淫羊藿总黄酮通过AMPK/SIRT1/NFκB信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸组织炎症反应

探讨淫羊藿总黄酮(Total flavonoids of Epimedium,TFE)对自然衰老大鼠睾丸组织中AMPK/SIRT1/NFκB信号通路的影响及其抗炎作用。将40只18月龄雄性SD大鼠随机分为TFE低、中、高剂量组和自然衰老组,每组10只。另取10只2月龄雄性SD大鼠作为青年对照组。TFE低、中、高剂量组分别以10、20、40 mg/kg剂量灌胃给药,青年对照组和自然衰老组大鼠均灌胃给予质量分数为1%羧甲基纤维素钠溶液,持续给药4个月。HE染色观察大鼠睾丸组织形态,Western blot法检测各组大鼠睾丸组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1、acetylNFκBp65、IL-1β、TNFα蛋白表达水平。结果显示,与自然衰老组相比,TFE低、中、高剂量组大鼠睾丸组织形态结构均有明显改善,TFE可促进大鼠睾丸组织内p-AMPK和SIRT1蛋白表达,显著降低acetyl-NFκBp65及其下游炎症因子IL-1β、TNFα蛋白表达水平。实验结果表明,TFE可减轻自然衰老大鼠睾丸组织炎症反应,其机制可能与调控AMPK/SIRT1/NFκB信号通路有关。     

蒙花苷消除衰老骨髓间充质干细胞的衰老表型发挥抗衰老作用

目的:探讨蒙花苷(Linarin,LR)是否可以消除衰老骨髓间充质干细胞(BMSC)的衰老表型发挥抗衰老作用。方法:取4周龄80 g-100 g的雄性SD大鼠大腿骨髓腔内的骨髓间充质干细胞,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养至三代,使用D-gal诱导骨髓间充质干细胞衰老,使用SA-β-gal染色、活性氧检测、蛋白免疫印迹验证骨髓间充质干细胞细胞衰老状态,通过蛋白免疫印迹检测衰老BMSC与正常BMSC中细胞保护性蛋白sirt1、sirt6及衰老相关蛋白p16、p21、p53的表达水平。之后,我们通过不同浓度LR处理衰老骨髓间充质干细胞。最后,通过蛋白印迹分析检测未处理组与LR处理组衰老相关蛋白表达情况。观察蒙花苷能否可以消除衰老的大鼠骨髓间充质干细胞衰老表型。结果:衰老的骨髓间充质干细胞细胞保护性蛋白sirt1、sirt6降低及衰老相关蛋白p16、p21、p53明显增高,衰老细胞中与DNA损伤相关的细胞核内蛋白γ-H2AX表达明显增加。而蒙花苷处理后,衰老细胞组衰老相关蛋白p16、p21、p53明显降低,γ-H2AX蛋白阳性细胞明显减少。结论:蒙花苷可以剂量依赖性的消除衰老的大鼠骨髓间充质干细胞的衰老表型发挥抗衰老作用。     

淫羊藿苷对博来霉素诱导的GC-1细胞DNA损伤的保护作用

该文旨在探究淫羊藿苷(icariin,ICA)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠GC-1精原细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。将GC-1细胞分为正常对照组、BLM处理组(10 μg/mL)、BLM+不同浓度(0.5、1、2和4 μmol/L) ICA组。用不同浓度ICA预保护GC-1细胞12 h后加入BLM继续处理6 h,收集细胞,Western blot法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、DNA损伤修复相关通路蛋白(p-ATM、p-Chk1、p-P53和P21)、碱基切除修复(base excision repair,BER)相关通路蛋白(OGG1、APE1和XRCC1)的表达水平;免疫荧光技术检测γ-H2AX、8-OHdG表达与定位。结果表明,与正常对照组相比,BLM处理组中γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1的蛋白表达水平均显著上升,而ICA可浓度依赖性地下调BLM诱导的γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1蛋白表达水平。免疫荧光结果显示,与正常对照组相...     

