异位（过）表达PGRN抑制IL-1β引起的髓核细胞损伤

炎症因子IL-1β是引起髓核细胞功能异常的关键因素之一。颗粒体蛋白原（progranulin,PGRN）是一种多功能生长因子,在组织修复、炎症反应等过程中发挥重要作用,但其在髓核细胞中的作用尚不清楚。本研究以IL-1β诱导的髓核细胞炎性损伤模型为研究对象,探讨PGRN对IL 1β诱导的髓核细胞损伤的保护作用及其机制。基因转染结合MTT方法证明,与IL-1β处理的细胞比较,过表达PGRN可逆转IL-1β引起的原代培养的髓核细胞生长抑制,促进细胞增殖。TUNEL技术和流式细胞分析显示,PGRN抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡。Western印迹和RT-qPCR方法揭示,与IL-1β处理的细胞相比,过表达PGRN显著上调聚蛋白聚糖（aggrecan）和II型胶原（collagen type II）的蛋白质表达,但下调基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、分解素-金属蛋白酶ADAMTS-5的表达,同时抑制IL-1β诱导的炎性因子IL-6、IL-8和TNF-α的表达,说明PGRN可缓解IL-1β引起的炎性反应,并减少细胞外基质（ECM）相关蛋白质的降解。此外,过表达PGRN还可降低p65、p-IkB a和β-catenin的蛋白质表达水平,提示PGRN可抑制IL-1β下游TNF-α介导的NF-κB信号途径及β-catenin途径。总之,上述结果提示,过表达PGRN可通过抑制IL-1β诱导的炎性反应、髓核细胞凋亡及基质代谢紊乱,缓解IL-1β诱导的髓核细胞损伤;PGRN的这种抗炎、抗基质降解作用可能与PGRN参与调控NF-κB和β-catenin信号途径有关。     

前交叉韧带损伤后软骨退变和骨性关节炎发生的分子变化

为了探讨凋亡酶的半胱天冬酶3 (Caspase 3)、促炎细胞因子interleukin-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶降解酶-13 (MMP-13)的表达水平,来说明前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)损伤后软骨细胞的软骨变性和骨性关节炎的发展情况,本研究通过探讨软骨降解程度与损伤时间或患者年龄之间的关系,应用实时聚合酶链反应检测正常人(n=5)和ACL破裂患者(n=42)软骨细胞中IL-1β、IL-6和MMP-13 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测MMP-13和Caspase 3蛋白表达水平。通过趋势分析和相关系数分析,分别得出MMP-13、IL-6、IL-1β基因表达与软骨缺损分级,MMP-13、IL-6、IL-1β基因表达与患者年龄的关系。结果表明,软骨降解程度与损伤时间之间存在相关性。与正常相比,ACL损伤的软骨细胞中,MMP-13、IL-6、IL-1β和Caspase 3的表达水平有显著上调。在ACL缺陷患者中,与ACL缺陷未到18个月的患者相比,在超过18个月的患者中发现MMP-13明显上调,而超过10月的患者软骨细胞中IL-6和IL-1β表达水平要高于未到10个月的ACL缺陷患者。同时,IL-1β、IL-6和MMP-13表达水平和软骨损伤或病人的年龄之间没有关联。研究发现,软骨细胞凋亡、炎症和分解代谢因子水平的升高与损伤时间有关,并可能导致ACL损伤后软骨退变和骨性关节炎的发生。     

Hsp72对类风湿关节炎滑膜细胞IL-6、IL-8表达及NFκ-B活化的影响

目的:探讨热休克蛋白(Hsp)72对类风湿关节炎患者滑膜细胞IL-6、IL-8表达的影响,从NFκ-B信号通路活化的角度阐明其作用机制。方法:原代培养类风湿关节炎患者的滑膜细胞;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清中IL-6和IL-8的含量;采用Western blot检测滑膜细胞NFκ-B和ΙκBα蛋白的表达变化;采用免疫荧光技术检测NFκ-B核移位的变化。结果:Hsp72抑制TNFα-所诱导的IL-6和IL-8的生成;Hsp72抑制TNFα-所诱导NFκ-B在核内的表达和移位;Hsp72抑制TNFα-所诱导ΙκBα蛋白降解。结论:Hsp72可能通过抑制滑膜细胞IL-6、IL-8表达及抑制NF-κB信号通路活化而对类风湿关节炎发挥抗炎作用。     

