土拨鼠染色体组型分析

在肿瘤细胞形成及发展的过程中,普遍存 在染色体畸变。东方土拨鼠(Marmota monax) 易感染与肝硬化和肝癌有关的乙型肝炎病毒, 它是研究人类乙型肝炎病毒与原发性肝癌关系 的最合适的动物模型。因此,了解土拨鼠正常 的染色体结构,可为深入研究土拨鼠肝癌细胞 的染色体畸变及其肝炎病毒基因的表现提供基 础,进而为了解人类肝癌病因和发病机理提供 线索。     

中国西伯利亚幼獭肝内接种美国土拨鼠肝炎病毒的实验研究

研究肝炎和肝癌关系的实验动物中,唯有土拨鼠感染土拨鼠肝类病毒(WoodchuckHepatitis Virus,WHv)后,其病程、结局与人类感染乙型肝炎病毒(HBV)相似,WHV DNA可与宿主肝细胞DNA整合并产生肝癌。中国旱獭(Marmota marmota)在     

土拨鼠肝炎病毒感染模型在乙型肝炎研究中的应用

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是嗜肝DNA病毒的原型,HBV感染所致的乙型肝炎是严重危害我国人民身体健康的公共卫生问题。现有的抗乙肝药物包括核苷类似物和干扰素均难以达到临床治愈,研究新的抗乙肝药物、评价新的联合治疗策略均离不开合适的动物模型。土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus, WHV)于1978年美国费城动物园患肝癌的土拨鼠中首次被发现,因其基因组结构、复制周期与HBV高度近似,被归类为嗜肝DNA病毒。WHV感染土拨鼠后的自然史与HBV感染人高度近似,因此土拨鼠模型很早就被用于乙肝DNA疫苗、抗HBV药物的评价。近年来土拨鼠多种细胞因子及其受体、免疫细胞表面标志先后被克隆和鉴定,T细胞应答的检测方法包括淋巴细胞增殖实验、CD107a脱颗粒实验逐步被建立,大大促进了土拨鼠模型在HBV发病机制及免疫调节治疗中的应用。本文主要综述了WHV感染土拨鼠模型的免疫学特征,以及该模型在抗乙肝病毒药物评价和免疫调节治疗中的应用。     

荧光定量PCR检测土拨鼠肝炎病毒核酸方法的建立

目的建立土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）核酸的荧光定量PCR（Real-time PCR）检测方法,应用于土拨鼠肝炎病毒模型的研究。方法分别根据土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和表面抗原（WHsAg）的DNA序列设计13对扩增引物,从中筛选无非特异性扩增及引物二聚体且灵敏度高的引物,用于土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测。建立感染土拨鼠肝炎病毒的土拨鼠血清中WHV核酸的Real-timePCR检测方法。结果根据WHsAg基因的5＇端设计的一对引物WHVSF1与WHVSR1,检测灵敏度可达1×101拷贝/μL,病毒拷贝数与Real-time PCR Ct值的标准曲线的R2值为0.997,且电泳未见明显非特异性条带及引物二聚体。结论建立了土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测方法,该方法为进一步研究土拨鼠肝炎病毒模型奠定了基础。     

新生与成年土拨鼠肝组织中部分差异表达的基因比较分析

目的新生土拨鼠感染土拨鼠肝炎病毒后,大部分发展为慢性肝炎,而成年土拨鼠感染后则多发生急性自限性肝炎。本实验目的就是寻找其肝组织中可能导致这种预后差异的关键基因。方法采用全基因组表达谱芯片技术,对比新生与成年小鼠肝组织基因表达差异,选取目的基因,再通过多个物种序列比对,设计简并引物,在土拨鼠肝组织eDNA中扩增对应基因,测序,再次设计引物,进行实时荧光定量PCR。结果与新生土拨鼠相比,成年土拨鼠肝细胞中与钙离子重吸收相关基因DNMl（Dynamin1）、DNM3（Dynamin3）及Prkcc（proteinkinaseC,gamma）表达率明显升高,分别上升2．65±0．25倍、1．90±0．34倍、2．94±0．54倍。结论在钙离子重吸收通路中,在两组小鼠肝脏中表达差异最明显的上述三个基因,在新生组与成年组土拨鼠之间也有明显差异。此类基因造成肝细胞内钙离子浓度的差别,间接影响其中肝炎病毒的复制。这种表达差异很可能是导致两个年龄段动物感染土拨鼠肝炎病毒后转归不同的原因之一。     