淫羊藿总黄酮通过TGF-β1/Smad3信号通路改善自然衰老大鼠肾脏组织纤维化

为探讨淫羊藿总黄酮(TFE)对自然衰老大鼠肾脏纤维化的影响及其可能的作用机制,将18月龄SD大鼠随机分为自然衰老组、淫羊藿总黄酮低(10 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,另取2月龄SD大鼠作为青年对照组,给药4个月。通过HE染色和Masson染色观察肾脏组织形态及胶原纤维含量,生化酶法检测肾脏组织SOD活力和MDA含量,免疫组化法检测αSMA的蛋白表达水平,实时定量PCR和Western blot技术检测TGF-β1和Smad3的mRNA及蛋白表达水平。结果显示,TFE(低、高剂量)可改善衰老SD大鼠肾脏组织形态,减少胶原纤维,提升肾脏组织SOD活力(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),并降低肾脏组织中αSMA蛋白表达(P<0.05),同时显著下调TGF-β1及Smad3的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。淫羊藿总黄酮可改善自然衰老大鼠肾脏纤维化,其机制可能与其抑制TGFβ1/Smad3信号通路传导有关。     

D-半乳糖诱导衰老小鼠睾丸结构与功能变化及其氧化应激相关机制

目的建立D-半乳糖(D-gal)致小鼠衰老模型,探讨睾丸结构与功能变化及相关机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为衰老组和对照组。衰老组小鼠皮下注射D-gal;对照组等时等量注射生理盐水。模型复制完成第2d,采集小鼠内眦静脉血测定血清睾酮水平;取小鼠睾丸测定睾丸指数;石蜡切片HE染色观察睾丸组织形态学;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测生精细胞衰老;TUNEL法检测生精细胞凋亡;制备睾丸组织匀浆上清,ELISA检测TNF-α、IL-1β、和IL-6的水平;硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量;酶学法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性;ABTS法检测总抗氧化能力(TAC);Western blotting检测衰老相关蛋白p21与p53表达水平。结果衰老模型组小鼠血清睾酮水平显著下降,睾丸脏器指数无明显差异,生精小管结构紊乱,生精细胞病理损伤明显,SA-β-Gal染色阳性的生精细胞百分率上升,细胞凋亡指数上升,睾丸匀浆上清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著上升,SOD活性、TAC能力显著降低,MDA含量上升,睾丸组织中衰老相关蛋白:p21与p53表达水平显著提高。结论 D-gal建立的衰老动物模型可见睾丸形态结构与功能出现衰老的生物学表现,其机制可能与氧化应激损伤及p21/p53通路激活有关。     

不同年龄大鼠血清对骨髓间充质干细胞衰老影响的实验研究

制备成年(8～12周龄)和老年(64～72周龄)SD大鼠血清,实验随机分为两组:年轻血清组和老年血清组,分别采用成年和老年SD大鼠血清培养成年MSCs 36小时后,衰老相关β-半乳糖苷酶和活性氧染色观察细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB法和Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡及存活情况。免疫细胞化学和Western blot法检测衰老相关蛋白γ-H2A.X、p53表达,RT-PCR法观察p53、p21 mRNA表达。结果发现,与年轻血清组相比,老年血清组MSCs衰老细胞数明显增加((96.2±24.1)/500细胞vS(30.8±8.2)/500细胞,P<0.01)、增殖能力减弱,凋亡率升高,γ-H2A.X、p53蛋白表达水平升高,p53、p21 mRNA表达升高。这些结果说明、老年SD大鼠血清可促进MSCs发生衰老变化,并抑制MSCs增殖及存活能力,这一作用可能与DNA损伤反应和p53/p21信号通路有关。     

ATM、ATR和DNA损伤介导的细胞周期阻滞

ATM和ATR属于PIKK家族,是DNA损伤检查点的主要成员。它们被不同类型的DNA损伤所激活,通过磷酸化相应的下游蛋白Chk1和Chk2等,调节细胞周期各个检查点,引起细胞周期阻滞,使DNA损伤得以修复。ATM和ATR在维持基因组的稳定性中起到至关重要的作用。本文着重综述有关ATM和ATR在DNA损伤介导的细胞周期阻滞中发挥的作用以及相互关系的最新研究进展。     

大田软海绵酸对FL细胞DNA的损伤及凋亡相关蛋白表达的影响

本文旨在探讨大田软海绵酸对人羊膜细胞DNA的损伤及凋亡相关蛋白表达的影响。实验用0、20、40、608、0、100 nmol/L OA诱导FL细胞4h后,检测DNA损伤程度的彗星实验表明,OA对FL细胞DNA的损伤随染毒浓度的升高而增加。蛋白免疫印迹法显示凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53的表达与染毒浓度呈负相关;用100 nmol/L OA分别诱导2h、4h、8h后发现,三种蛋白的表达与染毒时间也呈负相关。由此可知在OA诱导的FL细胞凋亡中,损伤DNA,降低Bcl-2蛋白的表达可能参与了凋亡的部分作用,而Bax和p53蛋白则可能与OA诱导的细胞增殖有关。     