松节方提取物对炎症动物模型的抗炎作用及机制探讨

该文旨在评价松节方提取物(SJF)的抗炎镇痛作用,尤其是对关节炎的抑制作用,并初步探讨其作用机制。采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀模型、醋酸诱导的小鼠疼痛模型、鸡II型胶原(CCII)诱导的大鼠关节炎模型,观察松节方提取物的体内抗炎镇痛活性和抗关节炎的作用,检测大鼠血清TNF-α、INF-γ、IL-10、IL-1β含量,观察大鼠踝关节组织病理学变化。结果表明松节方提取物可减轻上述模型的炎症及疼痛症状,抑制CCII致关节炎大鼠滑膜组织炎性细胞浸润和滑膜组织增生,能显著降低关节炎大鼠血清TNF-α、INF-γ、IL-1β含量,升高血清IL-10含量。说明松节方提取物具有较好的抗炎镇痛作用,可明显抑制CCII所致大鼠关节炎,降低其关节组织损伤程度,其机制可能与调节炎症因子表达相关。     

白细胞介素1β抑制心肌成纤维细胞胶原合成并促进其分解

本文应用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine, 3H-TdR)掺入法及3H-脯氨酸(3H-proline, 3H-Pro)掺入法观察白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)对Spague-Dawley乳鼠心肌成纤维细胞DNA及胶原合成的影响,并用明胶酶谱法和Western blot检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs) MMP-2、 MMP-9活性及MMP-2和MMP-9蛋白表达,用RT-PCR检测MMP-2、 MMP-9的mRNA表达.结果显示:(1)0.1、1、10、100ng/mL的IL-1β作用于细胞24h后,各组3H-TdR掺入量明显较对照组低(P<0.05, P<0.01),同时3H-Pro掺入量明显降低(P<0.05, P<0.01);而0.01ng/mL的IL-1β作用于细胞后,对3H-TdR掺入量和3H-Pro掺入量无明显影响.(2)不同剂量(0.01～100ng/mL)的IL-1β均刺激MMP-2和MMP-9活性升高,并呈剂量依赖性.IL-1β增加MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05, P<0.01).(3)IL-1β(0.01～100ng/mL)刺激MMP-2和MMP-9 mRNA表达升高(P<0.05, P<0.01).以上结果表明,IL-1β通过减少心肌成纤维细胞的细胞分裂来降低胶原的合成,同时促进MMP-2和MMP-9的转录及转录后的表达来促进胶原的分解,提示其在心肌重塑过程中起一定作用.     

膝骨关节炎患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF的表达及与病情进展的关系

目的:研究膝骨关节炎(KOA)患者关节液和滑膜中白细胞介素-6(IL-6)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与病情进展的关系。方法:选择自2017年1月到2017年6月在我院就诊的KOA患者30例进行研究,其中维吾尔族和汉族各15例,分别记为维吾尔族组和汉族组。另选同期在我院接受骨折修复和截肢等手术治疗的10例无骨关节炎的患者作为对照组。对比各组IL-6、MMP-13及VEGF水平以及关节软骨中水通道蛋白3(AQP3)阳性表达率,对比维吾尔族组和汉族组软骨不同区域内AQP3阳性表达,分析KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展的相关性。结果:维吾尔族组和汉族组关节液和滑膜中IL-6、MMP-13及VEGF水平均分别高于对照组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组关节软骨中AQP3阳性表达率均分别明显高于对照组,且维吾尔族组明显高于汉族组,差异均有统计学意义(均P0.05)。维吾尔族组和汉族组浅层软骨磨损严重区的AQP3阳性表达率明显高于软骨深层区和软骨下骨区,差异均有统计学意义(均P0.05)。Spearman相关性分析显示,KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF及关节软骨中AQP3的阳性表达与病情进展均呈正相关(均P0.05)。结论:KOA患者关节液和滑膜中IL-6、MMP-13、VEGF水平及关节软骨中AQP3阳性表达均异常升高,以上指标参与了病情的进展,且AQP3阳性表达高低还与民族有关,临床上可考虑将这些指标作为监测KOA患者病情的靶点。     

