瑞香素及噁唑类小分子抑制吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)的研究

吲哚胺-2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)在肿瘤免疫中发挥了重要作用,为了获得新型的IDO1小分子抑制剂,本研究利用He La细胞系建立了IDO1抑制剂筛选模型,筛选抑制IDO1活性的天然小分子化合物。将He La细胞接种于48孔板中,加入干扰素-γ(IFN-γ)诱导He La细胞中IDO1的表达,检测HeLa细胞分泌IDO1的酶代谢活性。对化合物库筛选后发现瑞香素(Daphnetin)和一个噁唑类小分子ZH-26能够抑制IDO1酶活性,采用Graph Pad Prism计算瑞香素和ZH-26的IC50值,结果显示瑞香素的IC50为16. 50±0. 33μM,ZH-26的IC50为4. 68±0. 21μM。进一步在HEK-293A细胞中过表达IDO1,不同浓度瑞香素和ZH-26处理细胞后也表现出对IDO1活性的抑制作用。采用Western blot方法发现瑞香素显著下调IFN-γ诱导的IDO1蛋白表达,而ZH-26则对IFN-γ诱导的IDO1的表达没有影响。综上,瑞香素和ZH-26在He La细胞内没有发现明显的细胞毒作用。本实验首次发现了瑞香素和ZH-26具有抑制IDO1的活性,不但为了解瑞香素这一天然来源临床药物的抗肿瘤机制提供新的视角,也为开发新的靶向IDO1的肿瘤免疫治疗候选药物奠定了基础。     

瑞香素及噁唑类小分子抑制吲哚胺-2,3-双加氧酶1(IDO1)的研究北大核心CSCD

吲哚胺-2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)在肿瘤免疫中发挥了重要作用,为了获得新型的IDO1小分子抑制剂,本研究利用He La细胞系建立了IDO1抑制剂筛选模型,筛选抑制IDO1活性的天然小分子化合物。将He La细胞接种于48孔板中,加入干扰素-γ(IFN-γ)诱导He La细胞中IDO1的表达,检测HeLa细胞分泌IDO1的酶代谢活性。对化合物库筛选后发现瑞香素(Daphnetin)和一个噁唑类小分子ZH-26能够抑制IDO1酶活性,采用Graph Pad Prism计算瑞香素和ZH-26的IC50值,结果显示瑞香素的IC50为16. 50±0. 33μM,ZH-26的IC50为4. 68±0. 21μM。进一步在HEK-293A细胞中过表达IDO1,不同浓度瑞香素和ZH-26处理细胞后也表现出对IDO1活性的抑制作用。采用Western blot方法发现瑞香素显著下调IFN-γ诱导的IDO1蛋白表达,而ZH-26则对IFN-γ诱导的IDO1的表达没有影响。综上,瑞香素和ZH-26在He La细胞内没有发现明显的细胞毒作用。本实验首次发现了瑞香素和ZH-26具有抑制IDO1的活性,不但为了解瑞香素这一天然来源临床药物的抗肿瘤机制提供新的视角,也为开发新的靶向IDO1的肿瘤免疫治疗候选药物奠定了基础。     

黄酮类化合物对大豆脂肪氧合酶的抑制作用研究

研究了几种不同黄酮化合物(黄酮醇类化合物、异黄酮类化合物、查尔酮类化合物、二氢黄酮类化合物)对大豆脂肪氧合酶(LOX)的抑制作用,并根据实验结果初步探讨了不同结构黄酮类化合物对大豆脂肪氧合酶抑制作用的结构-活性抑制作用关系.结果表明:黄酮化合物均可对LOX有不同程度的抑制作用,除橙皮苷外,它们的抑制效果均与加入量成正比,黄酮醇类化合物的抑制效果最为明显,它们对LOX的半数抑制浓度(IC50)依次为芦丁>槲皮素>根皮素>大豆黄素>异甘草素>芒柄花素>甘草素,而橙皮苷的最大抑制率为0.47 μg/mL时的45.1%.     

