黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究

黑曲霉Ａ３（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ Ａ３）的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为ｘⅠ、ｘⅡ和ｘⅢ。经７％凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份。经等电聚焦电泳测ｘⅠ、ｘⅡ和ｘⅢ。的等电点分别为６．８、５．５和６．１。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得亚基分子量（Ｄａ）分别为ｘⅠ,４２０００;ｘⅡ,２００００;ｘⅢ,３１０００。三个酶组份的最适反应温度分别为ｘⅠ,４０℃;ｘⅡ     

黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究

黑曲霉A3(AspergillusnigerA3)的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ.经7%凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份.经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5.5和6.1.SDS-PAGE测得亚基分子量(Da)分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,31000.三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃.最适反应pHxⅠ,3.5;xⅡ,4.5;xⅢ,5.0.保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃.金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响.     

M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

从Bacillus pumilus M-26发酵液中分离纯化碱性木聚糖酶,进行酶学性质研究,同时制备工业用碱性木聚糖酶制剂。首先将M-26发酵液进行硫酸铵盐析,制备工业用碱性木聚糖酶干品;然后进行sephadexG-25层析脱盐和cellulose DE-52层析得以纯化。硫酸铵的饱和度50%,酶制剂的酶活可达9 000 IU/g,收率为85%;分离纯化使酶的比活为126.32 IU/mg蛋白,纯化倍数为19.89,酶的回收率12.83%;分子量约为20 ku;M-26碱性木聚糖酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 8.0,具有一定的耐碱性;该酶无纤维素酶活性,Fe2＋对其有激活作用;Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、Cu2＋对其具有抑制作用。短小芽胞杆菌M-26碱性木聚糖酶具有纸浆生物漂白应用前景。     

木聚糖酶高产黑曲霉的选育及其酶学性质研究

木聚糖酶是一种可以将木聚糖水解为木二糖和木二糖以上的低聚木糖,以及少量木糖和阿拉伯糖的组酶,在饲料、食品和造纸等行业具有广阔的应用前景。研究了紫外选育得到的一株木聚糖酶活力比较高的黑曲霉突变菌株Aspergil-lus niger N86的最佳产酶条件及其酶学性质。     

海枣曲霉木聚糖酶的提纯和性质

通过硫酸铵分段、异丙醇分段、Sephadex G一100凝胶过滤、及DEAE-Sephadex A-50离子交换柱层析等提纯步骤,从海枣曲霉(Aspetgillu,phornicis)的麦麸培养物抽提液中分离到4个成份的木聚糖酶,分别称之为X一1、X—II、x—III和X—IV。 经7％凝胶浓度的圆盘电泳及薄层等电聚焦分析,x一1、X．IJ和x—Ill皆为均一成分,x—Iv中则仍杂有少量X~llIo X-I的最适pH为4．0,最适温度45℃,在pH 5．0--9．0之间稳定,保温30分钟时的半失话温度t为90℃。X一和x一 的最适 分别为{．及5．,最适温度均为,稳定pH范I 11 IlI pH 50 50~(3画分别为6．0—10．0及7．0--10．0,t1分别为60及55"C。SDS一凝肢电泳法测得x一’、x-r／和x—111的分子量分别为26,500、35。,500及22,000。薄层凝胶等电聚焦法测得三者的等电点分别为{．7、{．4和4．0。在所测定的化学试剂中,Ag’、Hg’’和Mn冲对这三个酶均有较强烈的抑制作用。sDS对x—I活力影响较小,对x_I】和x—Ill则有强烈的抑制作用。脲对X-1的抑制作用大,对X-II和X—Ill的抑制作用小。     