(魔咒门) 寻鹰之计

【上集回顾】古古卡将土拨鼠国王带回魔芋世界,却发现它并不是知道咒语第四个字的动物。就在大家一筹莫展时,土拨鼠国王摆出雄鹰飞翔的姿势,似乎在暗示着什么……     

淘气小贴士

<正>小鸟:哇,这是什么好吃的?分我一点!土拨鼠:不给,不给,就不给!小鸟:"敢不给,兄弟们上!"土拨鼠:"人多欺负人少,不玩啦!"说完弃食而逃。小乌们争开了:"我的,我的,这是我的。"鸟群开始打架。在不远处,土拨鼠一脸奸笑。(编者注:有时候,放弃不失为一种策略。)(南昌万雨菡)     

(魔咒门) 双扇黑鸟国

[上集回顾]根据土拨鼠国王提示的线索,古古卡几人找出了知道咒语第四个字的动物——鹰。传递完咒语后,土拨鼠国王拿出了一张写着谜语的字条。谜语的谜底是什么?它能帮古古卡他们找出下一个咒语知情者吗?     

一种HBV研究的新动物模型-喜马拉雅旱獭β-actin基因的克隆及序列分析

目的 喜马拉雅旱獭对土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）高度易感,可作为HBV感染的新动物模型.本研究对喜马拉雅旱獭β肌动蛋白（β-actin）的部分cDNA序列进行了克隆和序列分析,为喜马拉雅旱獭在HBV感染研究中的应用奠定基础.方法 根据Genbank的土拨鼠β-actin cDNA的序列设计特异性引物,提取旱獭脾组织总RNA作为模板,RT-PCR扩增旱獭β-actin cDNA序列;PCR产物纯化后连接至T载体（pMD18-T）,构建重组质粒pMD18-T-mhActin.对重组质粒进行PCR初筛及酶切鉴定,选择阳性克隆测序;对所获得的序列进行同源性和种系进化分析.结果 获得的旱獭β-actin序列为349 bp（nt887～1 235）,其中编码序列为323 bp（nt-887～1209）,编码106个氨基酸,包含形成二硫键的2个丝氨酸位点（氨基酸16和氨基酸105）及与β-actin功能相关的2个ATP结合位点、6个凝溶胶蛋白结合位点和6个profilin结合位点.同源性分析发现上述序列与其它哺乳动物β-actin的同源性均高达88 %以上,与土拨鼠β-actin的同源性最高（99.69 %）,其氨基酸序列的同源性为100 %.种系进化树分析提示喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的亲缘关系最近,其次为其它啮齿类动物.结论 成功克隆了喜马拉雅旱獭β-actin的部分序列.序列分析发现喜马拉雅旱獭β-actin与土拨鼠β-actin的同源性最高.     

思维跳跳糖

<正>哇,SURPRISE呼噜噜——冬眠进行时有些动物的冬眠时间很短,只有几十天;有些动物的冬眠时间则很长。睡鼠的冬眠期长达六七个月呢!在加拿大的安大略省,每年的2月会有不少土拨鼠从冬眠中苏醒并爬出洞穴,这预示着距离春天还有6周的时间!当地人还将2月2日定为土拨鼠节呢。     

土拨鼠的“土拨语”

<正>土拨鼠们常聚在一起玩,有的在模拟战斗,有的在亲昵的互相打招呼,有的则直立在地洞的边缘,负责瞭望。一旦有猎食者到来,这种祥和的景象便立刻打破。嗨!我是土拨鼠C小镇的镇长库里。刚打探到一个消息——我听说最近有一批动物研究小专家要来我们镇拜访和学习。啧啧……看来我们“动物语言大师”的称号已经在人类社会传遍了,好吧,既然他们虚心求教,那我们就立即开个“土拨语”学习班,收下这帮学生!土拨鼠的信息传播速度毋庸置疑。这不,通知下达没多久,老师们的课都备好了。上课铃马上就响,各位未来的小科学家,你们云隔壁2号洞口交完学费就能来听讲了!     