甘草黄酮类化合物对酪氨酸酶单酚酶的抑制

研究了甘草中四种黄酮类化合物甘草甙、异甘草素．葡萄糖芹菜甙、异甘草甙和甘草查耳酮甲对酪氨酸酶单酚酶活性的抑制。结果表明异甘草素-葡萄糖芹菜甙、异甘草甙和甘草查耳酮甲的IC50分别为0．072mM,,0．038mM,0.0258mM,它们都属于竞争性抑制剂,甘草甙没有抑制活性。研究表明,异甘草素．葡萄糖芹菜甙、异甘草甙和甘草查耳酮甲可以作为潜在的美白化妆品添加剂。     

组氨酸激酶(YycG)在筛选肺炎链球菌抑制剂中的应用

为了获得具有体外活性的肺炎链球菌组氨酸激酶YycG并利用其筛选寻找新的抑制剂。原核表达组氨酸激酶YycG的激酶功能域,经SDS-PAGE,Western blot鉴定及镍层析柱纯化后,采用激酶试剂盒检测其激酶活性;利用对其激酶活性的抑制作用从105种候选化合物中筛选有效的抑制剂,并通过实验验证抑制剂的抗菌作用。原核表达得到约35 kDa的目的蛋白激酶域片段YycG′,其纯度达 95 %,并具有体外水解ATP的激酶活性;利用其活性筛选得到数种不同抑制效果的小分子化合物,且体外验证具有较好的抑菌效果。通过肺炎链球菌组氨酸激酶YycG活性筛选找到的小分子抑制剂可为进一步研发与该菌相关的药物或消毒剂提供基础。     

宁夏野生甘草中产甘草黄酮耐盐内生真菌分离及其DPPH自由基清除作用

采用组织分离法,在不含盐及含盐PDA培养基上分离、纯化内生菌,以甘草苷等8种甘草黄酮为对照品,分析发酵产物;DPPH自由基清除法测定清除率。共得到108株内生菌,TLC发现31株可能产甘草黄酮;HPLC-UV发现产甘草苷7株,产异甘草苷3株,产甘草素3株,产甘草查尔酮A3株,产刺甘草查尔酮1株,均为耐盐菌;产甘草苷、异甘草苷、甘草查尔酮A、刺甘草查尔酮的部分菌株有较强DPPH清除率;产甘草苷和异甘草苷的菌株8-5-Y-2活性最强,与甘草总黄酮相当,强于甘草查尔酮A。盐协迫得到产甘草黄酮,且具较强DPPH自由基清除活性的耐盐内生真菌,为资源替代奠定基础。     

基于谱效关系的茴香根皮抗肝纤维化有效成分筛选及其机制探讨

为探讨茴香根皮治疗肝纤维化的化学成分,揭示其药效物质基础和作用机制。本研究应用UPLC-Orbitrap-MS/MS技术定性鉴别茴香根皮95%乙醇提取物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位的化学成分,根据质谱裂解规律和对照品验证及文献检索推测鉴定了各组分的58个共有化合物;采用MTT法检测各组分对HSC-T6细胞增殖的影响,谱效关系筛选抗肝纤维化潜在活性化合物,结果显示茴香根皮抗肝纤维化贡献较大的成分是二氢辣椒碱、去氢骆驼蓬碱、异莨菪亭;体外实验验证单体化合物抗肝纤维化活性及机制,结果表明二氢辣椒碱、去氢骆驼蓬碱和异莨菪亭对活化的HSC-T6具有较好的抑制作用(P<0.01、P<0.001),均可以抑制α-SMA的表达(P<0.01、P<0.001);二氢辣椒碱和去氢骆驼蓬碱具有较强的促凋亡作用,可以下调Bax/Bcl-2和Caspase3的相对表达量(P<0.05、P<0.01)。表明茴香根皮抗肝纤维化的药效物质可能为二氢辣椒碱、去氢骆驼蓬碱和异莨菪亭、东莨菪内酯、7-羟基香豆素等,其机制可能是通过抑制肝星状细胞活化、调节Bax/Bcl-...     

