克隆和识别抗血栓受体

有两种人类血小板ADP受体参与血小板的活化。一种与G蛋白中的Gq分支结合,另一种通过Gi参与腺苷酰环化酶的抑制。与Gi相关的受体是抗血栓药物ticlopidine和clopidogrel的作用目标。因此,人们试图将其分离出来,但此前未获成功。Nature 409卷 6817期202页（ 2001年1月11日出版）报道：现在,这一被称为P2Y12的受体终于被克隆和识别出来。研究人员发现,在没有天然止血功能的患者身上,编码P2Y12受体的基因有缺陷。克隆和识别抗血栓受体@孙雷心     

凝血酶受体的克隆

科学家们最终可能发现了通过凝血酶信号形成血块.加利福尼亚大学(San Francisco,CA)的一个研究小组已经鉴定和克隆了一种受体,这种受体是在血小板和内皮细胞的表面     

中华鲟生长激素受体的分子克隆和功能分析

为研究生长激素对中华鲟生长的调控机制,克隆了中华鲟生长激素受体cDNA.csGHRcDNA的可读框编码了611个氨基酸残基的跨膜蛋白质,含有GHR的所有特征结构域.序列对比发现其他种属GHR中高度保守的氨基酸残基在csGHR中发生了替换.我们利用CHO细胞分析了csGHR的生物功能和csGHR分子中高度保守性氨基酸残基替换的生物意义.csGHR稳定表达细胞中共转染的受丝氨酸蛋白酶抑制剂2.1（Spi1.2）启动子驱动的荧光素酶报告基因受海鲤生长激素（seabream GH,sbGH）诱导表达,并且sbGH诱导稳定表达细胞显著增殖.csGHR稳定表达细胞培养液中检测到中华鲟生长激素结合蛋白质,并且csGHBP的生成需要金属蛋白酶活性的参与.csGHR配体结合域的Asp突变为Glu显著提高csGHR介导的上述生物活性,而Asp突变为Ala则明显降低csGHR的生物活性.这些结果表明,克隆的csGHR具有完全生物功能,并且csGHBP可能通过csGHR蛋白酶解而生成.这些发现将有助于全面了解中华鲟生长调控机制.     

凋亡细胞被识别和吞噬机制

凋亡细胞能被吞噬细胞吞噬,这对于正常组织的动态平衡和免疫反应是非常重要的。在凋亡细胞被吞噬（engulfment）的过程中,吞噬细胞表面存在大量的受体来识别凋亡细胞发出的信号,如：“吃我（eat-me）”信号、缺少存在于健康细胞上的“不吃我（don’t-eat-me）”信号以及由凋亡细胞分泌的可溶性“来吃我（come-get-me）”信号。至少有7种线虫（Caenorhabditis elegans）吞噬基因（它们在哺乳动物中存在同系物）组成了两条平行但部分重叠的吞噬信号通路,并且通过一个类似于巨胞CL（macropinocytosis）的“栓系-激活（tether and tickle）”保守机制吞噬凋亡细胞,这个机制因吞噬细胞和凋亡细胞的种类以及细胞凋亡后的时间差异而不同。     

多巴胺受体的cDNA克隆

通过多巴胺受体的5个cDNA克隆,综述和分析了5个多巴胺受体(D₁R-D₅R)的基因结构,在染色体上的定位及其mRNA在中枢脑区的分布;比较了这5个受体cDNA克隆的结构特征和药理学性质.     

绿豆象气味受体基因的克隆和时空表达谱

【目的】本研究旨在克隆绿豆象Callosobruchus chinensis触角4个普通气味受体(odorant receptor, OR)基因,明确这些OR基因在绿豆象不同日龄雌雄成虫组织中的表达谱,为进一步研究基因功能奠定基础。【方法】基于绿豆象成虫触角转录组数据,预测绿豆象OR候选基因;利用RT-PCR克隆绿豆象4个OR基因的全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;利用qPCR检测这4个OR基因在绿豆象雌雄成虫不同组织(触角、不含触角的头、腹、足和翅)中以及1, 3和5日龄雌雄成虫触角中的表达量。【结果】根据预测的基因序列,克隆得到4个绿豆象气味受体基因的cDNA全长序列,分别命名为CchiOR8,CchiOR10,CchiOR16和CchiOR39,GenBank登录号分别为MW732665, MN832705, MW732664和MN832706;编码的氨基酸数目分别为369, 352, 400和367。系统发育树分析表明,CchiOR8, CchiOR10和CchiOR16均与大猿叶甲Colaphellus bowringi的同源蛋白亲缘关系较近,而CchiOR39与果...     

