我国非肠道传播非甲非乙型肝炎(丙型)病毒NS3蛋白的部份cDNA克隆及序列分析

用15ml非肠道传播非甲非乙型肝炎病人的混合血清提取病毒RNA,经逆转录和聚合酶链反应(PCR)扩增,获得583个核苷酸的非肠道传播非甲非乙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白的cDNA片段.该片段与美国报道的同片段HCV cDNA原型比较,核酸序列同源性为80.9％,氨基酸序列同源性为93.2％。与日本报道的同片段J1 HCV cDNA相比较,核酸序列和氨基酸序列的同源性分别为92.6％和95.2％。用α-~(32)P同位素标记该片段,与HCV病人血清出现杂交反应。     

非甲非乙型肝炎和肝细胞癌

<正> 目前,非甲非乙型肝炎病毒虽未确定,但其携带者的存在已无疑。有关非甲非乙型肝炎病毒与慢性肝炎、肝硬变和肝细胞癌的研究甚多。作者对乙型肝细胞癌和非甲非乙型肝细胞癌的临床病理现象进行探讨、比较。1974～1978年收治肝细胞癌患者共163例,将其中无输血史、HBsAg~+、抗-HB_c~+的病例作为乙型肝细胞癌(B组),将有输血史、HBsAg~-、抗-HBC~-的病例作为非甲非乙型肝细胞癌(非B组)。结果分析如下。     

非甲非乙型肝炎和静注pH4.2免疫球蛋白的安全性

<正> 十九世纪四十年代中末期Cohn等人开创了免疫球蛋白疗法的新时代,发展了从人血浆分离提纯各蛋白组分的技术。此法今天仍广泛使用着。较早的免疫球蛋白浓缩物全是肌肉注射,因为静脉输注有较大的副作用而不被人们接受。1979年报导了一种安全、成功地用     

肠道传播非甲非乙肝炎在恒河猴中的传代研究

用ET-NANBH感染的两只猴(R5和R6)含病毒颗粒的粪便悬液和肝组织悬液分别接种7只和4只恒河猴,分别有5只猴和4只猴在攻毒后20—49天内ALT开始升高,持续时间为7—10天,肝组织学的特征性改变为肝细胞的嗜酸性变和嗜酸小体的形成。在猴ALT升高前2—3天和升高后一周内均检查到大量的27—34nm的病毒样颗粒,这些颗粒只与ET-NANBH病人血清、黑猩猩和猴感染后急性期和恢复期血清发生特异性聚集。在猴感染后血清中未检出抗-HAV、抗-HAV-IgM、HBsAg和抗-HBe-IgM。结果提示:恒河猴是研究ET-NANBH较适宜的动物模型;病人和猴粪便中的27—34nm的病毒样颗粒是ET-NANBH的病原因子。     

非甲非乙型肝炎:黑猩猩和人血清病毒样粒子的检测

<正>目前,NANB肝炎的病原体仍不清楚。已有报道NANB肝炎成功地转染给黑猩猩,但没有描述病原体的特征,电镜和血清学试验也未检查到病毒样粒子(VLP)。最近,据宣布:加州福尼亚生物技术公司Chiron已分离到NANB肝炎病毒,但未作详细报道。本篇通迅报道了在具有NANB肝炎的黑猩猩和人血清中VLP的检测情况。 血清样品来自实验性感染NANB肝炎的六只黑猩猩。用输血后感染肝炎的一个病例所分离出的NANB肝炎病原体F株接种动物后,均发生NANB肝炎所特有的肝细胞管状结构持续阳性三年多的慢性肝炎;并且已发现来自一只黑猩猩的少量慢性期血清(接种后49—51周)在受体黑猩猩中引起肝炎,这显示肝细胞管状结构持续阳性是NANB肝炎病毒携带者的重要标志。在人的病例中,10例在临床     

丙型肝炎病毒的非结构蛋白3抑制剂

丙型肝炎严重威胁人类健康,非结构蛋白3（NS3）在丙型肝炎病毒（HCV）多聚蛋白水解过程中起重要作用,被公认为治疗丙型肝炎的有效药物靶标。该文介绍目前国内外有关NS3蛋白酶抑制剂（包括寡肽类抑制剂和非肽小分子抑制剂）的研究进展。     

H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白（NS1）基因的克隆与表达

The nostructural protein (NS1) encoded by gene 8 of the Influenza virus is present in cells infected with Influenza virus. In this study, NS1 protein gene of the Chicken influenza virus A/chicken/Beijing/2/97 (H9N2) strain was amplified by PCR. The fragment contains EcoR Ⅰ and Xho Ⅰ restriction enzyme sites at the ends. The amplified product was cloned into the expression vector pET-30(c). Recombinant plasmid pET/NS 1 was transformed into E.coli BL21 (DE3) competent cells and induced with 0.4 mmol/L IPTG the target protein was produced, the molecular weight of the expressed protein was 30 kDa as expected. Western-blot test indicated that the expressed protein can react with the NS 1 monoclonal antibody of the influenza virus. This study laid an important foundation for H9N2 subtype avian influenza surveillance in China.     

