NRP—HBVDNA探针在临检应用中的研究

本文介绍了一种简便的检测血清ＨＢＶＤＮＡ的方法。参照Ｒｅｎｚ等人的标记方法，构建了直接酶标ＨＲＰ－ＨＢＶＤＮＡ探针。此探针经与固定在硝酸纤维素滤膜上的血清靶ＤＮＡ杂交后，可通过化学发光自显影检测技术观察结果。敏感度可检测０．１ｐｇ靶ＤＮＡ，相当于同位素探针的灵敏度。对６３份ＨＢｓＡｇ ＨＢｅＡｇ和ＡｎｉｔＨＢｃ ＥＬＩＳＡ阳性血清以及２４份ＨＢｓＡｇ Ａｎｔｉ－ＨＢｃ阳性，ＮｂｅＡｇ阴性血清用ＨＲ     

HBsAg携带者重叠感染HCV、HDV的血清学调查

对３６２名无症状高滴度ＨＢｓＡｇ携带者用ＲＩＡ法检测ＨＢｅＡｇ、Ａｎｔｉ－ＨＢｅ、Ａｎｔｉ－ＨＣＶ、Ａｎｔｉ－ＨＤＶ。结果表明,ＨＢｅＡｇ阳性率随ＨＢｓＡｇ滴度的增高而增加,且有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。重叠感染以ＨＢＶ＋ＨＣＶ最高,占２７．６％;其次是ＨＢＶ＋ＨＤＶ,占９．１％;ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ最少,占６．４％。但是,以上重叠感染率均与ＨＢｓＡｇ滴度及／或ＨＢｅＡｇ阳性率高低无关（Ｐ＞０．０５）。调查显示,无症状ＨＢｓＡｇ携带者中ＨＢＶ＋ＨＣＶ,或ＨＢＶ＋ＨＤＶ,或ＨＢＶ＋ＨＣＶ＋ＨＤＶ的重叠感染均可发生。     

用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

高复制型慢性乙型肝炎血清HBV复制指标与肝脏病变关系的探讨

本文报道５５例高复制型慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶ复制指标与肝脏病变的关系。５５例均为血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗－ＨＢｃ阳性,部分病例血清ＨＢｃＡｇ、ＤＮＡＰ、ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性,均作肝穿活检,病理报告ＣＡＨ５例、ＣＬＨ９例、ＣＰＨ４１例,前二者组成Ａ组,代表病变活动组;ＣＰＨ称Ｂ组,代表病变稳定组。结果显示Ａ组各项肝脏病变在ＨＢＶ复制情况下检出率普遍高于Ｂ组;ＡＬＴ异常时肝脏各项病变检出率达８０％以上者Ａ组也多于Ｂ组,而且Ａ组出现４例碎片状坏死、Ｂ组则无,显示乙肝病毒复制程度与肝脏病变活动性、广泛程度、肝功能受损等情况密切相关,因而提示抗病毒治疗的必要性。     

乙型肝炎病人尿细胞中HBV的实验研究

本文采用间接免疫荧光法（ＩＦ）,ＲＰＨＡ法,ＥＬＩＳＡ法及斑点杂交技术检测１０例无症状ＨＢ－ｓＡｇ携带者及８９例乙肝病人尿细胞中的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及ＨＢＶＤＮＡ,发现尿细胞中有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ存在。结果提示：乙肝无症状携带者及乙肝病人尿细胞中具有ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ,因此更进一步证实尿液具有传染性。     

国产和美国产乙型肝炎血源疫苗五年效果比较

母亲ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ均阳性者所生之婴儿，随机接种国产和美国产乙肝疫苗，免疫后５年婴儿ＨＢｓＡｇ携带率分别为１５．４％和１８．２％；抗－ＨＢｓ阳性率各为７６．９％和７７．３％，两组均无显著性差别。     

乙型肝炎表面抗原凝难判定血清的研究

用中国药品生物品检定所检定合格的国内外ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂及ＡＢＢＯＴＴ抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃＥＩＡ试剂,对所收集的１３份ＨＢｓＡｇ疑难判定血清进行检测,并用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ,结果显示国内外ＨＢｓＡｇ试剂对部分ＨＢＶＤＮＡ阳性样品的检出率差异较大,提示这些样品可能为Ｓ基因突变株或ＨＢｓＡｇ含量较低,因此,ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂的敏感度仍有待进一步提高,并应进一步研制检测Ｓ基因突变株的     