四种不同甘草有效成分的抗肿瘤血管新生作用

目的:探讨甘草素、甘草苷、异甘草素、异甘草苷四种甘草中的有效成分抗血管新生作用.方法:以融合细胞株Eahy926为研究对象,利用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium MTT)法观察四种药物对内皮细胞增殖的影响,确定IC50以及有效用药浓度;划痕法观察药物对内皮细胞迁移的影响;明胶酶谱法、Western-blot观察药物对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase MMP-2)的影响;ELISA测定药物对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor VEGF)蛋白含量的作用.结果:异甘草素IC50为40.3μM±2.5 μ M,甘草素IC50为181.5 μ M±4.1 μ M,异甘草苷IC50为320.2μ M±2.8μ M甘草苷IC50为452.4μ M±3.6μ M.当取相同的药物浓度60μ M时,均抑制基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的分泌,抑制细胞迁移,抑制VEGF的作用能力为:异甘草素>甘草素>异甘草苷>甘草苷.结论:四种药物均能抑制肿瘤血管新生,其效果异甘草素>甘草素素>异甘草苷>甘草苷.     

小G蛋白抑制剂CASIN的体外抗真菌活性研究CSCD

目的通过对小G蛋白抑制剂体外抗真菌活性的测定,筛选具有新结构类型的抗真菌活性化合物。方法采用微量液基稀释法考察不同小G蛋白抑制剂对于念珠菌的最低抑菌浓度(MIC),并从中筛选活性较强的化合物进一步进行抗真菌谱测定;采用时间-生长曲线和时间-杀菌曲线考察CASIN对于白念珠菌生长增殖的影响;采用菌丝诱导实验考察化合物CASIN对于白念珠菌菌丝形成的抑制效果;采用甲基四氮盐(XTT)法考察化合物CASIN对于白念珠菌生物被膜形成的抑制作用。结果在考察的小G蛋白抑制剂中,CASIN的体外抗真菌活性最强,对于近平滑念珠菌、克柔念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌中均有较好的抑制作用,MIC为8~16μg/mL。16μg/mL CASIN可以有效抑制YPD培养基中白念珠菌的生长增殖,也在RPMI1640培养基中展现出对白念珠菌的杀菌活性;当培养基中CASIN浓度高于8μg/mL时,白念珠菌菌丝受到明显抑制;此外,8μg/mL的CASIN浓度对于白念珠菌的被膜生成具有80%以上的抑制率。结论小G蛋白抑制剂CASIN具有较强的体外抗念珠菌活性。     

热休克蛋白90 抑制剂的活性初步评价

目的:初步评价经计算机模拟筛选的Fs系列化合物对A549细胞的增殖抑制作用与对热休克蛋白90活性的抑制。方法:首先采用SRB(磺基罗丹明B)法观察26个化合物对A549肿瘤细胞增殖抑制活性,再进一步应用Western Blot方法对此类化合物在蛋白水平上对热休克蛋白90活性的抑制进行评价。以热休克蛋白70的表达增加作为热休克蛋白90活性是否被抑制的参考指标。结果:在Fs系列化合物中Fs-1、Fs-8、Fs-24对A549细胞增殖有明显抑制,且能明显上调Hsp70蛋白的表达,但同时Hsp90蛋白的表达量并不受影响。其余化合物在两种方法中显示均无明显抑制作用。结论:在经计算机模拟筛选出的26种Fs系列化合物中Fs-1、Fs-8、Fs-24可抑制A549细胞的增殖,可能是通过对Hsp90活性的抑制而发挥作用,经筛选其余Fs系列化合物抑制A549细胞增殖与抑制Hsp90活性作用均不显著。Fs-1、Fs-8、Fs-24类化合物作用的初步探索将为研制Hsp90靶向抑制剂类药物开辟新途径。     