黑曲霉A3木聚糖酶酶学性质研究*

黑曲霉A3（AspergillusnigerA3）的固体培养物浸出液,经过多步分离纯化后,获得三个组份的木聚糖酶,称为xⅠ、xⅡ和xⅢ。经7％凝胶浓度的盘状电泳分析均为单一组份。经等电聚焦电泳测xⅠ、xⅡ和xⅢ的等电点分别为6.8、5．5和6.1。SDS－PAGE测得亚基分子量（Da）分别为xⅠ,42000;xⅡ,20000;xⅢ,3000。三个酶组份的最适反应温度分别为xⅠ,40℃i;xⅡ,50℃;xⅢ,50℃。最适反应pHxⅠ,3．5;xⅢ,4．5;xⅢ,5．0。保温一个小时后,酶的半失活温度分别为xⅠ,55.6℃;xⅡ,54.8℃;xⅢ,46.6℃。金属离子Ag+、Hg2+、Ni2+和脲对不同的酶组份具有一定的影响。     

木聚糖酶Xyn Ⅱ的D37N突变、表达及酶学性质变化

对来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的木聚糖酶Xyn Ⅱ进行同源建模和序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存在一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关,据此设计了Xyn Ⅱ的D37N定点突变.酵母表达的Xyn ⅡD37N 经纯化后与原酶Xyn Ⅱ(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明,Xyn ⅡD37N 的最适pH由4.2升高到5.3,pH稳定范围由3.0～7.5缩减为3.0～5.5,但最适温度和热稳定性基本保持不变.结果证实,木聚糖酶Xyn Ⅱ的第37位Asp与最适pH相关,为进一步的结构与功能研究提供了理论基础.     

黑曲霉木聚糖酶的纯化与性质

由凝胶电泳酶谱检测到黑曲霉１４９发本酵液中存在两型木聚糖酶,依次为Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ。通过硫酸铵分级沉淀及ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ５０柱层析分别将Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ纯化到凝胶电泳均一。由ＳＤＳ－凝胶电泳和浓度梯度凝胶电泳测得Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ的分子量分别为３７ｋＤａ,２４ｋＤａ和２３ｋＤａ,Ｘ－Ⅰ具有亚基。二者的含糖量分别为２７．６％和７．３％。Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ最适返应温度分别为５０℃和５５℃,ｐＨ为４．     

黑曲霉木聚糖酶的纯化与性质

由凝胶电泳酶谱检测到黑曲霉１４９发酵液中存在两型木聚糖酶,依次为Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ．通过硫酸铵分级沉淀及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析分别将Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ纯化到凝胶电泳均一。由ＳＤＳ一凝胶电泳和浓度梯度凝胶电泳测得Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ的分子量分别为３７ｋＤａ,７６ｋＤａ,２４ｋＤａ和２３ｋＤａ,Ｘ－Ⅰ具有亚基。二者的含糖量分别为２７６％和７．３％。Ｘ－Ⅰ和Ｘ－Ⅱ最适反应温度分别为５０℃和５５℃,ｐＨ为４６和５．２。在ｐＨ４．６～９．２和ｐＨ４．０～１０．０之间Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ活力稳定。５０℃保温２４ｈ,Ｘ－Ⅰ活力仍为１００％,而Ｘ－Ⅱ的活力已降为２．８％。ＨｇＣｌ２和ＡｇＮＯ３显著抑制Ｘ－Ⅰ、Ｘ－Ⅱ的活力。Ｘ－Ⅰ与Ｘ－Ⅱ水解不同来源的木聚糖,其产物有所不同。     

木聚糖酶XYNB的N46D突变、表达及酶学性质变化

对来源于Streptomyces olivaceoviridis的高比活木聚糖酶XYNB进行同源建模和同源序列比较,发现第11族木聚糖酶的催化结构域在β折叠股A3和B3之间存的一个保守的氨基酸位点,该位点与木聚糖酶的pH特性有关.据此设计了XYNB的N46D定点突变.将突变酶XYNBN46D在毕赤酵母中表达,表达的XYNBN46D经纯化后与原酶XYNB(同样经毕赤酵母表达后纯化)进行酶学性质比较,结果表明, XYNBN46D的最适pH值由5.2下降到4.2,pH稳定性也向酸性pH偏移,同时,热稳定性和最适温度也有一定的提高, 但酶的比活性显著下降.结果证实,木聚糖酶XYNB的第46位Asn与其最适pH值相关.对导致酶学性质改变的可能因素进行了分析,结果为进一步的结构与功能研究提供了资料.     

