血涂片制作的几点体会

制作方法：血涂片Wright’s染色法。①采血、制血膜、水平放置血膜片晾干。②血膜片固定于甲醇2-3min,取出晾干。③用蜡笔在血膜片两端划一染色区,避免染色时染液外溢。④往血膜片滴加瑞氏染液（瑞氏染料0．1g＋甲醇60ml）,数十秒钟后,再加一倍于染液的蒸馏水,染色5-8min。     

大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的原代分离

目的建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cells typeⅡ,AECⅡ)分离、纯化、原代培养及鉴定的方法。方法用4.2U/ml的弹性蛋白酶通过气管插管注入肺泡内,消化分离AECⅡ。把细胞悬液接种到包被有大鼠IgG的塑料平皿中纯化细胞。用电镜、碱性磷酸酶显色法、改良巴氏染色法、单宁酸染色法、免疫组化染色法鉴定AECⅡ。结果细胞纯度达到90%以上,倒置显微镜下可见细胞呈岛屿状生长。电镜下可见细胞内有大量板层小体,包膜上有绒毛结构。碱性磷酸酶染色法(BCIP/NBT)可见胞浆内有蓝色颗粒。改良巴氏染色法、单宁酸染色法可见胞浆内有黑色颗粒。抗大鼠肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)免疫组化染色呈阳性反应。结论弹性蛋白酶作用温和,不损伤胞膜,分离所得细胞活力好;IgG免疫粘附纯化法操作简单,纯化效率高。电镜、BCIP/NBT、巴氏染色、单宁酸染色及免疫组化染色等鉴定方法稳定可靠,特异性高。     

根田鼠对食物单宁酸的解毒代价

在实验室条件下,测定了根田鼠对单宁酸的解毒代价。结果表明,在食物蛋白质为10％的条件下,摄食3％和6％单宁酸食物的根田鼠经尿液分泌的葡萄糖醛酸较对照组分别增加13．77％和38．80％;与对照组比较,在食物蛋白质为20％的条件下,摄食3％和6％单宁酸食物的实验个体尿液分泌的葡萄糖醛酸分别增加6．11％和22．25％。在食物蛋白质为10％时,用3％和6％单宁酸食物处理的个体,其尿液NH4^ —N含量较对照组个体分别增加51．69％和198．44％。在食物中蛋白质为20％时,摄食3％和6％单宁酸食物的试验个体,其尿液中的NH4^ —N含量分别较对照组高1．72％和74．19％。由此说明,单宁酸能显著增加根田鼠尿液葡萄糖醛酸分泌量,根田鼠尿液的NH4^ —N的含量随食物单宁酸增加而增高,从而增加动物机体对单宁酸的代谢价。     

X染色质标本制作与性别鉴定

X染色质和 Y染色质 ,可用来鉴定 1个人的性别。主要是对发病率有性别差异的遗传性疾病的预防有参考作用 ,如色盲 ,血友病等。1　材料与方法1.1　实验材料　正常女性口腔粘膜细胞1.2　实验器材　刻度离心管　牙签　载玻片　盖玻片　吸水纸　玻璃笔　离心机　吹风机　漱口杯　乳头吸管　染色缸　显微镜　水浴箱1.3　试剂　固定液 (无水乙醇 3:冰醋酸 1)　硫堇染液　 Giemsa染液　乳酸醋酸地衣红染液　磷酸缓冲液(p H6 .8)　结晶紫染液　 1mol/ L盐酸　 95 %酒精　蒸馏水　生理盐水　无水乙醇1.4　实验方法1.4 .1　方法 　 1)用口杯漱口后 ,…     

中华稻蝗血细胞染色方法的比较

通过Giemsa、Wright和Giemsa-Wright混合染色3种方法,对中华稻蝗Oxya chinensis(Thunberg)的血细胞进行了染色和血细胞的形态学观察,其结果是Giemsa染液染色时间较长,对细胞核染色效果较好,细胞质界限清晰,但对细胞质中的颗粒染色较差;Wright染液染色时间较短,对细胞核和细...     