MLL3基因对宫颈癌细胞放射敏感性和DNA损伤修复能力的影响

摘要 目的：探究髓系/淋巴系或混合谱系白血病3基因（myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia 3,MLL3）对宫颈癌细胞生长、转移、放射敏感性的影响。方法：选择60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测检测MLL3 mRNA水平。体外培养SiHa细胞,将其分为以下5组：Control组（不转染）、NC-sh组（转染阴性对照shRNA慢病毒）、MLL3-sh组（转染MLL3 shRNA慢病毒）、NC-OE组（转染阴性对照过表达慢病毒）和MLL3-OE组（转染MLL3过表达慢病毒）。进一步采用2300EX直线加速器9 MeV ?茁射线照射细胞建立放射抵抗SiHa细胞（SiHaR）,然后将其分为：NC-sh组、MLL3-sh组、8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组。NC-sh组和MLL3-sh组细胞不照射,8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组细胞用9 MeV β射线照射8 Gy。采用MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测MLL3、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、ATM-Rad3相关基因（ATR）、乳腺癌易感基因（BRCA1）和RAD50双链断裂修复蛋白（RAD50）的mRNA水平;Western blot检测MLL3、Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、cleaved caspase 3、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9和γ-H2AX的表达;免疫荧光染色检测γ-H2AX的表达。结果：与癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中的MLL3 mRNA水平显著降低（P<0.001）。与NC-sh组比较,MLL3-sh组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高（P<0.05）。与NC-OE组比较,MLL3-OE组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低（P<0.05）。与SiHa细胞相比,SiHaR细胞中的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量均升高（P<0.001）。与8 Gy+NC-sh组比较,8 Gy+MLL3-sh组SiHaR细胞的细胞活力降低,γ-H2AX的蛋白相对表达量和γ-H2AX foci数目升高,ATM、ATR、BRCA1和RAD50的mRNA水平降低（P<0.05）。结论：宫颈癌细胞MLL3的表达下调促进了其生长和转移,但降低DNA损伤修复能力,提高宫颈癌细胞的放射敏感性。     

老龄雄性大鼠睾丸组织NO含量与SOD活性的相关性研究

目的：研究衰老进程中睾丸组织一氧化氮（NO）与超氧化物歧化酶（SOD）之间的相互关系,探讨有氧运动延缓衰老的机制。方法：分别测定青龄对照组、老龄对照组、老龄运动组大鼠睾丸组织NO含量和SOD活性。观察游泳运动对老龄大鼠睾丸组织NO含量和SOD活性的影响。结果：老龄对照组大鼠睾丸组织NO含量、SOD活性明显降低,有氧运动可使上述变化逆转。结论：睾丸组织NO含量与SOD活性呈显著正相关。有氧运动是延缓衰老的有效手段。     

EZH2在衰老细胞中表达下调引起Netrin-1表达增加进而促进交感神经轴突生长

交感神经在一些疾病动物模型和老年小鼠模型组织中呈现发芽生长和密度增加的趋势。这提示,交感神经与衰老密切相关。本研究采用免疫组织化学检测老年小鼠肝、肺、脾组织和人结肠腺瘤组织衰老模型中交感神经标记蛋白酪氨酸羟化酶（TH）的表达情况。结果证实,衰老组织中的交感神经密度显著增加。然而,目前对衰老组织的这种生物学改变机制尚不明确。本研究以人成纤维细胞系2BS为实验材料,经转录组测序发现,分泌性轴突导向因子导蛋白-1在衰老细胞中上调表达。ELISA和实时定量PCR结果显示,在博来霉素、离子射线、癌蛋白RasV12过表达所诱导的早衰及复制性衰老的2BS细胞中,导蛋白-1的蛋白质和mRNA表达量均比年轻对照组高。DNA损伤反应（DNA damage response,DDR）是调控衰老细胞分泌蛋白质表达的重要途径。为明确导蛋白-1在衰老细胞的上调表达是否与DDR相关,使用小分子化合物抑制DDR的重要效应分子ATM（ataxia telangiectasia mutated）和CHK2（checkpoint kinase 2）在博来霉素诱导的衰老2BS细胞中的活性。ELISA和实时定量PCR结果显示,与博来霉素诱导衰老组相比,阻断衰老细胞中的DDR活性未引起导蛋白-1表达水平的改变。提示导蛋白-1在衰老细胞中的表达不依赖于DDR途径。Western印迹检测发现组蛋白甲基转移酶EZH2在衰老细胞中的蛋白质表达明显少于年轻细胞;实时定量PCR结果表明使用小分子化合物抑制EZH2在年轻细胞中的活性引起导蛋白-1表达增加;CHIP实验检测发现,EZH2对年轻细胞的导蛋白-1启动子区DNA片段富集显著而在衰老细胞未见富集。以上结果提示EZH2在衰老细胞中的下调表达是导蛋白-1表达增加的重要原因。大鼠DRG与衰老细胞共培养结果证实,衰老细胞对交感神经具有导向作用,并且该现象依赖于导蛋白-1的分泌。根据以上结果得出结论,导蛋白-1在衰老细胞中的上调表达不依赖于DDR途径而与EZH2的下调表达相关,衰老细胞通过分泌导蛋白-1促进交感神经轴突定向生长。本研究为深入探讨衰老相关疾病的发生机制以及防治提供了新线索,具有一定的科学意义和潜在的转化应用价值。     