苹果果实组织脱落酸结合位点的亚细胞定位

在苹果（ＭａｌｕｓｐｕｍｉｌａＭｉｌ）果实细胞的可溶性组分中存在ＡＢＡ特异结合位点,这些位点能与ＡＢＡ形成稳定的３ＨＡＢＡ蛋白结合复合物,而微粒体部分未表现出３ＨＡＢＡ结合活性。可溶性组分对３ＨＡＢＡ的结合效率与结合稳定性需要活体组织完整细胞的存在。ＡＢＡ共价交联物ＡＢＡＬＹＣＨ,具有与ＡＢＡ相同的抑制红苋菜（ＡｍａｒａｎｔｈｕｓｔｒｉｃｏｌｏｒＬ．）种子萌发的生物活性,能有效地竞争抑制果实组织圆片对３ＨＡＢＡ的结合。通过ＡＢＡＬＹＣＨ对苹果果实组织圆片及果实组织游离细胞的荧光染色表明,未成熟果实的细胞外周被特异性地染色。在ＢＳＡ存在的情况下,ＡＢＡＬＹＣＨ复合物被转运进细胞,形成密集的强烈荧光团。结果表明,ＡＢＡＬＹＣＨ与３ＨＡＢＡ的竞争性结合发生在细胞质膜水平。     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

HRP-HBVDNA探针在临检应用中的研究

本文介绍了一种简便的检测血清ＨＢＶＤＮＡ的方法。参照Ｒｅｎｚ等人的标记方法,构建了直接酶标ＨＲＰ ＨＢＶＤＮＡ探针。此探针经与固定在硝酸纤维素滤膜上的血清靶ＤＮＡ杂交后,可通过化学发光自显影检测技术观察结果。敏感度可检测０－１ｐｇ靶ＤＮＡ,相当于同位素探针的灵敏度。对６３份ＨＢｓＡｇＨＢｅＡｇ和Ａｎｔｉ ＨＢｃＥＬＩＳＡ阳性血清以及２４份ＨＢｓＡｇＡｎｔｉ ＨＢｃ阳性,ＨｂｅＡｇ阴性血清用ＨＲＰ ＨＢＶＤＮＡ探针进行检测,结果探针ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别为１００％（６３）和５８％（１４）;对５０份ＨＢｓＡｇ,ＥＬＩＳＡ阴性和ＡＬＴ正常的血清,探针ＨＢＶＤＮＡ全部阴性。实验结果表明本方法具有很大的推广应用价值。     

乙型肝炎病人重叠感染丙型肝炎的评价

应用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ法检测５０２例乙肝病人血清,４０１例ＨＢｓＡｇ阳性血清中,有１１４例（２８．４％）抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ双项阳性,２５例（６．２％）ＨＣＶＲＮＡ单项阳性;２１例（５．２％）抗－ＨＣＶ单项阳性。将ＨＢｓＡｇ乙肝病人分成ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢＶＤＮＡ,ＨＢｅＡｇ阴性组。前者抗－ＨＣＶ阳性率为１１．６％～２０．５％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为１６．２％～２０．５％。后者抗－ＨＣＶ阳性率为２０．２％～５５．６％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２３％～６０．３％。结果说明长期携带ＨＢＶ者和慢性乙肝病人均可重叠ＨＣＶ感染。ＨＢＶＤＮＡ阳性组抗－ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ阳性率明显高于ＨＢＶＤＮＡ阳性组     

六种固氮蓝藻提取液对玉米的促长作用和提取液成分比较

本文用六种固氮蓝藻的提取液处理玉米种子,同时对其提取液氨基酸组成和碳水化合物与维生素Ｂ１２的含量进行了分析。结果表明固氮鱼腥藻ＨＢ６８６（ＡｎａｂａｅｎａａｚｏｔｉｃａＨＢ６８６）、球孢鱼腥藻ＨＢ１０１７（Ａ．ｓｐｈａｅｒｉｃａＨＢ１０１７）、多变鱼腥藻ＨＢ１０５８（Ａ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓＨＢ１０５８）和小单歧藻ＨＢＴＴ（ＴｏｌｙｐｏｔｈｒｉｘｔｅｎｕｉｓＨＢＴＴ）的提取液中氨基酸、碳水化合物和维生素Ｂ１２的含量高于鱼腥藻ＳＰ．ＨＢ１０４２（Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＨＢ１０４２）和繁育管链藻ＨＢ３８（ＡｕｌｏｓｉｒａｆｅｒｔｉｌｉｓｓｉｍａＨＢ３８）。同时,促进玉米种子萌发和幼苗生长的效果前四种藻较好,后两种则较差。     

用杆状病毒载体在家蚕细胞中表达HBeAg基因

以ＰＣＲ技术扩增含有ＰｒｅＣ信号肽序列及完整的ＨＢｅＡｇ基因的序列（即ＨＢｃＡｇ基因５′端４４７ｂｐ）,在５′端加上合适的酶切位点,克隆到家蚕核多角体病毒转移载体ｐＢｍ０３０上,与野生型ＢｍＮＰＶＤＮＡ共转染家蚕ＢｍＮ细胞,空斑纯化后得到多角体基因失活的重组病毒。ＥＬＩＳＡ法测定表明培养液上清中ＨＢｅＡｇ效价达１∶３２０００,细胞内ＨＢｅＡｇ效价为１∶２０００,培养液及细胞内的ＨＢｃＡｇ含量极低（＜１∶１６０）。研究结果表明,ＢｍＮ细胞能正确识别与切割ＨＢｅＡｇ信号肽序列,所表达的ＨＢｅＡｇ效价高,纯度好,明显优于大肠杆菌表达系统     