介绍一种改良的油红O脂肪染色法

在日常病理诊断和科研工作中,显示组织内的脂肪常采用油红O进行染色。应用过程中发现,配制该染液所用的丙酮和异丙醇容易挥发,致使染液产生沉淀,染色时易在组织切片上留下红色的结晶,给染色结果的准确判断带来很大影响。为此,我们对染液配方进行了改进,收到较好效果。材料和方法1·标本人或动物的肝组织等,甲醛—钙液固定,冰冻切片,厚10μm。2·改良的油红O染色液油红O 0.5g,50%乙醇100m l。将油红O溶于乙醇内,且不断搅拌至完全溶解即可。配制好的染液置磨口瓶内保存备用。3·染色步骤①切片干燥后入50%乙醇稍洗;②油红O乙醇染液作用8m in…     

姐妹染色单体分化染色中IdUrd和BrdUrd的效果比较

自从Taylorli7用’H一放射自显影技术首次 发现了姐妹染色单体交换以来,已在许多动、植 物细胞里观察到姐妹染色单体交换。直到1974 年Korenberg^[2]等改进了Latt[^[3], Wolff^[4]等用 BrdUrd-33258 Hoechst荧光染料染色的方法, 发展了一种简易的显示姐妹染色单体分化染色 的方法（以下简称SCD法）,之后细胞遗传学实 验才得到了一个新的飞跃。     

核固红、中性红和伊红复染液在含铁血黄素染色中的应用比较

目的 本研究旨在比较核固红、中性红和伊红复染液在含铁血黄素染色中的染色效果,为实验室选择更适合常规操作使用的复染剂提供参考。方法 对确诊为含铁血黄素阳性的病理切片进行含铁血黄素染色,然后分别使用0.1%核固红、0.5%中性红和1%伊红进行复染。结果 使用0.1%核固红进行复染的切片显示出清晰的定位和较强的对比度。结论 0.1%核固红复染液在染色效果上表现更佳,有利于病理医生的观察,并对提高含铁血黄素阳性检出率具有实际价值。     

2种X染色质体标本片制备方法的探讨

探讨2种较好的制备人类X染色质体标本的方法。取正常女性口腔黏膜细胞涂片,分别采用硫堇染色和甲苯胺蓝染色,油镜下观察。硫堇染色法中,染液配制耗时长,容易受温度影响,染液易结晶,且染色标本片易出现硫堇结晶形成的杂质从而影响观察,染色标本片杂质较多,X染色质体检出率为20.3%~42.2%;甲苯胺蓝染色法中,染液配制简单,耗时短,且不易受环境温度影响,染色标本片镜下标本清晰,杂质少,X染色质体检出率为19.8%~43.6%。甲苯胺蓝染液染色观察X染色质体耗时短,成本低,操作简单,优于硫堇染色法。     

细菌鞭毛染色法的进一步改进

目前,细菌鞭毛染色存在三方面的困难:准备手续烦琐,染液配制费时且有效期短,染色效果不稳定。为此,我们探讨了改进方法。在两类染色方法中,目前多认为银盐法较碱性复红法优越,我们以前法为基础作了一些改进。     

氧化胁迫在硝基苯致小鼠神经毒性中的作用

目的:探讨氧化胁迫在硝基苯致小鼠神经毒性中的作用。方法:用不同剂量的硝基苯对小鼠进行灌胃染毒,每天1次,共30d;用碱性羟胺比色法测定小鼠脑乙酰胆碱酯酶活性,用试剂盒检测脑抗氧化功能。结果:试验组小鼠的中毒症状随着染毒剂量的增加和时间的延长而越来越明显;乙酰胆碱酯酶活性降低;与对照组相比,脑各项抗氧化指标均表现出显著或极显著差异。结论:氧化胁迫在硝基苯发挥神经毒性过程中起重要作用。     

紫红丝膜菌子实体色素的提取及其稳定性研究

采用单因素和正交试验,研究紫红丝膜菌子实体色素的提取条件及其稳定性。色素最佳提取条件为以80%乙醇60℃下提取2h,影响程度为乙醇体积分数>浸提时间>浸提温度。色素对自然光、紫外光不稳定;酸性条件下为紫红色,碱性为堇紫色;对Fe3+不稳定;对氧化剂不稳定,对还原剂稳定;对常用食品添加剂相对稳定;温度的变化对色素影响甚微。     