应用原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系建立体外骨关节炎模型的效果评价

目的通过比较白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)处理对原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力、炎症因子与炎症通路表达水平变化的影响,为骨关节炎体外研究用细胞提供多重选择。方法免疫细胞化学法与甲苯胺蓝染色分别检测细胞中Ⅱ型胶原与蛋白多糖,鉴定所培养的原代细胞是否为软骨细胞。CCK-8法检测IL-1β(10ng/ml)处理24h、48h、72h对原代软骨细胞增殖活力的影响,IL-1β(1、10、20、40ng/ml)处理24h对SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力的影响。IL-1β(10ng/ml)分别处理原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系细胞24h后,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)与基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达水平。Real-time PCR法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)mRNA表达水平。结果所培养的原代细胞为原代软骨细胞。IL-1β(10ng/ml)处理可显著抑制原代软骨细胞增殖活力,但IL-1β(1、10、20、40 ng/ml)处理对SW1353软骨肉瘤细胞系增殖活力无明显影响。IL-1β(10ng/ml)处理可使IL-6、MMP-13表达水平及NF-κB mRNA的表达量均显著增加。结论IL-1β作用下原代软骨细胞与SW1353软骨肉瘤细胞系均可表现出骨关节炎样炎症反应,二者均可用于骨关节炎的体外实验研究。     

骨性关节炎相关基因MCF2L可增加滑膜成纤维细胞凋亡及诱导炎症反应

MCF2L基因突变在骨关节炎的发生与发展过程中扮演重要作用,本研究使用ENSEMBL及COMSIC数据库筛选MCF2L突变位点,构建质粒及腺病毒载体;将小鼠原代滑膜成纤维细胞分为正常对照组,野生型重组腺病毒干预的MCF2L过表达组和突变型重组腺病毒的突变组,检测细胞上清中IL-lβ、MMP-13、PGE2水平及细胞凋亡。通过数据库检测分析发现可将第11位精氨酸作为突变位点;p Yr-ads-4-MCF2L重组质粒及突变型和野生型重组腺病毒包装成功;突变组MCF2L RNA表达是对照组的1.92倍,过表达组是对照组的1.85倍;突变组及过表达组MCF2L蛋白表达水平均显著高于对照组;过表达组上清中PGE2、MMP-13、IL-lβ水平显著低于对照组(p0.05),突变组上清中PGE2、MMP-13、IL-lβ水平显著高于对照组(p0.05),且突变组上清中PGE2、MMP-13、IL-lβ水平明显高于过表达组,且差异存在统计学意义(p0.05);对照组及过表达组细胞凋亡不明显,在1%至10%之间;突变组细胞凋亡率高于对照组及过表达组,凋亡率达60%。滑膜成纤维细胞使用MCF2L基因突变重组腺病毒感染后,PGE2、MMP-13、IL-lβ水平均明显提高,细胞凋亡率明显加大。本研究对MCF2L的单核苷酸多态性对滑膜成纤维细胞的炎症因子及凋亡活性的影响进行分析,探讨骨性关节炎发病过程中MCF2L发挥的作用,探讨MCF2L基因与骨关炎的关系,为临床应用提供依据。     