乙型肝炎、肝硬变和肝癌中HBxAg的表达及其在肝癌发生中的作用

对３７９例良、恶性肝组织进行的免疫组织化学研究显示,３３％的慢性迁延性肝炎（６／１８）、７６％的慢性活动性肝炎（２６／３４）、９２％的肝硬变（５７／６２）和９７％的肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）（５８／６０）中有ＨＢｘＡｇ表达,阳性率高于ＨＢｓＡｇ或ＨＢｃＡｇ。癌周肝中的ＨＢｘＡｇ阳性率显著高于非癌周肝。与其它２种ＨＢＶ抗原不同,ＨＢｘＡｇ表达在细胞类型上有较明显的选择性,在肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及ＨＣＣ中较强。与ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ和ＥＧＦ－Ｒ表达进行的对照研究表明ＨＢｘＡｇ与ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２这２种ＨＣＣ发生相关基因的表达关系密切。ＰＣＮＡ染色结果显示ＨＢｘＡｇ阳性组织的细胞增殖活性显著高于ＨＢｘＡｇ阴性组织。我们的结果还表明ＨＢｘＡｇ表达与肝细胞不典型增生的发生和进展有关、提出ＨＢＶＸ基因可能通过其表达产物（ＨＢｘＡｇ）首先激活ＩＧＦⅡ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因,继而引起显著的ＳＰＬＣ增生和ＳＣＤ而参与ＨＣＣ发生的．     

反义寡聚硫代磷酸脱氧核苷抑制体外细胞培养系统中乙肝抗原表达的研究

设计合成了两个分别互补于乙肝病毒２．１ｋｂ ｍＲＮＡ起始区（片段Ａ）和增强子区（片段Ｂ）的硫代磷酸的ＤＮＡ片段,在经克隆ＨＢＶ ＤＮＡ转染ＨｅｐＧ２细胞建立的ＨＢＶ短暂表达系统及稳定产生ＨＢＶ的２２１５细胞中研究二者对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｅＡｇ表达的抑制作用。结果表明反义寡聚物能不同程序抑制乙肝抗原表达,并与剂量呈一定正相关。在ＨｅｐＧ２细胞ＨＢＶ短暂表达系统中,６μｍｏｌ／Ｌ浓度时,片段Ａ、Ｂ对ＨＢ     

乙型肝炎病毒重组腺病毒载体疫苗的免疫研究进展

以人类腺病毒（Ａｄ）为表达载体发展多价展组口服活疫苗,尤其在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）疫苗研制上成效显著,表达ＨＢｃＡｇ,ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ的重组人类Ａｄ７型（ｄ７）活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果。在重组Ａｄ活载体疫苗研制方面是一项重大进展,表达ＨＢｓＡｇ的重组Ａｄ７活载体口服疫苗已有人体初次免疫试验的报道。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126Il3→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢＳａＧ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒ ＨＢ     

病毒性肝炎HAV，HBV，HCV，HDV和HEV重叠感染的研究

采用ＥＬＩＳＡ法检测了１０８例乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清中的五种肝炎病毒──甲型（ＨＡＶ）、乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）和成型（ＨＥＶ）肝炎病毒的标志物,并采用ＰＣＲ技术检测了患者血清ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ及ＨＤＶＲＮＡ。结果五种肝炎病毒重叠感染者３５例（３２．４％）,单纯ＨＢＶ感染者７３例（６７．６％）。ＨＢＶ、ＨＡＶＭ重感染率为４．６％,ＨＢＶ、ＨＣＶ二重感染率为９．２％,ＨＢＶ、ＨＤＶＭ重感染率为１４．８％,ＨＢＶ、ＨＥＶ二重感染率为１．９％,ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ三重感     

HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）变异株,其ＨＢｓＡｇ主蛋白ａａ１２６发生Ｉｌｅ（ＡＴＴ）到Ｓｅｒ（ＡＧＴ）的取代。已知ａｄｒ／ａｙｒ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｉｌｅ,而ａｄｗ／ａｙｗ亚型ＨＢｓＡｇ１２６位为Ｔｈｒ,表明ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体ＨＢｓＡｇ１２６Ｓｅｒ主蛋白ａａ１２０－ａａ１３０区段的二级结构与野生型ａｄｒＨＢＶＨＢｓＡｇ１２６Ｉｌｅ相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响ａ抗原决定簇（ａ１２４－ａａ１４７）的抗原性。为了证实这一点,构建了突变Ｓ基因表达质粒,在ＳＶ４０早期启动子的控制下进行抗原表达。利用ＨＢｓＡｇ９肽（Ｔｈｒ－Ｉｌｅ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｉ单克隆抗体和９肽（Ｔｈｒ－Ｔｈｒ１２６－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ｍｅｔ）抗ｔ单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ｓｅｒ１２６突变蛋白对抗ｉ单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗ｔ单克隆抗体的反应性则与ＨＢｓＡｇ１２６Ｔｈｒ接近。但用三种抗－ａ单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白ＨＢｓＡｇ１２６