喜马拉雅土拨鼠非冬眠期乳酸脱氢酶同工酶基因表达特征

用聚丙烯酰胺凝胶电泳和紫外光谱法分析非冬眠期喜马拉雅土拨鼠4种组织的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的酶谱及其活力,该鼠骨骼肌酶带的多态分布,可能是潜在的调节基因调控所致。另外,本文还对构象异构体产生的亚带进行了研讨。     

乙肝患者血清HBXN-末端,C-末端和中部的识别

<正>对于哺乳动物嗜肝DNA病毒基因组x区域第四个也是最小的开读框架(OPF)的了解甚微,据知在人或土拨鼠感染期间,这个区域呈现表答,即产生抗x基因产物的抗体。最近的研究表明x基因产物起转录激活因子的作用。     

CT与MRI对肝硬化背景下小肝癌检出率的比较

目的:分析比较CT与MR对肝硬化背景下小肝癌检出情况,探究CT与MR在肝硬化背景下小肝癌的诊断价值。方法:选择2010年6月~2015年6月期间,我院收治确诊为肝硬化背景下小肝癌患者91例为研究对象,病理及临床相关方法确诊102个病灶,其中小肝癌69个和微小肝癌33个,患者均在不同时期或序列下行多排螺旋CT与MRI检查,分析比较两者对小肝癌和微小肝癌的检出率。结果:多排螺旋CT检查发现肝癌小病灶91个,其中66个小肝癌,25个微小肝癌;MRI检查发现95个病灶,小肝癌67个,微小肝癌28个;69个小肝癌病灶,检出率最高的为CT动脉期(92.75%)与LAVA动脉期(92.75%),检出率最低的为CT平扫(76.81%);33个微小肝癌病灶,检出率最高为LAVA动脉期(75.76%),检出率最低的为LAVA平衡期(36.36%);CT平扫、门静脉期、动脉期、平衡期、MRI-IN-PHASE、LAVA平衡期、LAVA平扫对小肝癌的检出率显著高于对微小肝癌的检出率(P0.05);CT对小肝癌的检出率显著高于微小肝癌的检出率(P0.05),MRI对小肝癌与微小肝癌的检出率无显著差异(P0.05);MRI与CT对小肝癌的检出率不存在差异(P0.05),但MRI对微小肝癌的检出率显著高于CT(P0.05)。结论:MRI-LAVA的动脉期序列对小肝癌病灶与微小肝癌病灶的检出率最高;CT与MRI在对小肝癌的检出率不存在差异,但MRI对微小肝癌的检出具有更明显的优势。     

血清miR-21 及AFP 在大鼠肝癌发生过程中的动态表达比较分析

目的:分析血清miR-21在肝癌发生过程中的表达水平并将其与传统肝癌血清标志物甲胎蛋白(AFP)比较,探索其成为肝癌早期诊断血清标志物的可能性。方法:二乙基亚硝胺(DENA)腹腔注射诱导建立大鼠肝癌模型,建模过程中收集造癌各个阶段的血清。Realtime-PCR检测血清miR-21的表达情况,ELISA法检测血清AFP水平。结果:与正常组及纤维化期大鼠相比,miR-21在肝硬化期、肝癌早期、肝癌晚期的大鼠血清均有不同程度上调(P<0.05),AFP在肝癌早、晚期的大鼠血清明显上调(P<0.05);与肝硬化期大鼠比较,肝癌早、晚期大鼠体内的miR-21表达显著上调(P<0.05),AFP在肝癌早期、肝癌晚期均显著上调(P<0.05)。结论:血清miR-21参与了肝癌发生的过程,对于肝癌发生的各个阶段均有很大的指示作用,可能作为肝癌预防和早期诊断的一个潜在标志物。     

靶向肝癌干细胞的肿瘤治疗进展

肝癌是最常见的五大癌症之一,也是患者死亡的重要癌症类型之一。传统方法对治疗早期肝癌取得了一定的进展,但是癌症的复发、转移和耐药仍未得到根本解决,而这些现象可通过癌症干细胞(cancer stem cells,CSCs)理论进行解释。原发性肝癌主要包括肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)和肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC),目前认为其可能部分起源于肝癌干细胞。与肝癌干细胞有关的Wnt/β-catenin、TGF-β、Notch和Hedgehog等信号通路和Ep CAM、Lin28和mi R-181等分子,在体内外调节肝癌干细胞活性,并可用以设计预防或治疗癌症的分子靶点。然而,肝癌和肝癌干细胞涉及一个复杂的发生和调节机制,存在相互干扰和冗余的信号通路,因此针对单个分子或途径的治疗效果有限。该文综述了肝癌干细胞与肝癌发生的进展及其相关的信号通路与关键分子,与针对肝癌干细胞治疗的新策略。     