第一个阿片受体克隆成功

谢国玺博士最近从人胎盘中克隆出一个具有阿片结合活性的受体,这是第一个克隆成功的阿片受体。阿片受体的存在最早是于70年代初基于药理学实验提出的,以后许多实验室又对阿片受体的生化特性做了大量的研究,并纯化出一些不同分子量的阿片受体,进一步证实了阿片受体的存在。尽管这些实验室一直在致力于阿片受体的     

豚鼠生长激素受体cDNA的克隆

报道了豚鼠肝生长激素受体（ＧＨＲ）的ｃＲＮＡ克隆和编码区序列。它由１８９９ｂｐ组成,编码６１０个氨基酸。此外,还报道豚鼠ＧＨＲ的结构特征和同源性比较的结果。     

家鸡钠尿肽受体B基因的克隆和组织表达分析

钠尿肽受体B(NPR-B)作为C-型钠尿肽(CNP)的选择性受体,可介导CNP的多种生理效应,包括调控垂体激素释放、维持心血管系统稳定、调节神经系统发育、调控细胞增殖及促进骨骼生长等。本研究以家鸡Gallus gallus domesticus为模型,首次报道了NPR-B基因的全长c DNA,并检测其在成体家鸡中的组织表达图谱。结果显示:家鸡NPR-B基因c DNA全长为3 189 bp,可编码1 062个氨基酸。家鸡NPR-B与人Homo sapiens、大鼠Rattus norvegicus、非洲爪蟾Xenopus laevis和斑马鱼Danio rerio分别具有79%、78%、73%、67%的氨基酸序列一致性;同时采用实时荧光定量PCR技术探究家鸡NPR-B基因的组织表达分布,发现其在心脏、肌肉、中脑和垂体(头部)中表达水平较高。本研究结果为阐释CNP及其选择性受体NPR-B在家鸡中的生理功能奠定基础。     

克隆和动物克隆

１９９７年２月２３日,英国苏格兰爱丁堡罗斯林研究所Ｗｉｌｍｕｔ和Ｃａｍｐｂｅｌ领导的研究小组,用高度分化的乳腺细胞成功克隆绵羊的消息在英国《Ｎａｔｕｒｅ》杂志发表后,在全世界引起轰动［１］。由于哺乳动物的克隆成功,人的克隆已出现成功的可能,因此已引起...     

人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ,测序表明,４４２ｂｐ片段与献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列,其转录水平高于正常ＰＢＲ,该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白,这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系,表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异和异质性,突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理     

人外周型苯二氮卓受体及其突变受体cDNA克隆和序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆了三种人外周型苯二氮卓受体ＰＢＲｃＤＮＡ,测序表明,４４２ｂｐ片段与文献报道相比缺失８４ｂｐ编码序列,其转录水平高于正常ＰＢＲ．该序列编码一个与ＰＢＲ结构相关但缺失了２８个氨基酸残基的突变受体蛋白．这一异常转录本可能是通过选择性剪接方式转录产生并只存在于中国人肝癌ＢＥＬ７４０２细胞系,表明ＰＢＲ基因表达具有细胞特异性和异质性．突变受体的发现为研究ＰＢＲ的结构和功能提供了理想的分子和细胞模型     

成功克隆人催产素受体的cDNA

大阪大学医学部妇产科教研室教授谷泽修、助手木村正等与大阪大学微生物病研究所分子遗传系教授兼东京大学医学部生化学第1教研室教授冈山博人、大阪生命科学研究所神经科学研究部门副部长森宪作等共同克隆了人催产素受体(OTR)的cDNA。将受体用于筛选,开发防止早产的药。罗特制药公司正在用开发这种受体的筛选法。还将成为从分子生物学探讨分娩机制的线索。木村在千叶县召开的日本产科妇女科学会总会上发表了这项成果。木村等与冈山合作从分娩之后因子宫破裂而摘除的子宫肌细胞中抽提出mRNA,建立了cDNA库。     

