眼镜蛇毒研究与临床应用近况

用眼镜蛇整体泡酒饮服,治疗腰腿痛,祖国医学已有记载［１］,已有悠久历史。３０年代国外应用眼镜蛇毒治疗关节痛、神经痛,临床应用数百例,后因起效慢等原因,而终止研究与应用。我院于６０年代初开始对眼镜蛇毒进行系统研究,如原料标准,注射剂质控标准、安全试验、半数致死量（ＬＤ５０）试验、药理学、药效学、长毒以及“三致”试验等。结果表明：蛇毒及其制剂,治疗风湿痛、神经痛等疗效高于毒副反应。同时我们又研究以眼镜蛇毒为君药与中药伍用,治疗肝癌及消化道癌,亦收到了较好的疗效。这对深入研究与开发蛇毒新药是大有前途的     

眼镜蛇毒注射液生产工艺优化试验

采用正交试验法［１］,对影响眼镜蛇毒注射液生产质量与效率的主要因素和条件进行了考察。结果表明,在现有生产条件下,采用１００℃、４０ｍｉｎ加热变性粗毒,吸附助滤剂白陶土的终浓度为０．０５％,以及用板框压滤器粗滤药液时,成品的合格率和生产效率均最高     

眼镜蛇毒注射液对免疫功能的影响

本文报告眼镜蛇毒注射液可提高动物的免疫功能,使动物免疫器官重量增加,而可的松则使免疫器官减轻;可使动物的血清溶血素水平上升（Ｐ＜０．００１）;还可明显提高小鼠网状内皮细胞的吞噬功能（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．００１）;明显抑制小鼠的迟发型超敏反应。     

南蛇簕抗眼镜蛇毒的实验研究

目的探讨南蛇簕抗眼镜蛇毒的作用。方法抗眼镜蛇毒采用鲎试剂试验法。结果眼镜蛇毒与0.5EU/ml鲎试剂产生凝集反应的浓度在7.81μg/ml以上;南蛇簕提取液(含生药)为0.5g/ml浓度时可抗10倍量眼镜蛇毒的凝集反应。结论草药南蛇簕有较强的抗眼镜蛇毒作用。     

中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的动物实验研究

目的对中华眼镜蛇毒致局部组织损伤的6种治疗方法,通过动物实验进行疗效优劣比较,找出最佳治疗方法。方法用中华眼镜蛇毒制作动物家兔局部组织损伤模型,分别采用6种不同的治疗方法进行局部治疗,观察其疗效。结果6种治疗方法从优到劣依次是：抗蛇毒血清局部注射-糜蛋白酶局部注射-蛇伤药酒外敷-坏死组织早期切除-局部烧灼法-局部组织切开冲洗。结论中华眼镜蛇伤致局部组织损伤的治疗方法应首选抗蛇毒血清局部注射和糜蛋白酶局部注射,其次选用蛇伤药酒外敷．     

眼镜蛇毒因子的临床应用

眼镜蛇毒因子（cobra venom factor,CVF）系眼镜蛇毒中的一种蛋白质。近年来,CVF的理化性质、分子生物学特性、免疫学作用以及基因序列等已逐渐被揭示[1,2]。随着对CVF的研究越来越深入,其研究价值越来越广泛,特别是在临床应用方面,正日益引起广大学者的重视。本文对CVF的临床应用现状作一简要综述。     

眼镜蛇毒注射液对动物心血管系统神经系统及呼吸系统影响的研究

本文报告眼镜蛇毒注射液对动物的神经系统无不良影响;不影响猫、大鼠的血压;注射三种剂量后对家兔、猫、大鼠三种动物的心电图波形不产生影响,可使心律稍有降低,但在２．５小时后恢复正常;眼镜蛇毒注射液低剂量组对动物呼吸频率无不良影响,中高剂量组槿使呼吸频率销有下降,但在２．５小时后恢复正常。     

眼镜蛇毒抗风湿性关节炎的药理研究

本文报导了眼镜蛇毒抗风湿性关节炎实验研究,对大鼠佐剂性关节炎所致的足肿胀有明显的预防和治疗作用;对治疗鸡蛋清、甲醛所致的大鼠关节炎疗效显著,与阳性对照无显著差异;对抑制大鼠棉球肉芽肿的生长中剂量组治疗效果优于阳性对照,与对照组相比（Ｐ＜０．００１）;且有降低毛细血管通透性作用（Ｐ＜０．００１）。     

眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察并比较c-fos阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠脊髓中的表达。结果眼镜蛇毒组大鼠脊髓内c-fos阳性细胞明显多于生理盐水组和正常对照组。结论眼镜蛇毒对大鼠脊髓c-fos表达有上调作用。     

眼镜蛇毒对大鼠延髓nNOS表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对大鼠延髓nNOS表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较nNOS阳性神经元在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠延髓的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠延髓外侧网状核nNOS阳性神经元明显多于生理盐水组和正常对照组(P＜0.01),细胞平均灰度值明显降低(P＜0.01).结论 眼镜蛇毒对大鼠延髓nNOS表达有上调作用.     