研究报告：槲皮苷： 一种抑制钙调蛋白磷酸酶（CN）的新型免疫抑制剂

目的以钙调蛋白磷酸酶(CN)为靶酶,从中草药中寻找高效、低毒的免疫抑制剂。方法以CN为靶点,筛选并分离能够抑制其活性的天然化合物。在细胞和动物水平评价该化合物的免疫抑制效果及毒副作用,并通过荧光猝灭、分子对接、免疫印迹、双荧光素酶报告基因、实时定量PCR等实验探究天然化合物与CN的作用机理及可能的免疫抑制作用机制。结果槲皮苷在体外和细胞内均能抑制CN的活性,并且能够有效抑制小鼠脾细胞的增殖,缓解小鼠迟发超敏反应。毒理研究结果显示,槲皮苷对实验小鼠无急性毒性,且毒副作用很小。荧光猝灭实验和分子对接分析表明,槲皮苷可能与CN上的两个位点相结合,并通过CN-NFAT通路参与调节免疫反应。结论通过筛选获得了新型CN抑制剂槲皮苷。槲皮苷具有成为新型低毒免疫抑制剂的潜在可能。     

降低细胞内tTG活性可使细胞获得对TNF-α的抗性

 用 Northern印迹证实在 He La细胞中有 t TG的表达 ,且这种表达受 TNF-α的上调 .构建t TG反义真核表达质粒并转染 He La细胞 ,用 G41 8抗性筛选稳定表达的转染细胞 ,并用 Northern印迹和 t TG活性测定进一步分析反义 t TG的转录 .用结晶紫及 MTT法证实阳性细胞克隆获得了对 TNF- α的抗性 ,而转染表达载体 pc DNA3的细胞仍对 TNF- α敏感 .结果表明降低 t TG活性能使细胞对 TNF- α诱发的细胞凋亡敏感性降低     

96种中药单体抑制血管生成的活性研究

采用内皮细胞高通量筛选模型和鸡胚尿囊膜(CAM)实验筛选技术,分析96种中药单体的抑制血管生成的活性。筛选结果表明有11种中药单体对Eahy-926细胞的增殖有一定的抑制作用且呈剂量依赖关系,有10种中药单体具有抑制CAM血管形成的作用。秦皮素、汉防己甲素、和厚朴酚、蝙蝠葛碱、鲁斯可皂苷元、高粱姜素、染料木素、隐绿原酸、齐墩果酸和α-倒捻子素,这10种单体化合物值得进一步研究。     

阿尔泰独尾草和异翅独尾草提取物PTP1B抑制作用及动力学研究

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)在胰岛素信号通路中起负调控作用,PTP1B过表达使胰岛素受体蛋白酪氨酸去磷酸化而导致机体对胰岛素不敏感,继而产生2型糖尿病胰岛素抵抗。因此,PTP1B是筛选治疗糖尿病活性成分的重要靶点。本文通过体外人源PTP1B抑制剂筛选模型,以活性为导向对新疆两种特有独尾草进行抑制活性筛选。结果表明,两种独尾草属植物均具有良好的PTP1B抑制活性(IC_(50)分别为17.85和33.76μg/m L),在阿尔泰独尾草进一步分离得到化合物大黄酚-8-甲基乙酯,抑制活性为26.15±0.5μM,酶反应动力学研究表明其抑制类型为混合型抑制,抑制常数Ki值为39.12±8.56μM。本研究为异翅独尾草的进一步分离提供了理论依据。     

桄榔子黄酮类化学成分研究

桄榔子为桄榔(Arenga pinnata)的果实,具有明显的镇痛活性。为研究桄榔子的化学成分,该文采用反复硅胶柱色谱、ODS柱色谱法并结合HPLC法进行分离纯化,并运用 NMR 波谱技术鉴定化合物的结构,为植物资源的合理开发和可持续利用提供科学依据。结果表明:从桄榔子70%乙醇提取物中分离得到 12 个黄酮类化合物,分别鉴定为新落新妇苷(1)、甘草素(2)、染料木黄酮(3)、2, 4, 4''-三羟基查耳酮(4)、甘草苷(5)、染料木素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、异甘草苷(7)、新异甘草苷(8)、大豆苷(9)、7-O-primverosylformononetin(10)、异甘草素-葡萄糖-芹糖苷(11)、毛蕊异黄酮苷(12)。化合物1-12均为首次从桄榔属植物中分离得到。     