通过理性改造提高11家族木聚糖酶热稳定性研究进展

木聚糖是植物细胞中含量最高的半纤维素,是一种重要的微生物资源,也是自然界中含量丰富的多糖之一。木聚糖酶是能够将复杂的木聚糖结构水解为木寡糖的一类酶系,按其结构域可分为不同的家族,其中大部分木聚糖酶属于糖苷水解酶的10和11家族,而11家族的木聚糖酶由于分子量较小,比酶活较高等诸多优点使其在饲料、造纸、食品、能源工业有着广阔的应用前景。但是商业化木聚糖酶必须易于生产,酶活较高,并且能够适应工业过程中的各种严格条件,例如饲料与造纸工业过程中有时需要瞬时提高反应温度,这就要求参与这一系列反应的木聚糖酶在高温下有着较高的比酶活和热稳定性。但是一般条件下,很多微生物分泌的木聚糖酶达不到此要求,因此,通过合理的分子生物学方法提高木聚糖酶的热稳定性使其在工业生产中发挥更大的作用是人们不断追求的目标。本文重点阐述二硫键、糖基化、疏水作用等蛋白的重要性质,结合作者自身实验结果,讨论了这些性质对11家族木聚糖酶热稳定性的影响。为进一步加深木聚糖酶作用机制的了解、指导木聚糖酶的分子改良有提供参考。     

木聚糖酶基因克隆、表达与分泌及定点诱变研究进展

木聚糖酶专一性水解木聚糖分子中β14糖苷键,在制浆造纸、食品、纺织、饲料、能源工业中具有广阔的应用前景。随着各种新技术的发展与应用,木聚糖酶基因的研究取得了很大进展,不仅克隆了许多不同来源的木聚糖酶基因,研究了木聚糖酶基因在同源和异源寄主中的表达和分泌,而且还使用定点诱变技术探讨了木聚糖酶的结构与功能的关系并对酶的性质进行改造以满足工业生产的需要 。     

绿色糖单孢菌产木聚糖酶规律及其耐碱耐热性的初步研究

采用绿色糖单孢菌为实验材料,在不同诱导产酶培养基上经过192h的振荡培养,探索其产酶时程规律．结果表明,不同的诱导底物诱导产生的木聚糖酶活性差异不显著,但诱导产纤维素酶活性差异显著．其中松木粉加棉纱培养基诱导产纤维素酶活性为0．08IU／ml,与空白对照(5．40IU／ml)相比显著下降(P≤0．05)．为了适应纸浆漂白实际应用中纤维素酶越少越好的要求,选择该培养基为最佳诱导产酶培养基．绿色糖单孢菌在上述培养基中培养156h后达到木聚糖酶产酶高峰。粗酶液酶活可达到9．03IU／ml．通过对该酶进行高温及碱性处理。实验结果表明绿色糖单孢菌分泌的木聚糖酶在pH7．0下反应表现最高活性,同时在90℃下保温3h后酶活为原来的63．55％,具有较好的耐碱耐热性．     

脱乙酰壳聚糖固定化宇佐美曲霉木聚糖酶及固定化酶的性质和应用(英文)

研究壳聚糖吸附和戊二醛交联对木聚糖酶固定化条件 .将酶液加入到经醋酸溶液处理过的脱乙酰壳聚糖的pH 4 8的悬液中 ,加入浓度为 0 3%～ 0 4 %的戊二醛溶液 ,室温下 ,8h后得到固定化酶 .固定化酶的半失活温度比游离酶高 ,由 5 1℃升至 71℃ ,Km 值由游离酶的 1 2mg ml增加到1 5mg ml ,最适反应温度也由 5 5℃增加到 71℃ ,而最适反应pH由 4 6下降到 3 8.该固定化木聚糖酶可用于制造低聚木糖 .经过 10次连续应用实验后 ,该固定化酶的活力保持 81%     