眼镜蛇毒心脏毒素对人肺癌A549细胞株的遗传毒性研究

探讨蛇毒心脏毒素（ＣＴＸ）对人肺癌Ａ５４９细胞株的遗传毒性。方法应用眼镜蛇毒（ＣＴＸ）处理体外培养的人肺癌Ａ５４９细胞株,通过细胞生长速率、有丝分裂指数（ＭＩ）、细胞周期动力学指数（ＣＫＩ）、银染核仁组织区计数（ＡｇＮＯＲ）、姐妹染色单体交换（ＳＣＥ）频率、二倍体细胞比率的分析,观察ＣＴＸ所产生的遗传毒性作用。结果ＣＴＸ能明显抑制肺癌Ａ５４９细胞的ＤＮＡ复制过程和ｒＲＮＡ的合成,且随着浓度增大,癌细胞受抑制程度越大。用２ｍｇ／ＬＣＴＸ作用肺癌细胞后,ＳＣＥ频率比对照组明显下降（Ｐ＜０．０１）,但对照组和实验组出现的二倍体细胞比率差异不明显（Ｐ＞０．０５）。结论眼镜蛇毒ＣＴＸ可抑制肺癌细胞的生长恶性程度,但使其恶性表型逆转的作用不明显。     

蛇伤药酒抗眼镜蛇毒的药效学研究

目的探讨蛇伤药酒对眼镜蛇毒中毒的治疗效果。方法用中华眼镜蛇毒于家兔制作的病理模型并用蛇伤药酒于注毒局部外敷治疗,再进行中毒表现和血液指标等观察。结果与蛇毒组相比,药酒组局部和全身症状均较轻,死亡率较低;WBC、CK和CRP变化没有那么明显,PLT、PT和FBG水平基本没有变化。结论蛇伤药酒能减轻炎症反应,防止急性DIC发生和保护机体组织受损,故有较好的对抗眼镜蛇毒的作用。     

蝮蛇毒和眼镜蛇毒对全血化学发光的影响

目的研究蝮蛇毒和眼镜蛇毒对吞噬细胞的免疫抑制作用。方法以氢化可的松为阳性对照物,用化学发光法测定样品清除非细胞体系产生的活性氧,以及样品对酵母多糖诱导的全血化学发光的抑制作用。结果蝮蛇毒和眼镜蛇毒对非细胞体系产生的Ｏ·２和Ｈ２Ｏ２的清除作用都较弱;对全血化学发光有抑制作用,特别是酵母多糖起刺激作用之前加入蛇毒的抑制作用强于酵母多糖起作用之后加入蛇毒的抑制作用。这提示,这两种蛇毒使吞噬细胞的吞噬免疫功能下降,造成吞噬细胞的呼吸爆发减弱,导致活性氧产生不足,化学发光强度下降。眼镜蛇毒的这种免疫抑制作用比氢化可的松还强。结论蝮蛇毒和眼镜蛇毒具有氢化可的松样的免疫抑制作用,其中眼镜蛇毒可能具有作为临床免疫抑制剂使用的价值。     

鸡血清与卵黄中抗中华眼镜蛇毒IgY动态变化研究

目的探索特异性IgY的产生和变化规律。方法用眼镜蛇毒原毒免疫产蛋母鸡,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,小鼠体外中和实验检测其生物活性。第1次免疫40周后,眼镜蛇毒攻击已免疫母鸡,检测攻击前后鸡血清中抗体效价变化情况,未经眼镜蛇毒免疫的母鸡作阴性对照。结果经免疫后第7天蛋黄中即可检测到抗体,经多次加强免疫,40周时蛋黄中还能保持高效价的抗体,通过分离纯化,此抗体可保护实验小鼠免受4 LD50眼镜蛇毒的攻击;同时,鸡血清中也保留着较高效价的抗体,可中和4 LD50以上的眼镜蛇毒。结论用眼镜蛇毒免疫鸡,经多次加强免疫,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,初步检测此抗体可中和4 LD50的蛇毒。     

乙醇对中华眼镜蛇毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对眼镜蛇毒毒性的影响。方法将眼镜蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,分别于小白鼠皮下注射、口服,将致死量蛇毒皮下注射后的小白鼠立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果小白鼠经皮下注射致死量眼镜蛇毒后,在局部注射50％（或异蛇米酒）、75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用;口服100倍皮下注射致死量眼镜蛇毒未发现有毒性表现,口服经50％乙醇处理后的眼镜蛇毒（100倍皮下注射致死量）未增加小鼠死亡率。结论眼镜蛇毒体外经过乙醇处理后毒性有所下降。口服少量的眼镜蛇毒是安全的。眼镜蛇毒与乙醇混合后口服未见蛇毒毒性增加。     

眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回Nestin表达的影响

目的探讨眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回巢蛋白（Nestin）免疫反应阳性表达的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常对照组、生理盐水组、眼镜蛇毒组,每组8只。采用SABC免疫组织化学染色法观察齿状回Nestin的表达。结果与正常对照组、生理盐水组相比较,眼镜蛇毒组齿状回Nestin免疫反应阳性表达明显增强（P〈0.01）。结论眼镜蛇毒对成年大鼠齿状回Nestin的表达有上调作用,可能与促进内源性神经干细胞增殖有关。     

眼镜蛇毒及其组分C对大鼠实验性肝癌抗癌作用的病理学研究

目的 观察眼镜蛇毒及其组分Ｃ抗小鼠肝癌的病理学改变。方法 采用不同剂量眼镜蛇毒及其抗癌活性组分Ｃ与ＢＡＬＡ／ｃ小鼠腹水型肝癌细胞体外孵育,空白对照组用生理盐水与肝癌细胞孵育,然后取孵育液接种于小鼠前肢腋下,接种后第１０ｄ坏死,解剖取出瘤结,进行病理组织学研究。     

眼镜蛇毒及其组分C对小鼠实验性肝癌抗癌作用的病理学研究

目的　观察眼镜蛇毒及其组分 Ｃ 抗小鼠肝癌的病理学改变。 方法　采用不同剂量眼镜蛇毒及其抗癌活性组分 Ｃ 与 Ｂ Ａ Ｌ Ａ／ｃ 小鼠腹水型肝癌细胞体外孵育, 空白对照组用生理盐水与肝癌细胞孵育, 然后取孵育液接种于小鼠前肢腋下, 接种后第 １０ｄ 处死, 解剖取出瘤结, 进行病理组织学研究。 结果　空白对照组瘤结较大, 显微镜下见瘤细胞生长活跃、核大、核仁明显、核分裂多见, 而坏死灶少见, 且瘤细胞向周围浸润扩散; 治疗组瘤体较小, 瘤细胞固缩、核仁不明显、核分裂少见, 而坏死灶多见, 瘤细胞周围有纤维组织增生围绕, 限制了瘤细胞向周围蔓延浸润。 结论　眼镜蛇毒及其组分 Ｃ 对小鼠实验性肝癌的体外抗癌作用是明显的, 不同剂量及不同孵育时间的抗癌作用亦显著不同, 其中组分 Ｃ 对抗癌作用最强。     

眼镜蛇毒对成年大鼠下托Nestin表达的影响

目的 探讨眼镜蛇毒对成年大鼠下托巢蛋白（Nestin）阳性神经细胞表达的影响.方法 采用免疫组织化学方法,观察并比较Nestin阳性细胞在眼镜蛇毒组、生理盐水组、正常对照组大鼠下托的表达.结果 眼镜蛇毒组大鼠下托Nestin阳性神经细胞比生理盐水组、正常对照组表达明显增强（P〈0.01）.结论眼镜蛇毒对大鼠下托Nestin表达有上调作用.     

眼镜蛇毒神经生长因子抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡

目的:从眼镜蛇毒中分离纯化神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF),观察眼镜NGF对肝星状细胞HSC-T6增殖、凋亡活性的影响,进一步为蛇毒NGF在抗肝纤维化治疗提供依据。方法:采用shephadex G-75和CM Sepharose CL-6B二步柱色谱对眼镜蛇毒NGF进行纯化分离;PC12细胞测定各洗脱峰的活性,再用SDS-PAGE鉴定具有NGF活性洗脱峰的纯度和相对分子质量。实验设立空白对照和NGF处理组,分别作用于HSC-T6,培育相应时间,MTT检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞活力影响;HE染色、紫外激光显微镜与透射电镜观察HSC-T6细胞的形态学变化;TUNEL、流式细胞技术检测眼镜蛇毒NGF对HSC-T6细胞凋亡的影响。结果:眼镜蛇毒经PC-12细胞鉴定第Ⅵ峰具有NGF活性;SDS-PAGE检测为电泳纯,相对分子质量为22.3KD;NGF对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用(2μg/ml NGF的抑制率为49.66%±6.50%,P<0.05;6.25μg/ml NGF的抑制率为71.33%±1.53%,P<0.05);TUNEL法检测发现NGF干预组的凋亡率28.71%±1.59%(2ug/ml NGF)和34.4%±2.49%(5μg/mlNGF)明显高于对照组的15.85%±1.58%(P<0.05);流式细胞仪也有同样的发现,NGF干预组的凋亡率16.12%±3.02%(2 ug/mlNGF)和21.15%±3.31%(5μg/ml NGF)明显高于对照组的2.7%±1.55%(P<0.05)。结论:眼镜蛇毒NGF能抑制肝星状细胞HSC-T6增殖并诱导其凋亡。