东北虎幼体消化系统蛋白水解酶的初步研究

蛋白水解酶在许多生命活动中是必需的物质(Vassalli and Pepper,1994)。蛋白质的酶解修饰(Xuet al.,1999)、细胞迁移、组织再生与修复、消化系统对蛋白质的消化等均与蛋白水解酶有关(Baimbridgeet al.,1992),且蛋白水解酶功能失调会导致许多疾病(Teichertet al.,1989)。东北虎(     

太子河河岸带土壤理化性质特征及其与环境因子的关系

根据太子河河岸带69个样点的土壤分层调查, 研究了太子河河岸带土壤特征、空间格局及与环境因子的关系。研究结果表明:垂直剖面自上而下土壤含水率、土壤孔隙率、总磷、有机质和总氮含量显著减少, 容重、pH和有效磷在层间差异不显著。根据土壤理化性质, 将样点分为2类, 一类主要分布在太子河上游及某些支流上游, 该类土壤呈弱酸性, 有机质和总氮含量高, 另一类主要分布在太子河中下游, 该类土壤呈弱碱性, 有机质和总氮含量较低。利用冗余分析(RDA)识别影响土壤性质的环境因子, 结果表明海拔、年降水、年均温和距离河口的距离是影响土壤空间差异的主导因子。     

玻璃负载TiO2膜光催化降解垃圾渗滤液的研究

研究了以SOL=GEL法制备的TiO₂膜光催化降解垃圾渗滤液的可行性,探讨了负载TiO₂膜的影响因素及TiO₂膜的催化活性,TiO₂膜的最佳煅烧温度为450℃.测定了反应时间、进水浓度、pH值、光源强度等因素对垃圾渗滤液的COD_Cr和色度去除率的影响.光强越大,催化效果越好,光照时间越长,催化效果越好;溶液的初始浓度越大,降解率越低;反应液的在偏酸、碱的条件下有利于光催化氧化反应的进行.在最佳的实验条件下,TiO₂膜的煅烧温度为450℃,溶液的pH值为3~4,垃圾渗滤液的初始COD_Cr为537mg·L^-1,光催化降解2h,COD_Cr和UV335的去除率分别为94.4%和96.9%.     

人工湿地黑臭水体处理系统微生物脱氮机理研究

以上海市老段浦I、II和北夏3座水平潜流人工湿地黑臭河道处理系统为研究对象,进行了水平潜流湿地处理黑臭河道氨氮的转化及脱氮机理的研究。研究表明,3座人工湿地的pH值均呈弱碱性,且沿湿地水流方向变化较小。溶解氧值在0.09—0.35mg/L范围内波动,氨氮沿湿地的流向呈递减的趋势,亚硝态氮及硝态氮浓度较低。在老段浦人工湿地的同一土样中,亚硝化细菌的数量远大于硝化细菌的数量,北夏人工湿地中,湿地前端的亚硝化细菌与硝化细菌的数量近似相等,但在湿地末端亚硝化细菌数量要远小于硝化细菌的数量。原位曝气抑制反硝化反应试验研究表明,3座人工湿地都发生了"新"的脱氮途径-短程硝化-反硝化反应,其中两座老段浦人工湿地50%的氮以短程硝化-反硝化反应去除。北夏人工湿地中约20%的氮以短程硝化反硝化的途径去除。       

Structure-Based Rational Design to Enhance the Solubility and Thermostability of a Bacterial Laccase Lac15

Bacterial laccases are ideal alternatives of fungal laccases for specific industrial applications due to specific characteristics such as alkalescence dependence and high chloride tolerance. However, some bacterial laccases presented as inclusion bodies when expressing in Escherichia coli and showed thermal instability. In this study, rational design was employed to enhance the solubility and the thermostablity of the bacterial laccase Lac15-His₆ based on the crystal structure obtained previously. After deletion of His-tag and residues^323–332, the obtained Lac15D was completely expressed in soluble form even at a higher temperature of 28°C, compared to only 50% of Lac15-His₆ expressed solubly at 16°C. It showed a two-time higher activity at temperatures lower than 35°C and a half-life increasing from 72 min to 150 min at 45°C. When used in chromogenic reactions, Lac15D showed constant activity toward dye precursors and their combinations under alkaline conditions, demonstrating its application potential in hair coloring biotechnology.     