电离辐射生物标志物γ-H2AX的检测技术研究进展

电离辐射可导致DNA双链断裂,从而使组蛋白H2AX迅速在双链断裂处磷酸化为γ-H2AX。检测细胞中γ-H2AX聚集处形成的焦点数目可用于评价DNA双链断裂情况,且与辐射剂量相关。因此,γ-H2AX可作为电离辐射的生物标志物,用来评价电离辐射的致突变能力,亦可作为电离辐射生物剂量计,用于估算个体受照剂量。γ-H2AX检测技术在辐射生物学研究、辐射分子流行病学调查,以及辐射事故应急响应与医学处置等方面具有重要应用价值。本文将重点阐述近十年来国内外基于电离辐射生物标志物γ-H2AX的检测方法研究进展和应用前景。     

鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响

目的：观察鸡胚营养组合物对衰老大鼠基因损伤修复的影响，探讨其延缓衰老的可能机制。方法：采用D-半乳糖建立衰老SD大鼠动物模型，每日1次颈背部皮下注射 D-半乳糖500mg/(kg·d)，连续造模90天，对照组颈背部皮下注射等剂量的生理盐水注射液。从第1天起，鸡胚营养组合物组、鸡胚组、营养组合物组、蛋清组，分别以相应剂量对大鼠进行灌胃，每天1次，直至第90天，拉颈处死大鼠。取各组大鼠肝脏、骨髓和脑组织，采用RT-PCR法检测各组织修复基因的表达情况。结果：与衰老模型组相比，鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏和骨髓组织中错配修复基因MSH2表达量升高（P<0.05）；鸡胚营养组合物组衰老大鼠肝脏组织中同源重组修复基因Xrcc1、Xrcc2、骨髓中同源重组修复基因Rad51以及脑组织中同源重组修复基因Rad51、Xrcc1表达量升高（P<0.05）。结论：鸡胚营养组合物能够修复衰老大鼠肝脏、骨髓和脑组织基因的损伤，此可能为其延缓衰老的作用机制之一。     

异常黑胆质肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子表达研究

目的:探讨异常黑胆质证肝癌移植模型大鼠Rho/Rock信号通路相关分子的蛋白表达,诠释异常黑胆质肿瘤高发的分子生物学基础。方法:采用足底电击、干寒饲料、铁管制动等多种因素刺激21 d建立异常黑胆质证大鼠模型,在此基础上通过肝内注射walker-256瘤细胞建立异常黑胆质大鼠肝癌移植模型,观察其肝脏组织形态结构变化,并采用Western Blot法检测大鼠肝脏相关蛋白的表达变化。结果:异黑肿瘤组肝脏组织形成明显癌巢,与对照组相比癌旁组织肝索结构紊乱,癌细胞向肝小叶深部迁移;异常黑胆质成熟剂给药组癌细胞崩解、凋亡,胶原纤维增生,癌旁肝索重构。与对照组相比,肿瘤组Cdc42和Rock2蛋白表达均明显增加(P0.05),异黑肿瘤组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达明显增加(P0.05);与异黑肿瘤组相比,异常黑胆质成熟剂(ASM)给药组Cdc42、Rac1、Rock1、Rock2和Myl1蛋白表达呈剂量依赖性降低(P0.05),且与对照组无显著差异。结论:异常黑胆质证肝癌移植模型可能与Rho/Rock信号通路分子通过调控肌动蛋白收缩引起的肿瘤细胞侵袭、转移生物学行为等作用有关,异常黑胆质成熟剂可能通过下调Rho/Rock信号通路分子使损伤的组织形态逆转。     