TAK1基因沉默对TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达的影响

目的：观察转化生长因子β激活激酶1（TAK1）基因沉默对肿瘤坏死因子a （TNF-a）诱导的滑膜细胞中促炎介质白介素-6（IL-6）和白介素-8（IL-8）表达的影响,以探讨TAK1在类风湿关节炎（RA）发病中的作用。方法：采取脂质体转染方法将TAK1特异性的小干扰RNA （siRNA）和阴性对照RNA （scRNA）导入类风湿关节炎的滑膜成纤维细胞株MH7A细胞,然后分别用20 ng/ml TNF-a刺激后,检测细胞内IL-6、IL-8 mRNA的表达和培养上清中IL-6和IL-8分泌情况以及p38、ERK、JNK、p65磷酸化的水平和抑制性蛋白IκBα的变化情况。结果：siRNA-TAK1转染72 h后滑膜细胞中TAK mRNA和蛋白表达的平均抑制率分别为75%和55%。siRNA-TAK1转染下调TNF-a诱导状态下IL-6和IL-8的表达,并能抑制p38、JNK、p65磷酸化和增加IκBα水平。结论：TAK1基因沉默能抑制TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达,可能与其抑制JNK和p38MAPK的活化及NF-κB的活化有关。     

苦参碱对IL-1β诱导的小鼠体外骨关节炎的作用研究

目的探讨苦参碱对IL-1β诱导小鼠软骨细胞退行性变修复作用。方法提取3～5 dC 57乳鼠软骨细胞,分为空白对照组,骨关节炎(OA)组,骨关节炎加苦参碱(OA+Mat)组,分别处理24 h后,行HE染色,观察各组小鼠的细胞形态及数量,并提取各组小鼠的总RNA,RT-qPCR反应检测炎症及软骨标志基因的表达。结果与OA组相比,OA+Mat组细胞形态与空白对照组一样良好,细胞数量与空白对照组相近,且比OA组多,炎症及软骨标志基因的表达均比OA组高(P0.05)。结论苦参碱能降低白介素1诱导的小鼠体外骨关节炎症标志基因的表达,对小鼠关节炎有治疗作用,且能上调关节炎细胞中软骨标志基因COL2a1的表达。     

齐墩果酸抑制肿瘤坏死因子-α诱导的成纤维细胞样滑膜细胞炎症因子表达及其机制研究

探讨齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成纤维细胞样滑膜细胞的炎症因子表达的影响及其机制。首先复苏培养人成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),通过RT-PCR检测细胞IL-6及IL-1βmRNA表达,采用Western blot方法检测p38MAPK及NF-κB蛋白表达变化,通过ELISA法检测细胞上清液中IL-6及IL-1β浓度。与对照组比较,TNF-α明显诱导FLS细胞IL-6及IL-1βmRNA的表达及上清液中IL-6及IL-1β的分泌(P0.05),同时磷酸化p38蛋白和核NF-κB明显增加(P0.05),且p38MAPK阻断剂SB203580能抑制TNF-α诱导的核NF-κB增加。OA呈浓度依赖性抑制TNF-α诱导的FLS细胞p38蛋白磷酸化和核NF-κB增加(P0.05)。且OA、p38MAPK通路抑制剂SB203580或NF-κB阻断剂BAY 11-7082均能抑制TNF-α诱导的IL-6及IL-1β分泌增加(P0.05)。综上所述,OA能抑制TNF-α诱导的FLS细胞炎症因子IL-6及IL-1β的产生,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。     

MMP-13在皮肤相关疾病中的研究进展

基质金属蛋白酶(MMPs)是依赖锌的蛋白水解金属酶。MMP-13隶属于胶原酶亚群,在细胞外基质循环、癌细胞迁移、细胞生长、炎症、血管生成等方面发挥重要作用,它能降解胶原、明胶和聚集蛋白聚糖。在光老化中MMP-13的表达可受MAPK、NF-κB及TGF-β等多条信号通路影响。在癌症细胞中MMP-13能通过细胞外基质降解,导致肿瘤细胞的侵袭和转移,也可能直接调节多条控制组织稳态的信号通路。该文就MMP-13在皮肤相关疾病中的研究进行综述。     

