环六亚甲基双乙酰胺对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化及PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化

用HMBA作为诱导分化剂.研究了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化效应,并采用免疫荧光技术观察了PKA-RⅡ与PKC-α亚型在细胞内分布的变化.细胞经5mmol/L HMBA处理后,细胞形态产生明显变化.细长突起明显增加,生长速度减慢,倍增时间延长.24小时,48小时,72小时的生长抑制率分别为20%.40.6%.54.8%.细胞在软琼脂上生长不成集落.细胞周期时相的分布发生变化、G_0+G_1期比对照组增加18.4%.而s期细胞比对照组减少14.8%.细胞内cAMP、DG水平也发生了显著变化.HMBA处理24小时后.细胞内cAMP水平上升62%.DG水平下降64.7.处理48小时后.cAMP水平上升76.2%.而DG水平下降的69.8%.以上结果充分表明了HMBA对人胃癌MGc80-3细胞的诱导分化作用.实验中还发现细胞经HMBA处理后.PKC-α分布于胞质,而PKA-RⅡ向胞核移位.提示HMBA对细胞的诱导分化作用与信号传递通路密切相关.     

环六亚甲基双乙酰胺对胃癌不同细胞周期两条信号系…

环六亚甲基双乙酰胺（ＨＭＢＡ）对ＭＧｃ８０－３不同时相细胞内ｃＡＭＰ－ＰＫＡ与ＤＡＧ－ＰＫＣ两大系统不仅具有正负调控作用,而且其作用具有周期特异性。其中Ｇ１期是最敏感的调控时相,与对照组相比,ｃＡＭＰ水平上升１０２．３％,ＰＫＡ活性升高３４８％,ＤＡＧ含量下降５１．４％,ＰＫＣ活性降低３２．３％;次敏感时相为Ｇ２期;Ｍ期基本没受影响,Ｓ期变化规律不同于其他时相。     

两种第二信使系统在人胃癌MGc80-3细胞增殖分化调节中的相互关系

两种第二信使系统的正负调控作用的假说与细胞增殖失控的癌变机理之间关系,日益引起人们的注意。为此本工作利用HMBA 诱导分化剂和信使通路的阻断剂研究了两种第二信使系统(DG-PKC,cAMP-PKA)在人胃癌MGc80-3细胞生长分化调控过程中的相互关系。人胃癌MGc 80-3细胞在诱导分化剂处理24 h 后,其DG 水平与PKC 活性分别下降了64.7%和28.7%,而cAMP 及其结合蛋白的含量分别上升了62%和32.6%(48 h 后结果更为显著)。PKA-RⅡ表达增强,并从胞质移向核内分布。当用PKC 抑制剂H_7取代HMBA,阻断PKC 通路,24 h 后,DG 水平及PKC 活性均下降,而cAMP 含量上升了1.04倍。反之在HMBA 诱导分化的同时加入PKA 抑制剂使其cAMP 通路受到阻断后,cAMP 及其结合蛋白含量下降。而DG 含量与PKC 活性均上升到与对照组水平相似。PKA-RⅡ又仅仅在胞质中出现。以上实验充分显示了cAMP-PKA 与DG-PKC 两种信使系统在细胞增殖分化中的正负调控作用占有重要地位。     

环六亚甲基双乙酰胺对胃癌不同细胞周期两条信号系统的调节

环六亚甲基双乙酰胺(HMBA)对MGc80-3不同时相细胞内cAMP-PKA与DAG-PKC两大系统不仅具有正负调控作用,而且其作用具有周期特异性. 其中G1期是最敏感的调控时相,与对照组相比,cAMP水平上升102.3%,PKA活性升高348%,DAG含量下降51.4%,PKC活性降低32.3%;次敏感时相为G2期;M期基本没受影响;S期变化规律不同于其他时相.     

环六亚甲基双乙酰胺体外诱导胚胎性癌B7—2细胞分化对MS_3基因表达的影响

MS_3 cDNA是多潜能胚胎性癌细胞专一的顺序,HMBA可诱导B 7—2细胞分化为原始内胚层样细胞。用定量细胞质RNA点印迹杂交法分析了MS_3基因在小鼠胚胎性癌B 7—2细胞经HMBA诱导前和诱导后的表达水平。小鼠成纤维细胞NIH3T3被用作阴性对照,MS_3基因的表达水平在B 7—2细胞经HMBA诱导5天后下降了86％。鉴于HMBA对B 7—2细胞的诱导效率约为90％,这一实验结果表明在HMBA诱导分化中,MS_3基因的表达被抑制。     

两套第二信使系统(环腺苷一磷酸与二酰基甘油)在人胃癌MGC80-3细胞增殖分化调控中的相互关系

细胞增殖分化及癌变调控机理是至今尚未解决的重大问题。近年来有人提出cAMP与双信使[DG和三磷酸肌醇(IP3)]系统对细胞增殖分化的正负调控作用的假说与细胞增殖失控的癌变机理之间的关系日益引起人们的重视。尽管cAMP与双信使系统对细胞增殖分化     

在人胃癌MGC80-3细胞中PKA-RⅡ和PKC-α两套信使激酶系统亚类对c-myc和c-H-ras表达的共调作用关系

在前一实验基础上,我们进一步研究了人胃癌细胞系(MGC 80-3)的PKA-RⅡ和PKC-α对癌基因的共调作用。MGC 80-3细胞在HMBA诱导分化过程中c-myc和c-H-ras的表达抑制时,PKA-RⅡ的表达从胞质转向核内,而PKC-α则从核内转向胞质表达。当HMBA诱导细胞分化的同时,加入PKA抑制剂阻断cAMP-PKA通路,此时PKA-RⅡ仍在胞质表达,而PKC-α的表达又移位入核,c-myc和c-H—ras则重新表达。这显示了癌基因表达变化的调节和激酶亚类核移位的信息传递密切相关,它表现出两套信号系统对癌基因表达的共调作用。