基因工程菌1020的培养优化及木聚糖酶部分特性研究

对基因工程菌1020培养基成分及培养条件进行了优化。结果表明,Mg2+、Mn2+、Zn2+三种金属离子可促进发酵产木聚糖酶。180 r.m in-1的摇床转速可满足70 mL/500 mL装液量的溶氧需求。最适培养温度为30℃,pH值为7.0。优化后的酶活为优化前的2.09倍。全细胞木聚糖酶的酶学性质表明该酶有两个最适pH值,分别为7.0与9.0。金属离子Ca2+,Fe3+,Fe2+对酶活有促进作用。pH7.0时Km为36.7095 mmol.L-1,Vm为0.3829 mmol.L-1.m in-1;pH9.0时Km29.9945mmol.L-1,Vm 0.2165 mmol.L-1.m in-1。     

绿色糖单孢菌木聚糖酶的分离纯化与酶学性质研究

木聚糖酶是一种重要的具有工业应用前景的木聚糖降解酶,在充分利用自然资源、保护生态环境等方面具有十分重要的意义.通过硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100凝胶柱层析方法从一株中度耐热耐碱放线菌—绿色糖单孢菌的胞外酶中纯化得到单一的木聚糖酶,相对分子质量为51 kD,酶纯度提高了13.01倍.纯酶最适反应温度为60℃,最适反应pH值为7.0;75℃以下该酶具有良好的热稳定性,在pH 7～10范围内具有较强的耐受力.金属离子Ca2+、Fe2+、Zn2+对该酶具有明显促进作用,Cu2+、Mn2+、Al3+和SDS具有抑制作用而K+,Na+,Mg2+没有明显的作用.该酶为大分子质量的糖基化蛋白,含糖量为21.96%.     

微生物产生的木聚糖酶的功能和应用

术聚糖是一种异质多糖,主要由木糖和阿拉伯糖组成。微生物产生的木聚糖酶来源广泛,能将木聚糖水解为木寡糖和D-木糖。该酶具有极大的应用价值,如可用于纸浆的漂白以减少环境污染,也可将造纸工业及农业废料中的木聚糖转化为D-木糖。     

短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酶母中的分泌表达及酶学性质研究

将短小芽孢杆菌HB030的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,得到重组质粒pH-BM220,将pHBM220经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD1168,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达,将重组毕赤酵母KM71（pHBM220）,GS115（pHBM220),GS115(pHBM220),SMD1168（pHBM220）分别诱导产酶,对重组酶进行相关的酶学性质分析表明,三的最适反应pH值约为5.5,最适反应温度约为60℃,在其最适反应条件下测得三粗酶液酶活分别为10.80IU/mL,11.63IU/mL,9.68IU/mL,重组毕赤酵母KM71（pHBM220）所产酶的热稳定性较好,而在pH稳定性方面三没有太大的差异。     

地衣芽孢杆菌H-1的鉴定及其产木聚糖酶性质的研究

本实验室分离到一株木聚糖酶高产菌,经形态、生理以及生化鉴定,确认为地衣穿孢杆菌,定名为H-1。对H-1的胞外木聚糖酶进行初步的研究。从碳源利用方面,认为 H-1的木聚糖酶为组成型合成。木聚糖和纤维二糖对它有诱导作用,而木糖和葡萄糖对酶的产生有阻抑作用。对酶解产物分析表明,有小分子糖产生、但并非都是单糖。H-1胞外木聚糖酶经60％硫酸铵沉淀,过DEAE-50柱,以及超过滤,得到了部分纯化酶。该酶作用的最适pH为7.6,在pH4～5范围较为稳定;最适温度为50℃; 70℃25min则完全失活。米氏常数为10.42×10~(-3)g/ml,最大反应速度为0.345μmol/min。2mM Ag~+使酶活增加了1.5倍,2mM EDTA抑制了 22％的酶活性,而2mM Cu~(++)则使酶完全失活。