丙型肝炎病毒非结构3区基因片段的克隆表达及抗原纯化鉴定

通过逆转录ＰＣＲ技术,从中国江苏省丙型肝炎病人血清中扩增克隆了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的非结构３区的部分基因片段（Ｃ３３）。ＤＮＡ序列分析证实,该片段全长８４２ｂｐ。在合成的一对逆转录ＰＣＲ引物上,上游引物增加了ＮｃｏⅠ酶切位点（内含起始密码子ＡＴＧ）,下游引物上增加了ＳａｌⅠ酶切位点及终止密码子ＴＡＡ,将克隆的Ｃ３３基因片段克隆至表达载体ｐＢＶ２２１内,获得了表达Ｃ３３抗原的工程菌,表达Ｃ３３抗原分子过为３０ｋＤ,经尿素裂解纯化、分子筛分离纯化及复性后进行离子交换和反相亲和层析纯化,获得的重组蛋白经ＥＬＢＡ和免疫印迹等证实有较好的抗原性和特异性。     

蜱传脑炎病毒非结构蛋白NS2B-NS3与NS5的研究进展

蜱传脑炎病毒是引起严重的中枢神经系统疾病蜱传脑炎的病原体,每年在欧洲、俄罗斯远东地区、日本和中国北部报道的蜱传脑炎病例数约为10000-12000例,且在我国和多个欧洲国家的发病率逐渐增高,正成为人类健康的潜在危害。主动免疫是预防蜱传脑炎的有效措施,包括我国在内的多个国家已研制出安全性较高的疫苗,但在我国流行省份的疫苗接种较为有限,特异性抗病毒药物的研发或许是治疗蜱传脑炎病毒感染的研究方向之一。蜱传脑炎病毒非结构蛋白NS2B-NS3与NS5因为在病毒基因组复制、加帽和宿主免疫调节中的重要作用,成为关键的抗病毒药物研发靶点。本文综述了蜱传脑炎病毒非结构蛋白NS2B-NS3与NS5的三维结构和抑制剂研发工作,为深入探究该病毒感染的分子机制和抗病毒药物研发提供参考。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus , FMDV)非结构蛋白(NSP)-3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5' 端和3' 端分别加入含BamH I和Hind III限制性酶切位点序列.以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α.提取重组载体pT-3ABC,经BamH I/Hind III双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP-3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应.ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断.     

口蹄疫病毒非结构蛋白3abc基因的克隆与表达

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白(NSP)—3ABC可用于注苗与感染动物的鉴别诊断,合成该基因的PCR引物,并在引物5’端和3'端分别加入含BamHⅠ和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV毒株基因组RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增3abc基因,得到的基因片段与T载体连接,转化DH5α。提取重组载体pT-3ABC,经BamHⅠ/HindⅢ双酶切后与载体pET32a连接,转化宿主菌BL21(DE3)plysS,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS—PAGE及Western Blotting检测和鉴定结果表明,在大肠杆菌中成功表达了NSP—3ABC蛋白,分子量约56kDa,且该表达产物可与FMDV感染的动物血清产生免疫反应。ELISA试验结果显示,表达蛋白可用于FMDV注苗与感染动物的鉴别诊断。     

H9N2亚型禽流感病毒非结构蛋白(NS1)基因的克隆与表达

由于H9N2亚型禽流感对我国的养鸡业已造成了很大的损失,因而在我国许多养鸡场不得不使用H9N2亚型禽流感灭活苗[1],但由于灭活苗的使用,而增加了H9N2亚型禽流感的监测难度.因此,建立一种能区别自然感染鸡和疫苗免疫鸡的鉴别诊断方法已被提到日程上来.     

