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鼻咽癌Epstein—Barr病毒受体(EBVR/CR2)基因的病毒结合区的序列测定 总被引:2,自引:0,他引:2
Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBC受体(EBVR/CR2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Human embryonic nasopharynge 相似文献
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应用染色体原位杂交、PCR扩增、克隆及核苷酸序列分析等方法,分析了CNE1和CNE3细胞株中的潜伏感染膜蛋白(LMP1)基因。CNE1是来自我国东北的高分化鼻咽癌细胞株,CNE3是来自广西的低分化鼻咽癌细胞株。染色体原位杂交结果表明,CNE1细胞中LMP1基因存在于细胞核内,整合在第一号染色体上,CNE3中LMP1基因则随机存在于细胞核内及多条染色体上。用PCR方法分别从CNE1及CNE3中扩增得到了LMP1基因片段(外显子3),核苷酸序列分析证明,来自CNE1的LMP1与来自B95-8细胞的LMP1核苷酸序列同源性极高,达99.5%,而CNE3的LMP1基因与B95-8的LMP1基因同源性为93%。 相似文献
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EB病毒不能感染小鼠是因为小鼠CR2受体构像与人的不同,通过对小鼠CR2受体进行定点空变,然后将野生型和突变型小鼠CR2/1(MCR2/1)及人CR2(hCR2)用基因转移技术导入小鼠鼻咽上皮细胞系(TMNE)进行表达,观察转染阳性细胞是否具有结合EB病毒的能力,EBER-1杂交结果显示,只有转染hCR2和空变型MCR2(mtMCR2)的TMNE细胞可以感染EB病毒,但是前感染EB病毒的阳性率比后高的高得多。电镜结果也进一步证实EB病毒可以感染这两种细胞,这为进一步研究EB病毒进入细胞的机制及建立EB病毒相关的鼻咽癌动物模型奠定了良好的基础。 相似文献
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Epstein-Barr病毒潜伏膜蛋白(LMP)基因在哺乳动物传代细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术,把含有LMP基因(BNLF1)3个外显子(exon)开放阅读框架(ORF)的长1.80kbp的DNA片段,和能分解HygromycinB的含有SV40早期启动子和HgryomycinB磷酸转移酶全基因(长1025bp)的DNA片段(长1.60bp),同时重组于亚克隆载体pBluescriptSK(pBS)中,并使该重组质粒pBS-LMP-Hyg(长5767bp)在乳地鼠肾传代细胞(BHK)中获得表达。BHK细胞在经此重组质粒转染后,LMP阳性细胞是2%,在HygromycinB的持续压力下,LMP表达细胞率可达20%。3个月后,LMP表达细胞逐渐减少。5个月后,不能测到LMP表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹(Westemblot)实验证实,人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗LMP抗体。 相似文献
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EB病毒胸苷激酶基因的扩增 总被引:1,自引:0,他引:1
EB病毒胸苷激酶基因的扩增陈尚武,陈瑞君,黄迪,朱振宇,马涧泉(中山医科大学生化教研室,广州510089)(中山医科大学肿瘤研究所,广州510060)关键词Epstein-Barr病毒,胸苷激酶,基因,聚合酶链反应鼻咽癌(nasopharyngeal... 相似文献
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应用基因重组技术,把编码EB病毒早期蛋白的BCRF1基因重组于真核表达载体pSG5中,并使该基因在乳地鼠肾(BHK)传代细胞中获得良好表达,表达率为0.5%。血清学实验证实,鼻咽癌、类风湿性关节炎病人和正常人血清中均不同程度地含有IgG/BCRF1抗体,抗体阳性率分别为92%、86%和77%,几何平均滴度(GMT)分别是1:16.35、1:14.72和1:10.15。两组病人和正常人血清中IgA/BCRF1抗体阳性率和滴度之间有较大差别,它们的阳性率分别是74%、71%和12%,GMT分别是1:12.32,1:10.56和1:2.35。还证实,鼻咽癌和类风湿性关节炎病人血清中IgA/BCRF1和IgA/EA(早期抗原)抗体阳性率和滴度间有很好的相关性,此为首次报导。重组表达质粒pSG5-BCRF1的构建和表达为进一步研究BCRF1基因在病毒感染和肿瘤免疫中的作用创造了条件。本文就质粒的构建和3组血清中IgA/BCRF1、IgA/BCRF1、IgA/EA和IgG/BCRF1抗体间的关系和有关问题进行了讨论。 相似文献