博落回杀灭鱼类指环虫和病原菌活性成分的研究

采用常压硅胶柱层析和RP-HPLC制备并结合杀虫、抑菌活性追踪的方法,从博落回中分离获得了杀灭金鱼指环虫和抑制鱼类病原菌的活性成分,通过TLC、UV、m.p.、IR、MS、1H NMR和13C NMR鉴定其为血根碱.杀灭指环虫试验结果表明:血根碱对指环虫有较强杀灭活性,在质量浓度为0.6 mg?L-1时的杀虫率达到100%.血根碱对6株水产致病菌的活性试验结果表明:对嗜水气单胞菌的活性最高,MIC和MBC分别为12.5和25μg·mL-1;对哈维弧菌、鳗弧菌、杀鲑气单胞菌史氏亚种的活性最弱,其MIC和MBC均分别为50和100μg·mL-1.血根碱杀灭鱼类指环虫活性较高,对6株水产病原菌都有明显抑制作用.     

基于选择性抑制mPGES-1的表达筛选抗炎中药

通过建立的选择性膜型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)表达抑制剂的体外细胞筛选模型,对50味中药共236个样品进行筛选。初筛中,筛选中药不同极性提取物对mPGES-1表达的抑制作用,抑制率50%的样品进入复筛;复筛中,检测初筛活性样品对环氧化酶(COX)-1和COX-2表达的抑制作用,抑制率均20%的样品认为是阳性物。结果表明,吲哚美辛对3种酶的抑制活性与文献报道相近;筛选发现泽泻组分1、蒲黄组分2对mPGES-1的表达有可重复的选择性抑制作用,对泽泻组分1、蒲黄组分2进行进一步研究,有望确定其抗炎的有效部位或化合物。     

异甘草素对人肺癌细胞株H460增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

研究异甘草素对人肺癌NCI-H460细胞增殖、周期及凋亡的影响,并探讨其相关分子机制为其治疗肺癌提供新的科学依据。取对数生长期人肺癌NCI-H460细胞,用不同浓度异甘草素处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化;PCR array检测肺癌相关基因mRNA表达;Western-blot检测p-p65,IκBα、IκBβ、Bax、Bcl-2表达量变化;细胞免疫荧光实验观察异甘草素对NF-κB p65分布的影响;结果显示,异甘草素能有效抑制人肺癌H460细胞的增殖和诱导细胞周期阻滞,并促进其凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化,抑制NF-κB p65入核使其不能发挥转录活性,最终影响其下游凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达来实现的。     

8-甲氧基二氢血根碱化感潜能的评估

以莴苣幼苗为材料,检测了分离自细果角茴香的生物碱对莴苣幼苗根生长及根毛发育的影响。结果表明:50~200μmol·L-1浓度范围内,8-甲氧基二氢血根碱对莴苣幼苗根长显著抑制;10、20和30μmol·L-18-甲氧基二氢血根碱对莴苣幼苗根毛的长度和数量有显著的抑制作用,且抑制作用均表现了浓度依赖性。通过对莴苣根尖细胞有丝分裂研究发现,50μmol·L-1的8-甲氧基二氢血根碱能显著抑制根尖细胞的有丝分裂,而且莴苣幼苗净增值率与根尖细胞的有丝分裂之间呈正相关,证明8-甲氧基二氢血根碱主要通过抑制根尖细胞有丝分裂对莴苣根的生长产生影响。     

西藏芽孢杆菌XZ7中Amicoumacin类抗生素的分离鉴定与生物活性研究

采用UPLC-DAD-MS分析发现西藏当雄土壤来源芽孢杆菌XZ7发酵液中的Amicoumacin类化合物,并利用反相柱层析和高效液相色谱对发现的3个Amicoumacin类化合物进行分离纯化;根据紫外光谱、高分辨质谱和核磁共振波谱数据及文献比对,鉴定3个化合物分别为:Bacilosarcin A(1)、Bacilosarcin B(2)和Bacilosarcin C(3)。抑菌实验结果表明化合物2对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制活性(MIC=4~16μg/m L);细胞毒性测试结果表明化合物1和2对HepG2肿瘤细胞具有较高的抑制作用,其中化合物2抑制作用最强,IC_(50)值为2.8μM。同时,化合物2对MCF-7和He La肿瘤细胞也有较强的细胞毒作用,IC_(50)值分别为6.2μM和4.0μM。