丙型肝炎病毒中国株非结构蛋白2~3部分基因cDNA克隆序列分析及表达

丙型肝炎病毒 (ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ)是输血后和许多社区获得性非甲非乙肝炎的主要致病因子。ＨＣＶ为单股正链ＲＮＡ病毒 ,其基因组长约 9.5Ｋｂ ,编码区含一个大开放读码框架 ,编码 30 1 0 30 33氨基酸残基的多蛋白前体 ,经宿主蛋白酶和病毒蛋白酶加工成具有生物学功能的成熟蛋白。ＨＣＶ各区域的分布顺序是 :Ｃ Ｅ1 Ｅ2 ｐ7 ＮＳ2 ＮＳ3 ＮＳ4Ａ ＮＳ4Ｂ ＮＳ5Ａ ＮＳ5Ｂ[1] 。本文我们应用ＲＴ ＰＣＲ方法从ＨＣＶ患者血清中扩增编码病毒蛋白酶的非结构蛋白 (ＮＳ2 ＮＳ3)部分基因 ,对其核苷酸序列进行了分析 ,…     

丙型肝炎病毒中国株非结构蛋白2～3部分基因cDNA克隆序列分析及表达

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)是输血后和许多社区获得性非甲非乙肝炎的主要致 病因子.HCV为单股正链RNA病毒,其基因组长约9.5Kb,编码区含一个大开放读码框架, 编码3010-3033氨基酸残基的多蛋白前体,经宿主蛋白酶和病毒蛋白酶加工成具有生物 学功 能的成熟蛋白.HCV各区域的分布顺序是:C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A- NS5 B[1].本文我们应用RT-PCR方法从HCV患者血清中扩增编码病毒蛋白酶的非结构蛋 白(NS2-NS3)部分基因,对其核苷酸序列进行了分析,并在大肠杆菌中获得了良好表达.     

流行性乙型脑炎病毒GSS株prM、E和NS1蛋白基因的克隆及在非复制型痘苗病毒中的表达

克隆流行性乙型脑炎(乙脑)病毒野毒(JEV)GSS株前膜蛋白信号序列、前膜蛋白(prM)、包膜蛋白(E)、非结构蛋白-1(NSl)和非结构蛋白NS2a的编码基因,并与非复制型痘苗病毒载体NTV进行同源重组,构建了乙脑病毒非复制型重组痘苗病毒疫苗株NTVA(E／L)JEV。通过：PCR和Southern blot检测证明,在非复制型痘苗病毒中有乙暗病毒prM信号序列、prM、E、NS1和NS2a基因的插入：Western blot检测证明,重组病毒可以在细胞内成功地表达prM、E和NSl蛋白,并可将prM、E和NSl蛋白分泌到细胞培养上清中;免疫荧光检测证明,E和NSl蛋白主要分布在细胞膜上。电镜下可见分泌到细胞外的病毒样颗粒。     

登革2型病毒非结构蛋白NS4B的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

目的：原核表达、纯化登革2型病毒非结构蛋白NS4B,并制备其多克隆抗体,以研究其结构与功能。方法：扩增编码登革2型病毒NS4B的24-238位氨基酸残基的基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达;采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中回收融合蛋白;用纯化后的融合蛋白免疫BALB／c鼠制备多克隆抗体,采用间接免疫荧光法检测抗体效价。结果：原核表达了NS4B-GST融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,抗体效价为1：800。结论：登革2型病毒NS4B的24-238位氨基酸残基可诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,这为研究NS4B的结构与功能奠定了基础。     

文山松毛虫质型多角体病毒（DpwCPV）NS5蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

通过对文山松毛虫质型多角体病毒(Dendrolimus punctatus Wenshanensis cytoplasmic polyhedrosis virus, DpwCPV)的增殖、纯化,获得一株单一类型的质型多角体病毒。提纯的病毒粒子经SDS热酚法抽提得到基因组dSRNA,使用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离并回收纯化第九片段S9。S9 RNA双链经高温变性,逆转录合成cDNA双链。根据DpwCPV与BmCPV1的同源性设计引物,将S9进行PCR扩增后,克隆到PMD18T载体上。最终获得一个977bp的序列,其中包含一个963bp的开放阅读框(ORF)。推测DpwCPV S9基因编码一个320个氨基酸的蛋白,分子量约为35560。     

丹参非特异性脂质转移蛋白基因（SmLTP1）的克隆及其表达分析

对丹参EST序列进行Blast分析,获得一个新的非特异性脂质转移蛋白基因,命名为SmLTP1（GenBank注册号为EF187461）。该基因cDNA全长593bp,包含一个长为357bp的开放读码框,编码118个氨基酸。生物信息学结构分析表明,该蛋白具有植物nsLTP的典型结构,即4对二硫键,4个a-螺旋,1个可结合和容纳脂肪酸分子的类似口袋状的疏水结构。实时荧光定量PCR分析结果表明,SmLTP1基因在丹参不同组织器官中差异表达,其表达受病原菌和茉莉酸甲酯的诱导,显示SmLTP1基因在植物防御反应中发挥作用。