凤丹愈伤组织培养体系建立及丹皮酚含量测定

本文旨在建立凤丹(Paeonia ostii var.lishizhenii)愈伤组织培养及制取丹皮酚的技术体系,为细胞工程制药提供技术基础。凤丹去皮种子以70%乙醇(V/V)浸泡2.0 min和有效氯1.0%的二氯异氰尿酸钠溶液浸泡20 min,去污染率高达97.78%;剥取种胚接种在含6-苄氨基嘌呤1.5 mg/L、2,4-二氯苯氧乙酸2.0 mg/L的MS培养基上,愈伤组织诱导率达90.00%;愈伤组织在含6-苄氨基嘌呤1.8 mg/L、萘乙酸0.6 mg/L、蔗糖30 g/L、水解酪蛋白0.4 g/L、琼脂5 g/L、pH 7.3的改良WPM培养基上暗培养25天,增殖倍数达3.53,褐化率为11.78%;基于天然产物丹皮酚含量和愈伤组织生长曲线,培养25天时丹皮酚含量达到最高,为最佳收获期。     

HPLC法对舒新片中丹皮酚的含量测定

目的:建立舒新片中丹皮酚的含量测定方法.方法:用高效液相色谱法对舒新片中丹皮酚进行定量分析,色谱柱为Kromsal C18柱(250 mm× 4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(60∶40);流速:1.0mL/min;检测波长274nm.结果:丹皮酚在0.021～0.105mg/ml范围内线性关系良好,r=0.9997;平均加样回收率为99.07％,RSD为0.36％.结论:该方法简单、准确、专属性强、重复性好,可有效控制舒新片中丹皮酚的含量.     

HPLC法测定不同产地黑丹皮中丹皮酚的含量

为建立黑丹皮药材中丹皮酚含量测定方法。采用菲罗门LunaC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(45∶55)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长274 nm。经测定丹皮酚含量在0.0432～0.324 ug范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);平均回收率为104.07%,RSD=2.22%。该方法简便、准确、重现性好,适用于黑丹皮的质量控制。     

高效液相色谱法测定经舒胶囊中丹皮酚的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定经舒胶囊中丹皮酚含量的方法。方法:采用Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm 5μm);以甲醇-水(45:55)为流动相;柱温:40℃;流速:1.0ml.min-1;检测波长:274nm。结果:在建立的色谱条件下,丹皮酚进样量在0.08487~0.50922μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=6)为98.75%(RSD=1.74%)。结论:方法简便可靠,分离度好,可用于经舒胶囊的质量控制。     

牡丹种壳中丹皮酚和芍药苷的微波提取及含量测定

以牡丹种壳为原料,采用微波辅助提取方法,以芍药苷和丹皮酚得率为指标,利用单因素实验对于影响牡丹种壳中芍药苷和丹皮酚得率的因素进行优化。得到的最佳提取工艺参数为:乙醇提取分数70%,液料比10∶1、微波功率230 W、微波时间10 min,浸泡时间1 h,提取次数1次,牡丹种壳芍药苷和丹皮酚的得率分别为2.88和0.52 mg·g-1。同时,对于选取的微波辅助提取方法的稳定性,回收率和重现性进行验证,结果显示微波辅助提取方法是一个稳定的、可靠的提取方法。     

二苯胺棉酚中棉酚的含量测定

用紫外分光光度法测定二苯胺棉酚中棉酚的含量。方法回收率平均达 93.6 %以上 ,变异系数 ( CV )为1.2 %。该方法准确 ,重现性好 ,可作为二苯胺棉酚质量监控方法。     

棉籽中游离棉酚的含量测定

用紫外分光光度法测定棉籽中游离棉酚的含量。脱除棉酚的棉籽乙醚提取物经石油醚和 75 %乙醇分离和纯化后 ,用 0 .5 %对氨基苯磺酸显色来检测棉籽中游离棉酚的含量 ,结果表明 ,该方法具有简便、重现性好、回收率高达 97%以上等优点 ,可作为棉籽中游离棉酚质量控制方法。     

HPLC测定决明不同组织中大黄酚和橙黄决明素含量

为了测定决明不同组织中大黄酚和橙黄决明素的含量。分别收集了决明种子、根、茎、花、叶、果荚、子叶、胚轴、愈伤与不定根等组织,利用回流提取法提取大黄酚与橙黄决明素,高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。采用依利特反相色谱柱,以大黄酚和橙黄决明素为指标,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长为284 nm,柱温30℃。结果表明:大黄素型蒽醌类化合物在决明中的分布具有明显的组织特异性,其中,决明种子、胚轴、不定根、子叶与愈伤组织中含有大黄酚与橙黄决明素,决明根中仅含有大黄酚,其余组织不含有大黄酚与橙黄决明素,其余总蒽醌含量依次为子叶不定根愈伤组织胚轴根花。决明种子成熟过程中,大黄酚的含量呈现"波浪式上升"的趋势,峰值出现在11月下旬;而橙黄决明素的含量呈现"先上升后下降"的趋势,峰值出现在11月中旬。由于大黄酚与橙黄决明素的含量在决明不同成熟时期分别出现峰值,建议采收11月下旬的决明种子以获得大黄酚,采收11月中上旬的决明种子以获得较多的橙黄决明素。     