黄连提取物对动脉硬化小鼠斑块胶原类型及MMP-9/TIMP-1 比值 的影响*

目的:探讨黄连提取物对高脂喂养ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块内胶原类型及基质金属蛋白酶-9( MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制剂( TIMP-1)比值的影响,探讨黄连提取物稳定斑块的可能作用机制.方法:33只6-8周龄的ApoE基因敲除小鼠予高脂喂养13周后,待其形成成熟的AS斑块后,随机分为3组:模型组、黄连提取物组、辛伐他汀组(阳性对照组),每组11只.继续高脂喂养,并按体重比折算给予小鼠临床推荐剂量的相应药物治疗13周,处死动物,每只小鼠取主动脉根部的4个切面,行天狼猩红染色,检测各组小鼠主动脉斑块内Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,以及斑块内MMP-9和TIMP-1的表达,计算MMP-9/TIMP-1比值.结果:给药13周后,图像分析结果显示,黄连提取物组小鼠主动脉斑块内Ⅰ型胶原含量与模型组比较有所增加,但无显著差异(P＞0.05);辛伐他汀组和黄连提取物组小鼠主动脉斑块内Ⅲ型胶原含量与模型组比较显著降低(P＜0.01).Ⅲ型/Ⅰ型胶原比值,两给药组与模型组比较均显著降低(P＜0.01).与模型组比较,黄连提取物和辛伐他汀组小鼠主动脉斑块内MMP-9的阳性表达均明显减少(P＜0.01),黄连提取物组主动脉斑块内TIMP-1的阳性表达与模型组相比明显增加(P＜0.01),辛伐他汀组TIMP-1表达有所增加,但无统计学差异(P＞0.05),两给药组之间比较无显著差异(P＞0.05).各给药组中MMP-9/TIMP-1比值均有所降低,与模型组比较具有显著差异(P＜0.05,P＜0.01).结论:在临床推荐剂量下,黄连提取物可明显改善ApoE-/-小鼠主动脉AS斑块内胶原类型,调整斑块内MMP-9/TIMP-1比值,从而促进斑块稳定.     

金黄色葡萄球菌SarA、IcaA及其融合基因的DNA疫苗构建及在小鼠免疫应答中的初步研究

目的:探究SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG(Azami Green用AG表示)融合基因的DNA疫苗及对小鼠免疫应答的影响。方法:以金黄色葡萄球菌基因组为模板,通过PCR等反应进行SarA-AG、Ica A-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗的构建,将DNA疫苗转染至HeLa细胞,荧光显微镜下观察DNA疫苗的瞬时表达情况,将转染成功2周后的细胞进行基因组提取,PCR检测质粒在染色体上的整合情况。使用AG、SarA-AG(A组)、Ica A-AG(B组)及Ica A-SarA-AG(C组) 4组免疫BALB/c小鼠,应用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IgG抗体、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ及TNF-α的分泌情况。结果:成功构建SarA-AG、IcaA-AG及Ica A-SarA-AG融合基因DNA疫苗,荧光显微镜下观察DNA疫苗转染情况,结果显示有绿色荧光。提取细胞基因组PCR检测结果显示未出现目的基因条带。免疫小鼠后,A、B、C组均能够诱导小鼠产生较高水平的IgG抗体。与空白组及空载体AG组相比,A、B组均能分泌较高水平的IL-2(P 0.001)、IFN-γ(P 0.001)、TNF-α(P 0.001)、IL-4(P 0.01)及IL-13(P 0.01),而C组TNF-α(P 0.05)、IL-4(P 0.05)及IL-13(P 0.05)分泌较少,但差异有统计学意义,细胞因子的分泌随着免疫次数的增加,差异显著增加。空白组及空载体AG组细胞因子无显著差异。结论:成功构建SarA-AG、IcaA-AG及IcaASarA-AG融合基因的DNA疫苗,且成功在真核细胞中表达。PCR验证结果证实了DNA疫苗的安全性。DNA疫苗免疫小鼠后可诱导体液免疫应答和以Th1细胞为主的细胞免疫应答,具有较好的应用前景。     