Hsp70 对低氧大鼠海马DG 区神经细胞p53、p-p38 表达的研究

目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)高表达对低氧大鼠海马DG区神经细胞p53、p-p38表达的影响。方法:将大鼠海马DG区神经细胞在41℃温浴1h诱导HSP70高表达,然后低氧培养,Western-blot检测细胞HSP70、p53、p-p38的表达。结果:温浴可以诱导HSP70高表达;HSP70高表达可抑制p53和p-p38表达。结论:HSP70保护低氧诱导的细胞凋亡可能与抑制p53和p-p38表达有关。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢bcl-2和bax表达的影响

目的:研究中药益坤宁(Yikunning,YKN)对围绝经期大鼠卵巢bcl-2和bax基因表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机制。方法:选用自然衰老的围绝经期雌性大鼠,随机分为3组(n=10):围绝经期对照组、利维爱(Livial)对照组和益坤宁组,另选10只青年雌性大鼠作为青年对照组。连续灌胃处理4周后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠卵巢中凋亡相关基因bcl-2和baxmRNA表达,采用蛋白印迹(Westernblot)检测大鼠卵巢中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:益坤宁组大鼠卵巢中Bcl-2、BaxmRNA及其蛋白表达高于围绝经期对照组,差异有统计学意义(P0.01);益坤宁组大鼠卵巢中Bcl-2/BaxmRNA比值和蛋白比值高于围绝经期对照组,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:中药益坤宁通过上调围绝经期大鼠卵巢中凋亡相关基因bcl-2和bax的表达,上调Bcl-2/BaxmRNA比值和蛋白比值,从而延缓卵巢衰老,这可能是其治疗围绝经期综合征的分子机制之一。     

七叶皂苷钠对细菌性脑膜炎大鼠RhoA/ROCK通路及血脑屏障通透性的影响CSCD

目的探讨七叶皂苷钠(SA)对细菌性脑膜炎(BM)大鼠肉瘤同源基因A(RhoA)/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(ROCK)通路及血脑屏障通透性的影响。方法将SD新生大鼠随机分为正常对照组、模型组、SA低剂量(1.75 mg/kg)组、SA中剂量(3.50 mg/kg)组、SA高剂量(7.00 mg/kg)组和阳性对照(青霉素,0.18 g/kg)组,每组20只。除正常对照组外,其余各组大鼠均经小脑延髓池注射B族溶血性链球菌建立BM模型,建模成功后经腹腔注射给予相应剂量药物,连续给药3 d,2次/d。末次给药12 h后,处死大鼠,采用酶联免疫吸附试剂盒(ELISA)检测脑脊液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;血细胞分析仪检测脑脊液中白细胞(WBC)数量;伊文思蓝(EB)染色法检测大鼠血脑屏障通透性;干湿比重法计算各组大鼠脑组织含水量;免疫组化法检测脑皮质组织RhoA、ROCK阳性表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测脑皮质组织血脑屏障相关分子闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-5(Claudin-5)、水通道蛋白4(AQP4)及RhoA/ROCK通路相关蛋白肌球蛋白轻链(MLC)、丝切蛋白1(Cofilin1)相对表达水平。结果与正常对照组相比,模型组大鼠神经行为评分及脑皮质组织中ZO-1蛋白、Claudin-5蛋白、AQP4蛋白表达降低(均P<0.05),脑脊液WBC数量、IL-6水平、TNF-α水平、脑含水量、脑组织EB含量、脑皮质组织RhoA与ROCK阳性表达、p-MLC/MLC、p-Cofilin1/Cofilin1蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型组相比,SA低、中、高剂量组与阳性对照组大鼠神经行为评分及脑皮质组织中ZO-1蛋白、Claudin-5蛋白、AQP4蛋白表达升高(均P<0.05),脑脊液WBC数量、IL-6水平、TNF-α水平、脑含水量、脑组织EB含量、脑皮质组织RhoA与ROCK阳性表达及p-MLC/MLC蛋白、p-Cofilin1/Cofilin1蛋白表达降低(均P<0.05);SA中、高剂量组上述指标变化优于SA低剂量组(P<0.05),阳性对照组上述指标变化弱于SA低剂量组(P<0.05);SA中剂量组与高剂量组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论SA可改善BM大鼠脑水肿及血脑屏障通透性,且其改善血脑屏障损伤的作用可能与抑制RhoA/ROCK通路激活有关。     