乌腺金丝桃愈伤组织中总黄酮及金丝桃素含量测定

以乌腺金丝桃新鲜叶片为材料,建立稳定的乌腺金丝桃愈伤组织的培养体系,进一步对愈伤组织总黄酮与金丝桃素的含量进行测定。以MS为基础培养基,考察不同激素组合对愈伤组织诱导的影响。结果表明,乌腺金丝桃诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D 4.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L;采用超声波法提取乌腺金丝桃愈伤组织中的总黄酮和金丝桃素,分别采用紫外分光光度法和HPLC法测定乌腺金丝桃愈伤组织中总黄酮及金丝桃素的含量,结果表明,干燥乌腺金丝桃愈伤组织中总黄酮含量为27.99 mg/g,金丝桃素的含量为0.515 mg/g。     

Cu和丹皮酚磺酸钠处理对凤丹根系生长、丹皮酚含量及H+-ATPase活性的影响

采用水培法,研究了Cu单一处理及Cu与EGTA和丹皮酚磺酸钠(SPS)复合处理对凤丹(Paeonia suffruticosa ‘Feng Dan’)幼苗根长、根系中Cu和丹皮酚含量的影响,并研究了Cu和SPS单一及复合处理对幼苗根系离体质膜和液泡膜微囊H+-ATPase活性的影响.结果显示:经5μmol·L-1Cu处理后凤丹幼苗根长和丹皮酚含量均略高于对照但总体上差异不显著;经10、20和30 μmol·L-1 Cu处理后,幼苗根长和丹皮酚含量总体上均低于对照,且随Cu浓度增加和处理时间延长,降幅增大.与10 μmol·L-1Cu单一处理相比,10 μmol·L-1Cu- 10μmol·L-1EGTA和10 μmo1.L-1Cu-10 μmol·L-1 SPS复合处理均可以使根系中Cu含量显著降低、丹皮酚含量显著提高;其中,10μmol·L-1Cu-10 μmol·L-1EGTA处理组幼苗根系中Cu含量的降低幅度最大,而10 μmol·L-1 Cu-10 μmol·L-1SPS处理组幼苗根系中丹皮酚含量的增加幅度最大且显著高于对照.与对照相比,经5、10和20μmol · L-1 Cu单一处理后丹凤根系离体质膜和液泡膜微囊H+-ATPase活性均降低,且随Cu浓度提高降低幅度增大;而经0.1、0.2、0.5和1.0μmol·L-1SPS单一处理总体上可使膜微囊H+-ATPase活性逐渐增加;与10 μmol·L-1Cu单一处理相比,10 μmol·L-1Cu与0.1、0.2和0.5 μmol·L-1SPS复合处理均可使膜微囊H+- ATPase活性提高,且H+-ATPase活性均呈现随SPS浓度提高逐渐增加的趋势.研究结果揭示:较高浓度Cu胁迫对凤丹幼苗根系生长及丹皮酚合成以及质膜和液泡膜微囊H+-ATPase活性均有明显抑制作用,但添加外源丹皮酚磺酸钠对Cu胁迫伤害具有一定的缓解效应.     

朱砂根愈伤组织诱导及其岩白菜素含量的测定

取朱砂根(Ardisia crenota Sims．)幼苗不同部位作外植体,研究不同激素组合对愈伤组织诱导的影响,利用薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)检测愈伤组织中岩白菜素含量。实验结果表明朱砂根幼苗的不同部位(胚根、下胚轴、茎及叶)均能诱导出愈伤组织,最高诱导率都在45％以上,以MS基本培养基添加2,4—D0．5mg L^-1和KT0．01mg L^-1时愈伤组织的诱导和生长最好。这些愈伤组织均有合成岩白菜素的能力,其中以胚根诱导的愈伤组织中岩白菜素含量最高,为干重的0．076％,相当于原植物根中含量的1／9。高效液相色谱定量测定法精密度高,专一性好,能准确检测朱砂根愈伤组织中岩白菜素的含量。     

快速测定厚朴中厚朴酚及其含量的方法

目的:通过建立系统的HPLC快速检测方法,分析厚朴中主要药用成分厚朴酚与和厚朴酚的含量,确定厚朴的药用价值及开发利用价值.方法:用HPLC法对张家界、隆回及恩施地区的厚朴植株的不同部位的药材中厚朴酚与和厚朴酚的含量进行了含量的分析.结果:结果快速、准确、重现性好、HPLC分析图谱理想.结论:本文所运用的HPLC分析条件能快速准确的鉴定厚朴酚及和厚朴酚的含量,确定厚朴药材的品质,并对混乱的药材市场有一定的监控作用.     