深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆和表达

目的 通过对深黄被孢霉（Mortierella isabellina）M6-22中MDH基因的分离鉴定,为深入了解苹果酸脱氢酶（MDH）的生理特性、结构和功能奠定基础,并进一步探讨生物体中MDH的代谢作用。方法 通过基因克隆的方法以深黄被孢霉的cDNA为模板,PCR扩增获得苹果酸脱氢酶基因MIMDH1。结果 测序结果显示该序列长990 bp,分别编码329个氨基酸。序列分析表明该序列与瓜笄霉菌（Choanephora cucurbitarum）MDH的相同性高达77%。将MIMDH1片段连接到表达载体pET32a(+)中构建重组表达质粒pET32aMIMDH1并转化至大肠埃希菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳检测在50 kD左右有一条蛋白表达条带,经镍柱亲和层析纯化和酶活分析结果显示所纯化的重组蛋白酶活高达379.28 U/mg。结论克隆的cDNA序列MIMDH1是一个新的苹果酸脱氢酶基因,所编码的蛋白具有MDH的活性。     

人前列腺环素受体的克隆

京都大学药学部教授市川厚等、医学部教授成宫周等小组克隆了人前列腺环素(PGI2)受体的cDNA。PGI2具有血小板凝集抑制作用和血管平滑肌扩张等作用,可有效她预防和治疗脑血栓和心肌梗塞。但是,因其在血液中的半衰期短,分解快,所以要开发其衍生物。虽然合成了很多衍生物,但是,因其多数也与其它受体结合,副作用大,因此能产品化的衍生物有限。期望利用这次克隆的人PGI2受体开发出能很强地特异性作用于人PGI2受体的医药品。于9月7～10自在大阪召开的日本生化     

大脑关键神经元受体基因的克隆

日本京都大学的Shigetada Nakanishi研究小组克隆了大鼠NMDA受体蛋白的基因,而美国堪萨斯大学的Elias Michaelis则克隆了一种NMDA受体蛋白。NMDA受体是脑中的重要神经元膜蛋白,是谷氨酸受体中的关键因子。这两个小组的成功将使他人较易于检测用于控制NMDA受体、治疗与谷氨酸有关的疾病的药物。这类疾病包括退化性脑失常、中风、癫痫及记忆丧失。 Nakanishi及其同事在Nature杂志上详细描述了他们的工作。Michaelis则在最近一次神经科学学会议上介绍了自己的工作。自1989年12月以来,已克隆了12种不同的谷氨酸受体,其中,NMDA受体被认     

人D_1多巴胺受体得到克隆

多巴胺能系统在脑功能中的重要性由于与某些神经和精神疾患如Parkinson氏病和精神分裂症的联系而受到人们的重视。多巴胺多样的生理作用由两个与G蛋白偶联的受体的相互作用所介导,基于生化和药理学特征,多巴胺受体被分为D_1和D_2两个亚型。D_1和D_2分别刺激和抑制腺苷酸环化酶的活性。D_1受体可     

抗血栓靶点P2Y_（12）受体的结构学研究

急性冠状动脉综合征（acute coronary syndromes,ACS）是一种常见的心血管疾病,临床表现主要为不稳定心绞痛、非Q波心肌梗死、Q波心肌梗死和心脏缺血性猝死等[1]。即使得到最大限度的治疗,仍然有5%~10%的ACS患者在初次发病后的一个月内出现心脏功能反复性失常,甚至是死亡。我们知道,ACS属于冠心病的一种,当冠脉内粥样斑块发生松动、裂纹或破裂时,斑块内高度致血栓形成的物质     

植物基因识别及克隆策略研究进展

随着基因组数据的积累,同时识别多个基因、解读其功能,正在成为揭示环境信号调控植物组织分化及器官形成分子机制必不可少的途径。我们从基因组水平、转录水平和蛋白质水平,回顾总结了识别发育及代谢相关基因、解读其功能的一般策略,讨论并比较了各主要策略的优缺点,并提出方法选择的一般原则。