肝癌家族聚集性发病的分子遗传学研究进展

许多研究表明,肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）呈家族聚集性发病的倾向比较明显,肝癌家族史阳性的人群罹患肝癌的风险远超阴性人群。但关于肝癌聚集性发病的机制并未得到全面的阐释。该文对近几年来与肝癌家族聚集性发病相关的研究作出综述,以期为肝癌家族聚集性发病的研究提供一定的理论依据。     

Survivin 及Anx-A1 在肝癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨Survivin及Anx-A1在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集原发性肝癌病例45例,采用免疫组织化染色法检测Survivin及Anx-A1在肝癌组织及癌旁正常组织中的表达,分析Survivin及Anx-A1的表达与肝癌临床病理特征的关系。结果:Survivin在肝癌组织中的阳性表达率为86.67%,在癌旁正常组织中的阳性表达率为17.78%;Anx-A1在肝癌组织中的阳性表达率为46.67%,在癌旁正常组织中的阳性表达率为8.89%;Survivin及Anx-A1在肝癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P0.05);不同肿瘤分级患者肝癌组织中Survivin与Anx-A1的表达水平存在显著差异(P0.01),肿瘤分级越高,Survivin与Anx-A1表达水平越高。结论:Survivin及Anx-A1的表达与肝癌的发生发展密切相关,可用于肝癌的辅助诊断。     

p53基因5/6外显子突变与广西肝癌高发区肝癌家族聚集性的相关性

为了研究p53基因5/6外显子突变与广西肝癌高发地区肝癌家族聚集性的关系。研究采用配对方法,选取肝癌高发家族、肝癌单发家族和无癌家族中未发生肝癌的家族成员各130例作为研究对象,同时选取上述高发地区肝癌患者30例作为肝癌组对照。应用PCR-SSCP技术检测研究对象外周血细胞DNA中p53基因5/6外显子的突变情况并进行基因测序。研究发现三组家族成员中p53基因5/6外显子的突变率为0%。肝癌组中p53基因5/6外显子的总突变率为10%(3/30)。肝癌组p53基因5/6外显子的总突变率与肝癌家族组间突变率比较,差异均具有统计学意义(p0.05)。综上,p53基因5/6外显子突变可能不是广西肝癌高发区肝癌家族聚集性的遗传易感因素,广西肝癌高发区肝癌家族成员中可能尚未发生p53基因5/6外显子突变或较为罕见,肝癌患者中出现的p53基因5/6外显子突变可能是在后天多因素的影响下发生,从而参与了肝癌的发生发展。     

基于电镜和免疫组化的线粒体数目标志物评估肝癌的初步研究

目的:研究线粒体数目与肝癌生长的相关性。方法:利用电子显微镜技术定量肝癌组织中线粒体数目,利用免疫组织化学技术评估肝癌组织中的线粒体标志物COX Ⅳ及HSP60表达水平,分析电镜肝癌线粒体定量结果与COX Ⅳ及HSP60表达量之间的相关性,并比较肝癌中线粒体数目、COX Ⅳ及HSP60表达量与肝癌直径之间的关系。结果:与癌旁相比,肝癌组织中线粒体数目(P0.001)、COX Ⅳ及HSP60的表达量显著降低(P=0.0417,P=0.0290)。COX Ⅳ及HSP60表达水平与线粒体数目无显著相关(r~2=0.009,P=0.5468;r~2=0.056,P=0.1396)。线粒体数目与肿瘤直径显著负相关(r~2=0.1086,P=0.0434),COX Ⅳ及HSP60表达量与肿瘤直径无显著相关(r~2=0.0251,P=0.3287;r~2=0.0461,P=0.1830)。结论:线粒体数目是潜在的肝癌生长标志物。但常用的线粒体定量分子HSP60与COX Ⅳ并不能准确定量肝癌线粒体。