携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎模型小鼠血浆及结肠组织NO和VEGF-A表达影响

目的观察携带IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎(UC)小鼠血浆及结肠组织一氧化氮(NO)与血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响,进一步探讨携带IL-10基因的双歧杆菌治疗UC的相关机制。方法筛选出能稳定表达具有生物活性hIL-10蛋白的BL-hIL-10菌株。用5%DSS诱导UC小鼠模型,50只小鼠分为正常对照组、UC模型组、BL治疗组、BL0治疗组和BL-hIL-10治疗组,每组10只。计算小鼠DAI、HE染色评估结肠组织病理学变化;ELISA法测小鼠血浆及结肠组织IL-13、VEGF-A和NO的含量。结果 (1)BL-hIL-10可以降低UC小鼠DAI,减轻UC小鼠结肠组织炎症程度。(2)BL-hIL-10能降低UC小鼠血浆和结肠组织NO、VEGF-A和IL-13水平。结论口服BL-hIL-10对UC小鼠的治疗作用可能与抑制NO产生及下调VEGF-A表达有关。     

IL-33通过活化巨噬细胞NF-κB信号通路参与低氧性肺动脉高压的发生发展

目的探讨IL-33/ST2应答轴是否通过激活巨噬细胞NF-κB通路促进低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)的发生、发展。方法采用野生型(WT)、IL-33转基因(Il33 Tg)小鼠和St2基因敲除(St2-/-)小鼠制备HPH小鼠模型,采集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织标本;进行小鼠BALF总细胞和分类计数;用免疫荧光和免疫组化法检测IL-33、ST2在小鼠肺组织的表达水平和MAC-2+巨噬细胞聚集;用ELISA检测肺组织匀浆中的细胞因子含量;用免疫印迹(Western blot)检测转录因子NF-κB在模型鼠肺组织及体外IL-33刺激的小鼠巨噬细胞系RAW264.7的表达水平。结果 IL-33、ST2在HPH模型小鼠肺组织中表达上调并伴有MAC-2+巨噬细胞增加;Il33 Tg模型鼠肺部以巨噬细胞为主的炎性细胞浸润;低氧可诱导WT小鼠肺组织表达促炎因子IL-1β和巨噬细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1),而St2基因缺失则下调上述细胞因子表达;低氧亦可诱导上调NF-κB在WT小鼠肺组织表达,而St2基因缺失则可抑制低氧诱导NF-κB的表达。体外实验显示IL-33能上调巨噬细胞NF-κB的表达。结论低氧可促进IL-33/ST2表达增强,进而诱导巨噬细胞内NF-κB通路的激活,导致促炎细胞因子MCP-1、IL-1β的产生,加重炎症反应并间接引起肺动脉血管重塑参与HPH的发生、发展。     

关节滑膜液Exosomes激活YAP蛋白保护关节软骨的机制研究

为了研究膝关节炎滑膜液中外泌体(Exosomes)对软骨的作用,并探讨其通过何种信号通路发挥作用,本研究通过ExoQuick提取滑膜液中Exosomes并用电镜、Nanosight、Western blotting进行鉴定;采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测软骨组织细胞活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测采用上清液中MMP-1、MMP-13浓度;Western blotting检测蛋白磷酸化水平;实时荧光定量PCR方法检测下游基因表达水平。研究结果显示成功提取大小在100 nm以下Exosomes颗粒。关节炎滑膜液来源Exosomes与空白对照及正常Exosomes相比较,能够明显促进软骨细胞的增殖,降低MMP-1、MMP-13水平。检测YAP蛋白发生明显磷酸化,与对照组比较有明显差异,YAP下游基因CTGF、Cyr61、ANKRD1均明显高表达。膝关节炎滑膜液分泌的Exosomes能够通过YAP的去磷酸化,抑制MMP-1、MMP-13的分泌,促进软骨细胞的增殖,具有保护关节软骨的作用。     