HPLC测定炎消迪娜糖浆中大黄酚的含量

本文用HPLC法测定炎消迪娜儿糖浆中大黄酚的含量。色谱条件：采用Luna 5u C18柱,流动相为甲醇-水（含0．1％醋酸）（98：2,v／v）,检测波长254nm。：大黄酚在0．008～0．088μg（r=0．9997）范围内成线性关系。平均回收率（n=9）为98．79％,RSD为2．24。实验结果表明本法简便,可靠,可用于该制剂的质量控制。     

喜树愈伤组织的诱导及诱导子对愈伤组织中喜树碱含量的影响

通过组织培养的方法分别对喜树营养器官进行愈伤组织的诱导和继代,筛选红色、黄色和褐色3个不同的细胞系;运用HPLC法测定各愈伤组织中喜树碱的含量,并在培养基中外加诱导子,分析其对愈伤组织中喜树碱含量的影响。结果表明,经幼叶所诱导的愈伤组织中喜树碱含量相对高于其它,红色和黄色的细胞系在不同的外植体中其喜树碱含量均高于褐色的细胞系。但从整体看来,愈伤组织中喜树碱的含量远远低于原植物中的含量。外加诱导子对愈伤组织中喜树碱的含量有影响,浓度为0.1 mg·L^-1,1 mg·L^-1的水杨酸和茉莉酸甲酯处理的愈伤组织中喜树碱含量提高,0.1 mg·L^-1的水杨酸对喜树碱的积累有明显的促进作用,茉莉酸甲酯的影响不大;浓度为3 mg·L^-1,5 mg·L^-1的水杨酸处理的愈伤组织中,喜树碱含量降低;3 mg·L^-1的茉莉酸甲酯处理的愈伤组织中,喜树碱含量降低,5 mg·L^-1处理的愈伤组织中未检测到喜树碱。     

印楝愈伤组织形成及其印楝素含量测定

取印楝（AzadirachtaindicaA．Juss）不同器官作外植体,研究培养基和继代次数对愈伤组织生长及其印楝素（Azadirachtin）生物合成的影响．印楝的不同器官（根、叶、茎及皮）均能诱导出愈伤组织,这些愈伤组织均有合成印楝素的能力．其中以叶诱导的愈伤组织生长速率及印楝素含量为最高．含有较低按盐的B5培养基有利于细胞生长,含有较高铵盐的MS培养基有利于印楝素积累,不含铰盐的White培养基对两者均不利．愈伤组织继代2—3代,有利于愈伤组织生长和印楝素合成。     

印楝愈伤组织开矿及其印楝素含量测定

取印楝不同器官作外植体,研究培养基和继代次数对愈伤组织生长及其印楝素生物合成的影响。印楝的不同器官（根、叶、茎及皮）均能诱导出愈伤组织,这些愈伤组织均有合成印楝素的能力。其中以叶诱导的愈伤组织生长速率及印楝素含量为最高。含有较低铵盐的Ｂ５培养基有利于细胞生长,含有较高铵盐的ＭＳ培养基有利于印楝素积累,不含铵盐的Ｗｈｉｔｅ培养基对两者均不利。愈伤组织继代２－３代,有利于愈伤组织生长和印楝素合成。     

西兰花种子及其愈伤组织中萝卜硫素含量比较

采用高效液相色谱法对西兰花种子及其不同器官诱导的愈伤组织中萝卜硫素的含量进行比较。结果表明供试的9个品种的种子中萝卜硫素含量差异显著,"玉皇"含量最高,达942.758μg/g;"中青9号"含量最低,为172.808μg/g。不同器官诱导的愈伤组织中萝卜硫素平均含量子叶>胚轴>胚根,种子中的平均含量分别为各器官获得愈伤组织平均含量的1.45、2.37和2.92倍。     

厚朴类中药厚朴酚及和厚朴酚含量测定

采用HPLC测定法,对几种中药厚朴及其不同地方代品中和厚朴酚、厚朴酚的含量测定分析。数据结果表明正品厚朴与地方代用品之间的和厚朴酚、厚朴酚的含量差别很大,正品厚朴也因产地不同含量存在差别。     

丹皮酚抗肿瘤作用及其机制研究

丹皮酚主要通过杀伤肿瘤细胞、诱导凋亡,影响肿瘤血管生成,促进IL-2及TNF-α生成,下调COX-2表达发挥抗肿瘤作用;但我们研究证实丹皮酚对体外神经胶质瘤U251细胞及肝癌HepG2细胞无明显抑制作用。丹皮酚作为抗肿瘤有效中药分子开发新药尚需深入的体内外实验研究与探讨。     

HPLC测定双金花茶中免疫活性分子山奈酚的含量

目的建立HPLC测定双金花茶中免疫活性分子山奈酚含量的方法。方法采用Kromasil C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇∶0.1%醋酸水溶液(70∶30);流速:1.0 ml/min;检测波长:370 nm;柱温:25℃。结果山奈酚在进样量0.04～0.40μg(r=0.9999)范围内呈良好线性关系,平均加样回收率为100.00%,RSD为0.07%(n=6)。结论 HPLC法简便易行,准确可靠,可用于双金花茶中免疫活性分子山奈酚含量测定。