探究烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）及高糖高胰岛素（HG+HI）微环境对人顺铂耐药肺癌细胞增殖和转移的影响。方法：将人顺铂耐药细胞株A549/DDP分为6组（n=6）：对照组（control）、高糖高胰岛素干预组（HH，使用添加30 mmol/L的葡萄糖和500 mU/L的胰岛素的培养基培养72 h）、分别转染sh-NC和sh-Nampt组（sh-NC和sh-Nampt，使用Lipofectamine 2000将sh-NC和sh-Nampt分别转染到细胞中，转染时间为48 h）、HH干预sh-NC和sh-Nampt组（HH+sh-NC和HH+sh-Nampt）。每组6个重复样本。qRT-PCR检测转染效率，MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell检测细胞迁移和侵袭，qRT-PCR检测Nampt mRNA，Western blot检测Nampt、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白表达。结果：与对照组和sh-NC组比较，sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，而细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。与对照组和sh-NC组比较，HH组和HH+sh-NC组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平升高，Bax蛋白表达水平降低（P<0.005）。与HH组和HH+sh-NC组比较，HH+sh-Nampt组的Nampt mRNA和蛋白表达水平、相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量降低，细胞凋亡率升高，Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Nampt、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高（P<0.005）。结论：高糖高胰岛素微环境可能通过上调Nampt/PI3K/AKT信号通路诱导人顺铂耐药肺癌细胞的增殖和转移。     

鞘氨醇激酶1参与依托泊苷抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的研究

目的利用抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞中SK-1基因表达,结合依托泊苷对细胞增殖的影响,研究乳腺癌的治疗新方法。方法将依托泊苷分别处理野生型及SK-1敲除型MDA-MB-231细胞,^3H-TdR掺入法分析细胞增殖,Transwell法分析细胞迁移,Western印迹检测SK-1蛋白表达及细胞周期检验点相关信号因子的蛋白表达,RT-PCR检测细胞内SK-1的mRNA表达量。结果依托泊苷在较高剂量时,MDA-MB-231细胞存活率明显下降,但依托泊苷却呈浓度依赖性促进乳腺癌细胞SK-1 mRNA及蛋白水平表达,将SK-1敲除,细胞迁移率下降,而且可以增强G1期各抑癌基因的激活或高表达,使细胞周期阻滞。结论SK-1基因敲除有效增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。