IL—18DNA免疫对HIV—1核酸疫苗诱导的免疫应答的影响

为了研究白细胞介素-18(IL-18)基因对人免疫缺陷病毒(HIV-1)核酸疫苗诱导免疫应答的影响,将人IL-18基因插入到真核表达载体pVAX1中,构建了真核表达载体pVAX1-IL-18;将pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18或者pCI-neoGAG单独免疫Balb/c小鼠,检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ,同时观察免疫小鼠脾淋巴细胞增殖和小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。酶切及测序结果表明成功地构建了人IL-18基因真核表达载体;与pCI-neoGAG免疫组比较,pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠血清的抗HIV-1p24抗体滴度降低(P<0.01);而与pCI-neoGAG免疫组比较,pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠血清的IFN-γ升高(P<0.01);pCI-neoGAG联合pVAX1-IL-18免疫组小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数(SI)以及特异性CTL活性均高于pCI-neoGAG免疫组(P<0.01)。IL-18基因联合HIV-1核酸疫苗免疫小鼠,可能增强特异性Th1细胞和CTL反应,白细胞介素-18基因对体液免疫有抑制作用。     

白细胞介素13通过STAT6途径促进瘢痕成纤维细胞株胶原合成

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是一种皮肤纤维化过程,是创伤修复的必然产物。白细胞介素13(IL-13)是与纤维化等多种疾病发生机制密切相关的细胞因子。本文观察重组白细胞介素13(rIL-13)对瘢痕成纤维细胞株(CRL-1762)的胶原合成作用,探讨其作用机制。CRL-1762细胞分为实验组和对照组,实验组加入rIL-13(100μg/L),用细胞计数和HE染色观察细胞增殖和细胞形态;检测细胞培养上清液中羟脯氨酸(Hyp)含量;RT-PCR检测细胞IL-13受体的表达;用Western blot检测STAT6蛋白磷酸化情况。结果显示CRL-1762细胞表达IL-13受体α1;实验组细胞数量显著增加(P0.01),上清液中Hyp含量显著高于对照组(P0.01);IL-13作用CRL-1762细胞2 h后磷酸化STAT6蛋白表达最强,4h后衰减。由此可见,CRL-1762细胞表达IL-13受体α1,rIL-13通过STAT6途径促进CRL-1762细胞胶原合成。     

流产布鲁氏菌转录调控因子GntR在小鼠模型上诱导的辅助性T细胞免疫应答

【目的】通过对布鲁氏菌gntR基因进行原核表达,分析其诱导机体产生的Th1和Th2型免疫反应。【方法】以布鲁氏菌S2308基因组为模板,根据GenBank上公布的S2308 gntR基因序列设计引物,利用分子克隆技术,将gntR基因片段克隆至原核表达载体pET-30a,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,诱导GntR蛋白表达;利用SDS-PAGE对GntR重组蛋白(rGntR)进行分析;利用AKTAxpress智能多维纯化系统对rGntR进行纯化;利用Western blotting分析其免疫反应性;用rGntR刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7和小鼠脾细胞,利用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-5,以及IgG抗体的水平。将rGntR免疫小鼠,检测小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平。【结果】gntR基因大小为735 bp,编码245个氨基酸,大约在35 kDa处出现蛋白条带,纯化后为单一条带。WB显示,rGntR具有较好的免疫反应性。rGntR可诱导宿主细胞和小鼠产生较高水平的IFN-γ、IL-4和IgG。【结论】rGntR可在体内或体外诱导辅助性T细...