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将切去3’端穿膜序列的EB病毒膜抗原(MA)基因,插入pSV2-dhfr质粒的SV40早期启动子下游,构建了真核表达载体pSV2-dhfrGPTR,使两个SV40早期启动子分别调控MA和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因。将该重组质粒转化CHO-dhfr细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达EBV-MA的克隆细胞系。westernblot分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为340kd和220kd。经过细Sepharose2B琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,2周后小鼠血清中出现明显的gp340/220特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的EBV-MA基因在CHO细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为EB病毒人用基因工程亚单位疫苗。 相似文献
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Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征 总被引:2,自引:0,他引:2
对EB病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,EB病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体(Episome)形式存在,而其基因转录有如下特征:(1)EB病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达EBNA-1,并且此基因转录产物由一个在BamHI-F区的启动子(Fp)驱动;(2)潜伏感染膜蛋白(Latent membrane protein,LMP)和末端蛋白(Terminal pr 相似文献
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将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94%;ELISA法阳性检出率为88%;而IE法阳性率为64%。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4%、3%及2%。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87%,ELISA法阳性检出率为77%。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。 相似文献
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EBV在多种肿瘤中存在,并在相关肿瘤的发病中起一定的作用。本文应用实时定量PCR方法检测鼻咽癌与健康对照全血EBV拷贝数。结果表明在73例鼻咽癌病人与83例正常对照中,NPC组中EBV阳性率为46.6%,对照组阳性率为13.3%。对照组平均EB病毒拷贝数为3.9×10~4拷贝/μgDNA,高于鼻咽癌组(1.7×10~5拷贝/μgDNA)。全血EBV的感染与鼻咽癌的发生相关,而裂解状态EBV在细胞转化过程中的作用可能更大。应用实时定量PCR进行全血EBV的检测可用于鼻咽癌的分子诊断。 相似文献
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应用Epstein-Barr病毒编码的小RNA-1(Epstein-Barr virus encoded small RNA-1,EBER-1)分子探针进行原位分子杂交,检测沈阳地区鼻咽癌的Epstein-Barr病毒存在状况及意义。结果发现:EBER-1杂交信号定位于鼻咽癌的癌细胞核,在正常的鼻咽粘膜上皮细胞、间质细胞、粘液腺及淋巴细胞均为阴性。在53例鼻咽癌病例中,37例阳性,阳性率为69.8%。EBER-1的阳性表达与鼻咽癌的分化程度呈负相关,与患的生存期未见明显关系。提示:应用EBER-1分子探针可进行回顾性研究:EB病毒的存在与鼻咽癌的分化程度成负相关。 相似文献
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为研究bcl-2/JH融合基因与鼻咽癌发生的关系,应用兰套式原位PCR技术对41例石蜡包埋鼻咽癌组织中bcl-2/JH融合基因进行检测。结果发现41例癌组织中bcl-2/JH融合基因阳性6例,阳性率为14.6%,bcl-2基因的两个热点断裂区mbr和mcr与免疫球蛋白重链JH形成的融合基因mbr-JH和mcr-JH各占50%。bcl-2/JH融合基因形成与癌组织学分级和转移间无明显关系(P>0.05)。本表明bcl-2/JH融合基因与鼻咽癌发生可能有一定关系,其中mbr-JH和mcr-JH同为bcl-2基因在鼻咽癌的两个重要基因异常改变形式。 相似文献
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用转染EBV DNA Bam HI K片段后稳定表达EBNA-1的K_4细胞作为靶细胞,检测50份鼻咽癌病人和38份健康对照者血清中的IgG/EBNA-1抗体;阳性率分别为100%和92%。前者的平均几何滴度为89.4,后者为18.3,前者约为后者的5倍。同一批被检血清经SPA吸收去除IgG竞争性抑制后,鼻咽癌病人的IgA/EBNA-1抗体阳性率达78%(GMT 20.9),健康人的IgA/EBNA-1抗体阳性率仅5.3%,效价亦很低(GMT 5.2)。表明IgA/EBNA-1抗体对鼻咽癌是比较特异的,可考虑作为鼻咽癌血清学诊断的指标之一。 相似文献