共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
2.
导入外源DNA对小麦基因表达的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
用(SDS)PAGE对外源豌豆DNA导入小麦体的不良变异后代种子蛋白质和酯酶同工酶(EST)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化同工酶(POD)进行分析,发现变异小麦的种子蛋白质消减4个组分带,EST和POD消减2条酶谱带,SOD的活性明显降低,并且变异小麦植株的发育生长表型呈现出脆弱,早衰迹象,表明导入外源DNA抑制了某些基因的表达,同时分析导致这种负作用的原因。 相似文献
3.
以痘苗病毒天坛株为载体的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D的重组活疫苗的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
从我国分离到的一株单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1-168株)病毒基因组中,分离出含有糖蛋白D(gD)基因的1.2kb片段,插入带有痘苗病毒天坛株TK区的质粒pJSB1175P7.5k启动子下游,转染无白血病鸡胚原代细胞,获得带有HSV-1-168gD基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达HSV-1-168gD糖蛋白抗原,能与特异性单克隆抗体反应。在感染细胞中表达的膜抗原经SDS-PAGE分析,表达分子量为54kD糖蛋白。用Southern杂交分析了重组病毒DNA中特异的gD基因,对作为活疫苗的重组痘苗病毒株进行了一些微生物学活性、免疫原性和毒力等方面的研究。 相似文献
4.
将质粒PBX-MT上的小鼠MT-ⅠcDNA片段切下作为模板,通过PCR方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒PBS-SK中,经DNA序列测定后证明其克隆序列正确,再将MT-ⅠcDNA编码序列插入到转移载体pBacPAK8的BamHⅠ和EcoRⅠ位点之间,通过磷酸钙/DNA共转染方法将其导入昆虫细胞Sf9中,以Western blot和DotEIA方法对表达产物进行了检测,表达量为1mg= 相似文献
5.
将质粒pBX-MT上的小鼠MT-ⅠcDNA片段切下作为模板,通过PCR方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒pBS-SK中,经DNA序列测定后证明其克隆序列正确.再将MT-ⅠcDNA编码序列插入到转移载体pBacPAK8的BamHⅠ和EcoRⅠ位点之间,通过磷酸钙/DNA共转染方法将其导入昆虫细胞Sf9中,以Westernblot和DotEIA方法对表达产物进行了检测,表达量为1mg/L 相似文献
6.
用E.coli0111:B4死菌体及其脂多糖(LPS)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合获得6株稳定分泌抗LPS特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为IgG2a类,5株为IgM类,轻链均为K型;染色体数目为90-98条;5株IgM类单克隆抗体识别5种不同的抗原表位;相对亲和力在10~8~10~(10)之间;1B12单抗经SephadexG-150纯化后,经还原性SDS-PAGE显示只有70KD的重键和25KD的轻链。 相似文献
7.
8.
将尿激酶原(pro-UK)cDNA和组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)A链cDNA克隆到M13mp18中,经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到u-PA(Leu144-Gly408)/t-PA(Ser1-Thr263)(ut-PA)融合基因.将ut-PA融合基因克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCM-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞,筛选稳定表达株.收集无血清表达上清,经苯甲脒柱纯化得到ut-PA纯品,SDS-PAGE和纤维蛋白自显影显示ut-PA有两种分子量形式,分子量分别为68kD和61kD.纤维蛋白亲和性试验表明,LUK(低分子量尿激酶)对纤维蛋白没有亲和性,而含有LUK的ut-PA则对纤维蛋白表现出很强的亲和性,但ut-PA的亲和性略低于亲本t-PA. 相似文献
9.
固氮酶结构基因在联合固氮菌Klebsiellaplanticola19—1细胞中的定位 总被引:1,自引:0,他引:1
用Klebsiella pneum oniaenifHDK 为探针与Klebsiella planticola 19-1 DNA Southern 杂交表明,K.planticola 19-1 中存在与nifHDK 同源的片段。用凝胶内溶菌及电场倒转技术检测在K.planticola 19-1 中存在一大质粒。用K.pneum oniae nif HDK 探针与大质粒DNASouthern 杂交证明固氮酶结构基因定位于大质粒 相似文献
10.
本文利用PCR技术建立一种对HSV直接基因分型的方法。在HSV-Ⅰ、Ⅱ两型的DNA多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物(HDP-B)和两条型特异的下游引物(HDP-1、HDP-2)。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在HSV-Ⅰ产生543bp条带,HSV-Ⅱ产生372bp条带,据此在基因水平上对HSV进行分型。5株不同来源的HSV(2株Ⅰ型,3株Ⅱ型)分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的DNA不产生特异反应,敏感性可达1fg。应用该法对151份临床可疑HSV感染的标本进行检测并分型,结果与免疫学方法完全一致。 相似文献
11.
外源DNA直接导入小麦及其在育种上的应用 总被引:24,自引:0,他引:24
本研究选用两个白粒小麦品种作供体,提取其总DNA,采用花粉管直接携带法导入75(198)红粒品种受体植株。DNA导入的第一代(D1),目的性状的转化频率为1.75%和2.94%。D2代变异率显著低于D1代。对D1,D2代所得目的性状变异后代,按照常规育种程序进行D3代观察与鉴定,得到已稳定遗传的后代,从中选取保持原品种其它优良性状而籽粒为的白色的变异类型混合脱粒,获得75(198)改良新品系。 相似文献
12.
纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示一条蛋自带,其亚基分子量为39.8kD。用SephacrylS-200凝胶过滤测得全酶的分子量为79.4kD,该酶由两个相同亚基组成。其表观Km为12mmol/L,Vmax为99.5mg还原糖mg-1proteinh-1。 相似文献
13.