碱性土壤微生物基因的克隆和多样性分析

从碱性土壤样品中直接抽提和分离宏基因组DNA, 首先构建了包含5 562个阳性克隆的碱性土壤16S rDNA文库, 随机抽取9个克隆测序后构建的系统进化树表明了碱性土壤环境微生物种群基因的多样性。纯化土壤宏基因组DNA后采用EcoRⅠ酶部分酶切处理, 我们又构建了以pGEM-3Zf(+)为载体的DNA部分文库AL01。AL01文库包含23650个克隆, 随机插入载体的外源DNA片段平均大小为3.2 kb左右, DNA文库的总容量为75.68 Mb。建库效率为从每克环境样品中获得6 000个左右的含随机外源DNA片段插入载体的克隆。采用酶活筛选策略, 我们从AL01文库中筛选到一个编号为pGXAA2011的阳性克隆携带有一个完整的碱性蛋白酶基因。蛋白酶活性检测其酶活作用最佳温度为40℃, 最适作用pH 值为9.5。另外, 我们还克隆和表达了一个新型b-葡萄糖苷酶基因unglu01, 该基因和现有数据库中的b-葡萄糖苷酶基因没有任何DNA或者氨基酸水平的同源性。将unglu01基因的ORF与表达载体pETBlue-2连接后导入宿主菌株Tuner(DE3)pLacI中, 该重组表达克隆在含柠檬酸高铁铵和七叶苷的LA平板上表现清晰的b-葡萄糖苷酶活性, SDS-PAGE电泳可以检测到29 kDa大小的目的蛋白。     

多种特殊染色法在骨关节炎组织形态学研究中的应用比较

目的探讨多种特殊染色法在骨关节组织中的染色规律及其在骨关节炎形态学研究中的应用价值。方法 6月龄健康新西兰大白兔20只,随机分为正常组和造模组各10只,根据改良Hulth法造模,6周后膝关节取材。对标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。分别采用HE、番红-固绿、AB-PAS、甲苯胺蓝、Van Gieson染色和Mallory染色,观察骨关节组织的形态学变化,并对几种染色方法进行比较。结果 HE染色显示关节一般组织形态结构,可见模型组关节软骨和软骨下骨发生骨性关节炎病理变化;番红-固绿染色法中软骨和软骨下骨的界限（黏合线）以及潮线显示清晰,软骨基质中糖胺聚糖含量减少,纤维成分增多;AB-PAS染色显示骨关节炎软骨基质糖胺聚糖尤其是酸性糖胺聚糖含量减少;甲苯胺蓝染色显示骨关节炎软骨的酸性糖胺聚糖减少;Van Gieson染色和Mallory染色可显示骨关节组织中的胶原纤维,但组织结构界限不够清晰。结论在骨性关节炎的组织形态学研究中,通过常规HE染色,结合番红-固绿染色法和AB-PAS染色法,能较客观全面地获得关节组织形态学相关信息。     

改良革兰染色法在显示石蜡切片真菌中的应用

目的建立真菌的病理切片改良革兰染色法。方法选取确诊真菌感染的组织蜡块,切若干空白片,通过苏木素-伊红染色（HE）、高碘酸-无色品红染色（PAS）、六胺银染色（GMS）、改良革兰染色后,比较改良革兰染色法的染色效果。结果改良革兰染色法的染色效果好,该法具有易操作、染色效果稳定等优点。结论改良革兰染色法能够清晰地显示出组织切片中的真菌,并且染色效果稳定,在检测组织中的真菌时可发挥重要的辅助诊断价值,具有广泛的应用前景。