TAB182对电离辐射诱发细胞周期G2/M阻滞的调节作用

TAB182是一个端锚聚合酶1（tankyrase 1）结合蛋白,它在体外能够被tankyrase 1发生二磷酸腺苷核糖基化(PAR)修饰,其生物学功能目前尚不明确.本研究发现,TAB182蛋白水平受电离辐射诱导表达,HeLa细胞经过4 Gy照射处理时,TAB182在2 h表达含量最高; 经过不同剂量照射处理,2 h后2 Gy、4 Gy照射剂量组HeLa细胞中TAB182的表达有明显增加. 通过shRNA沉默HeLa细胞中TAB182基因表达,导致其对4 Gy及以下剂量 辐射的敏感性增加,但对8 Gy大剂量照射的敏感性没有明显变化. 与对照组相比,4 Gy照射诱发TAB182基因沉默细胞的G2/M期阻滞时间显著延长.抑制TAB182表达导致细胞中DNA损伤反应蛋白DNA PKcs、ATM、Chk2的表达水平显著降低. 实验结果提示,TAB182蛋白参与放射DNA损伤信号反应和调控细胞周期G₂/M进程.     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及caspase-3表达的影响

目的:研究中药益坤宁(yikunning,YKN)对围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率及凋亡相关基因caspase-3基因表达的影响,探讨益坤宁治疗围绝经期综合征的作用机理。方法:选用30只自然衰老的围绝经期雌性大鼠,随机分为中药益坤宁实验组、围绝经期对照组和利维爱(livial)对照组,另选10只青年雌性大鼠作为青年对照组。连续灌胃处理4周后,采用原位脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测大鼠卵巢细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)检测大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:益坤宁组大鼠卵巢细胞凋亡率显著低于围绝经期对照组(P0.01);益坤宁组大鼠卵巢中caspase-3 mRNA和蛋白表达低于围绝经期对照组,高于青年对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论:中药益坤宁通过降低围绝经期大鼠卵巢细胞凋亡率,下调卵巢中凋亡相关基因caspase-3的表达,从而延缓卵巢衰老,这可能是其治疗围绝经期综合征的分子机制之一。     

降浊四妙散通过降低血尿酸水平及抑制NLRP3炎症小体对大鼠高尿酸血症及其肾损伤的改善作用研究

摘要 目的：探究降浊四妙散通过降低血尿酸水平及抑制NLRP3炎症小体对大鼠高尿酸血症及其肾损伤的改善作用。方法：将28只SD大鼠随机分为对照组、氧酸钾（OA）模型组、OA+SMS组、OA+别嘌醇组,其中,SMS的剂量基于实验动物物质管理标准（每公斤体重成人剂量的10倍）;别嘌醇溶解在OA+别嘌醇组的饮用水中（浓度,150 mg/L）;对照组和OA组给予等量的蒸馏水（胃内容量控制在2 mL/d）,持续7周。探讨SMS对肾线粒体活性氧(ROS)和氧化应激(OS)产物、NLRP3-ASC-caspase-1轴的蛋白表达。结果：（1）对照组、OA模型和治疗组的数据存在显著差异（P<0.05）。在第7周结束时,模型组总尿酸排泄量显著高于对照组（P<0.05）,SZF组和别嘌醇组显著高于OA组（P<0.05）。（2）与对照组相比,OA组的BUN和Scr水平显著升高（P<0.05）,而接受SMS和别嘌醇治疗大鼠的BUN和Scr水平下降（P<0.05）。（3）肾组织结构中,对于OA+SZF和OA+别嘌呤醇组,肾近端肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性和炎性细胞浸润减少。（4）OA诱导的高尿酸血症大鼠肾组织中氧化应激指标均升高（P＜0.05）;即超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶之间存在显著的不平衡,而SMS和别嘌醇干预可显著回复以上氧化应激反应指标的动态平衡（P＜0.05）。（5）OA组大鼠肾组织中TXNIP mRNA和蛋白表达显著高于其他组（P<0.05）,而SMS和别嘌醇有效抑制TXNIP mRNA 和蛋白表达（P<0.05）;高尿酸血症大鼠NLRP3-ASC-caspase-1 轴中的mRNA和蛋白质表达升高（P<0.05）。SMS干预后组NLRP3-ASC-caspase-1轴的激活显著被抑制（P<0.05）。结论：SMS通过降低高尿酸血症实验大鼠肾脏中血尿酸水平,进而减轻肾损害,同时其可抑制线粒体ROS触发的NLRP3炎性体激活来减轻肾小管损伤和炎症浸润。