陈定福 《中国生物化学与分子生物学报》1994,10(4):420-426
用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,DEAE-纤维素和SephacrylS-200柱层析,从南方鲇(Silurus meridionalis Chen)肠粘膜中提取出碱性磷酸酶(AKP)。提纯倍数为39.50倍,比活为68.35μ/mg蛋白,提取酶液经PAGE和SDS-PAGE只呈现一条区带。该酶的分子量为132140,N末端氨基酸为门冬氨酸,最适pH为10.10,7.5>pH>11.5时不稳定,最适温度为40℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其K_m值为1.72×10~(-3)mol/L。Mg~(2+)、Mn~(2+)为该酶的激活剂,KH_2PO_4、L-CyS、ME、DFP、EDTA-Na_2为抑制剂。选用KH_2PO_4和DFP作抑制类型的判断,结果表明,KH_2PO_4属竞争性掏剂,其抑制常数为2.3mmol/L;DFP为非竞争性抑制剂,抑制常数为1.05mmol/L。 相似文献
14.
鸡减蛋综合征病毒(EDSV—76)基因组E1区结构特点分析 总被引:1,自引:0,他引:1
EDSV-76病毒中国株AA-2经常规方法提取其病毒DNA后,建立了限制性内切酶PstI水解片段的全基因文库。对其中PstI-G片段和PstI-A片段的正反链进行序列测定,获得EDSV E1区(0-8.8m.u)的核苷酸序列。经分析,EDSV E1区具有与其他腺病毒E1区类似的结构。以大于60个氨基酸残基为标准,EDSV E1区共有7个开放读码框架(ORF),其中R1、R2、ElbsT和E1b1T 相似文献
15.
本文利用PCR技术建立一种对HSV直接基因分型的方法。在HSV-Ⅰ、Ⅱ两型的DNA多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物(HDP-B)和两条型特异的下游引物(HDP-1、HDP-2)。三条引物共同组成一个扩增反应体系,在HSV-Ⅰ产生543bp条带,HSV-Ⅱ产生372bp条带,据此在基因水平上对HSV进行分型。5株不同来源的HSV(2株Ⅰ型,3株Ⅱ型)分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该 相似文献
16.
甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质 总被引:11,自引:0,他引:11
纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示一条蛋白带,其亚基分子量为39.8kD。用Sephacryl S-200凝胶过滤测得全酶的分子量为79.4kD,该酶由两个相同亚基组成。其表观Km为12mmol/L,Vmax为99.5mg还原糖mg^-1protein h^-1。 相似文献
17.
NNK诱发BEP2D细胞产生活性氧及其对DNA的损伤 总被引:4,自引:0,他引:4
通过测定细胞内和细胞上清中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以及DNA 加合物——8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,OH8dG)含量,对烟草特异亚硝胺类化合物4-甲基亚硝胺-1(3-吡啶基)-1-丁酮(4-(m ethylnitrosam ino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK)诱发人乳头状病毒永生化的人支气管上皮细胞(hum an papillom avirus-im m ortalized hum anbronchialepithelialcellline,BEP2D)产生的ROS及其对DNA 的氧化损伤进行研究,并观察纳米硒的保护作用.结果表明,BEP2D 细胞经不同浓度的NNK 作用后,细胞内和细胞上清中ROS以及OH8dG含量均显著增加,并有较好的剂量效应关系.1 μm ol·L- 1纳米硒(nanoselenuim ,NS)能明显抑制NNK 诱发BEP2D细胞产生的ROS及OH8dG 水平.揭示NNK 能造成细胞的氧化损伤,而NS对NNK 所致细胞的氧化损伤有保护作用. 相似文献
18.
日本《农业技术》,1999年54卷4期第7N~11N页报道:甘薯带状粗皮病严重危害甘薯,向甘薯导入SPFMV-S病毒外壳蛋白质基因,可以培育带状粗皮病抗性甘薯。向植物导入基因的方法,一是利用农杆菌(Agrobacterium),在质粒上对夹于25bp的T-DNA两末端序列的目的基因编入植物染色体;二是使用电激、聚乙二醇(Polyethyleneglycol)、粒子枪等直接导入。对于甘薯基因重组的研究情况概要如下。1 向甘薯导入SPFMV-S外壳蛋白质基因1.1 甘薯基因重组方法。一是Agroba… 相似文献
19.
伪狂犬病毒蛋白激酶基因的PCR扩增及其克隆鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
以BHK-21细胞单层上增殖的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),经离心浓缩后,用SDS-蛋白酶K消化法分离纯化PRV基因组DNA。参照PRVKa株和NIA-3株蛋白激酶(PK)基因的DNA序列,设计并合成了一对长度为26bp和32bp的引物,以纯化的PRV基因组DNA为模板,用PCR技术成功地扩增出我国伪狂犬病毒地方株的PK基因,并将它克隆于pUC19载体。酶切分析结果表明,所获PK基因克隆在PstI、SmaI、XhoI和SalI上的切点与PRVNIA-3株相同。为下一步进行PK基因的体外缺失和重组,以构建减毒的PK缺失疫苗株奠定了基础。 相似文献
20.
从我国分离到的一株单纯疱疹病毒I型病毒基因组中,分离出含有糖蛋白D基因的1.2kb片估,插入带有痘苗病毒天坛株TK区的持粒pJSB1175P7.5k启动子下游,转染无白血病鸡胚原供细胞,获得带有HSV-1-168gD基因的重组痘苗病毒。此株重组病毒在感染细胞膜上表达HSV-1-168gD糖蛋白抗原,能与特异性单克隆抗体反应。 相似文献