人乳头瘤病毒16型亚基因DNA体外转化功能的细胞学研究

利用HZIP16和HZIP16K(见材料和方法)质粒,将人乳头瘤病毒16型(HPV-16)的全早期区基因及其开放读码框架(ORF)E6-E7分别转入ψ2细胞,所产生的重组病毒能诱导NIH3T3细胞发生转化。转化细胞具有恶性细胞的生物学和形态学特征,可在0.3％软琼脂中形成集落,可使裸鼠致瘤。Southern blot证明,HPV-16 E6-E7 ORFs序列以整合形式存在于转化细胞和裸鼠肿瘤细胞DNA中,表明HPV-16 DNA具有体外诱导NIH3T3细胞恶性转化的作用,E6-E7 ORFs是诱导细胞转化的关键基因。     

人乳头瘤病毒16型E7基因的克隆和表达

用分子克隆技术在大肠杆菌中表达HPV16 E7基因。用限制性内切酶DdeⅡ将含有大部分E7基因的191bp片段从HPV16基因组中切出。将此片段与含有色氨酸操纵子的启动子的表达载体pATH10连接成重组DNA,用以转化E.coli DH5α,并筛选出阳性重组子。还进行了限制酶酶切分析和蛋白质SDS-PAGE分析。表达的新蛋白质带的分子量与预期的分子量相符。我们认为表达的新蛋白质是TrpE和E7蛋白的融合蛋白。     

人乳头瘤病毒转化基因致癌的分子机制研究进展

人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）与宫颈癌及其他生殖道和肛周等恶性肿瘤有密切关系。本文综述了近年来ＨＰＶ１６转化基因在转录耕接、转录调控及致癌机制等方面的研究进展。     

人乳头瘤病毒16型E7变异株免疫原性研究

采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3．1-(by)E7]和E7标准株重组质粒【pcDNA3．1．(ys)-E7】,并将两种质粒分别皮下免疫Balb／c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和特异性淋巴细胞增殖反应。基因免疫后,ELISA法显示,HPVl6E7变异株和标准株均能诱导特异性抗E7抗体;MTTT比色法显示,E7标准株免疫组脾淋巴细胞在体外受到变异株E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应,变异株E7免疫组脾淋巴细胞经过同样处理后,出现非特异性淋巴细胞增殖反应。结果表明HPV16E7变异株能诱导特异性体液免疫应答而不能诱导特异性细胞免疫应答,HPVl6E7变异株无论在结构还是免疫原性上均与标准株有差异。由此推测,HPV16E7变异可能导致其逃逸机体自然感染或疫苗诱导的免疫应答。用基因免疫方法研究E7变异株免疫原性也为其它不能或难以进行体外培养的病毒变异研究提供借鉴。     

人乳头瘤病毒16型E7基因的体外扩增及其克隆和序列分析

人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因是转化基因。作者设计了一对ＰＣＲ引物,在引物的５′端分别引入ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切序列,以ＨＰＶ１６ＤＮＡ为模板成功地扩增出Ｅ７基因。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点将Ｅ７基因定向克隆入ｐＵＣ１８载体,经过ＰＣＲ、酶切分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交鉴定得到Ｅ７重组克隆ｐＨＳＥ７、ＤＮＡ序列分析表明所克隆的Ｅ７基因与已发表的ＨＰＶ１６Ｅ７基因序列完全一致且读框正确。     

人乳头瘤病毒研究的新进展

人乳头瘤病毒研究的新进展于修平,卞继峰（山东医科大学微生物学教研室,济南２５００１２）ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＨｕｍａｎＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｒｕｓｅｓ￥ＹｕＸｉｕｐｉｎｇ;ＢｉａｎＪｉｆｅｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌ...     

人乳头瘤病毒16型(新疆株)E7基因的克隆与突变研究

目的：克隆分析人乳头瘤病毒16型(HPV16)新疆株的研基因;并对E7基因进行突变改造,以比较野生型与突变型HPV16E7基因的功能。方法：根据从中国新疆维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取的DNA,进行PCR扩增获得HPV16E7基因,然后分别将其克隆到pMD18-T载体上进行DNA序列分析。根据HPV16E7基因的特点,分别设计点突变引物,用PCR的方法进行HPV16E7基因的点突变。结果：PCR检测显示扩增出HPV16(新疆株)E8基因;测序结果表明HPV16-XJ的研基因全长297bp,与德国标准株一致;利用设计突变位点的引物经PCR扩增,经序列测定后,分别得到了第70、172、271位碱基突变的HPV16E7基因;分别构建了野生型与单、双、三点突变的重组质粒pMD18-T-HPV16E7。结论：人乳头瘤病毒16型(新疆株)E7基因结构与德国标准株相同。HPV16E7基因多点突变的改造,为探索HPV16E7基因功能的变化和开展疫苗研究奠定了理论基础。     

人乳头瘤病毒16型E7变异株免疫原性研究

采用分子克隆技术,构建E7变异株重组质粒[pcDNA3.1-(by)E7]和E7标准株重组质粒[pcDNA3.1-(ys)-E7],并将两种质粒分别皮下免疫Balb/c小鼠,免疫后于不同时间提取小鼠血清和制备脾淋巴细胞悬液,分别用ELISA法和MTT比色法检测特异性抗体和特异性淋巴细胞增殖反应.基因免疫后,ELISA法显示,HPV16 E7变异株和标准株均能诱导特异性抗E7抗体;MTT比色法显示,E7标准株免疫组脾淋巴细胞在体外受到变异株E7蛋白的再次刺激后出现特异性淋巴细胞增殖反应,变异株E7免疫组脾淋巴细胞经过同样处理后,出现非特异性淋巴细胞增殖反应.结果表明HPV16E7变异株能诱导特异性体液免疫应答而不能诱导特异性细胞免疫应答,HPV16 E7变异株无论在结构还是免疫原性上均与标准株有差异.由此推测,HPV16E7变异可能导致其逃逸机体自然感染或疫苗诱导的免疫应答.用基因免疫方法研究E7变异株免疫原性也为其它不能或难以进行体外培养的病毒变异研究提供借鉴.     

人乳头瘤病毒E5基因

本对人乳头瘤病毒早期基因之一Ｅ５基因的致癌性的分子机理进行了综述,对Ｅ５蛋白与生长因子受体的相互作用,一些癌基因的反式激活作用及细胞缝隙在连接的损伤作用进行了讨论。     

人乳头瘤病毒致癌机制的研究进展

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位,每年约有50万宫颈癌新发病例,其中80％在发展中国家,我国每年约有新发病例13．15万,占世界新发病例的28．8％。近年来宫颈癌发病年龄趋向年轻化,从原来的40-50岁提前到35岁左右。人     

人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是公认的几种瘤病毒之一,与多种人类良、恶性肿瘤的发生密切相关。有效疫苗的研制,对控制ＨＰＶ感染和ＨＰＶ相关肿瘤的免疫治疗都有十分重要的意义。本文就近年来ＨＰＶ的肽疫苗、重组病毒（细菌）疫苗,病毒样颗粒（ＶＬＰ）疫苗以及ＤＮＡ疫苗的研究进展作一综述。     

人乳头瘤病毒分子生物学的研究进展

人乳头瘤病毒与人类多种肿瘤的发生有密切关系。由于病毒至今尚不能在体外培养,因此限制了对其致病机制和疫苗研究的进程。近年来利用基因工程技术表达了ＨＰＶ与致病和疫苗研制相关的基因。这些研究为探索ＨＰＶ在引发肿瘤过程中的作用,确定其抗原表位,诱导机体产生抗病毒攻击免疫反应方面提供了重要的科学依据。     

人乳头瘤病毒16型-L1真核表达质粒的构建和表达以及实验动物对裸DNA的免疫反应

Recombinant plasmid pcDNA-L1 was constructed by inserting HPV16-L1 gene fragment into eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1. pcDNA-L1 was transfected into mammalian cells Cos-7 and the expression of HPV16-L1 protein was testified by immunohistochemistry(IHC). Then the recombinant plasmid was directly injected into the quadriceps muscle of BALB/c mice. Antibodies against HPV16-L1 in the immunized mice were positively detected by immunodot and IHC at 28 and 41 days after the last immunization.     

人乳头瘤病毒致癌机制的研究进展

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位,每年约有50万宫颈癌新发病例,其中80%在发展中国家,我国每年约有新发病例13.15万,占世界新发病例的28.8%.近年来宫颈癌发病年龄趋向年轻化,从原来的40～50岁提前到35岁左右[1].     

人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的相关研究进展

人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多,发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ,ＶＬＰ）,并可用作预防性疫苗;基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文着重从近几年国际上ＨＰＶ１６预防性疫苗的基础性工作进展及预防性疫苗研究现状等方面及趋势作一综述。     

人乳头瘤病毒16型治疗性疫苗联合免疫效果研究

目的:探索联合免疫策略对人乳头瘤病毒16型(HPV16)治疗疫苗 L2E7E6和 rAdE7E6的免疫效果的影响.方法:用 L2E7E6融合蛋白和重组腺病毒 rAd5E7E6以不同的联合免疫程序分别免疫 C57BL/6小鼠,通过检测其诱发的体液免疫和细胞免疫反应,以及观察其在 HPV16小鼠治疗模型中的抑瘤效果,比较分析联合免疫对小鼠免疫反应及治疗肿瘤效果的影响.结果:异性联合免疫组均可检测到较高水平的体液免疫,该2组针对 E6、E7特异性的 T 细胞免疫反应与同性联合免疫2组相比明显提高,并在小鼠肿瘤治疗模型中能抑制肿瘤生长.结论:异性联合免疫策略可明显提高 HPV16 L2E7E6及 rAd5E7E6疫苗的 T 细胞免疫反应,且有效治疗 HPV16相关肿瘤,为 HPV16 L2E7E6及 rAd5E7E6疫苗的应用提供了实验基础.