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D N A 测序是遗传工程的重要技术之一, D N A 测序技术的自动化对遗传工程的研究具有重要意义。七十年代末期, Sanger 和 Maxam 、 Gilbert分别提出了切实可行的 D N A序列测定方法。近二十年来, D N A 测序技术发展很快。人们从不同方面对该技术进行了改进,并将许多先进的光学探测方法应用于 D N A 测序技术中。目前已出现了许多商品化的 D N A 测序仪。 相似文献
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DNA序列分析技术及其现状 总被引:3,自引:0,他引:3
DNA序列分析技术一直是分子生物学领域的一个重要研究课题。“人类基因组计划”的实施有力地推动了高速DNA测序技术的发展。本文主要介绍国内外目前流行的经典的测序方法———各种改良的双脱氧链末端终止法,及近年来发展起来的一些全新的DNA测序方法 相似文献
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一种提取果树叶片DNA的简便方法 总被引:10,自引:5,他引:10
植物DNA的提取是分子遗传学及遗传工程的根本前提。通常DNA提取方法应满足以下几个主要条件:(1)所得DNA具备理想的纯度,如RFLP技术对DNA纯度要求高,因为纯度高的DNA便于酶切及膜转移等操作,而对于涉及PCR扩增的技术,DNA提取则尤为注意样... 相似文献
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概述DNA测序技术的现状及进展 总被引:2,自引:0,他引:2
概述DNA测序技术的现状及进展邓炜,柴建华(复旦大学遗传研究所,上海200433)关键词DNA测序自1977年Sanger建立“DNA双脱氧链未端终止测序法”以来,DNA序列测定已成为实验室中常规技术。Sanger因此而第二次荣膺诺贝尔奖。由于有了成... 相似文献
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杂交测序——DNA测序新策略 总被引:2,自引:0,他引:2
杂交测序──DNA测序新策略陈尚武,马涧泉(中山医科大学生化教研室,广州510089)关键词DNA,测序,杂交人类基因组计划要求改进DNA测序方法,促进了测序技术的发展,一种全新的测序方法──杂交测序(sequencingbyhybridizatio... 相似文献
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傅俊英赵蕴华 《现代生物医学进展》2012,12(5):958-963
DNA测序技术是遗传工程的核心技术之一,发展快速和低成本的基因测序技术成为研究焦点。美国、欧盟等发达国家和地区大力支持DNA测序技术的创新研究,并投入了大量的科研经费。在美国,国家卫生研究院(NIH)下属的国家人类基因组研究院(NHGRI)、美国能源部(DOE)以及美国科学基金委(NSF)等机构是进行DNA测序技术相关项目经费分配的主要政府部门。DNA测序作为生命科学研究的关键技术也是欧盟框架计划资助的重要内容之一,其以多个欧洲国家间合作以及产学研合作的形式开展。中国在DNA测序技术领域也开展了一些研究。 相似文献
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对TMV不同抗性番茄品种叶绿体DNA的RAPD分析 总被引:2,自引:0,他引:2
本实验对TMV抗性和敏感的两个番茄品种ct-DNA进行RAPD分析,结果发现在20个引物中有4个引物的扩增产物存在明显差异,共显示出14条差异带。这可能是由于ct-DNA碱基顺序变异或小片段DNA插入或缺失造成的,深入研究将对探讨番茄抗TMV的分子机理,进而用遗传工程方法培育抗病品种具有重要意义。 相似文献
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DNA分子系统学在爬行动物中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
爬行动物因其在脊椎动物中具有承上启下的作用,对其进行系统学研究,了解它们的进化关系显得尤为重要。本文DNA杂交、DNA指纹、RFLP、RAPD及测序等五个方面对爬行动物的DNA分子系统学研究工作进行了综述,对其中的一些问题进行了讨论。 相似文献
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以变性质粒DNA为模板的核苷酸序列分析(又称双链DNA测序)的结果会受到诸多因素的影响。然而,模板的制备及其纯度显得尤为重要。本试验对以三种方法纯化的质粒为模板的测序结果作了比较,结果显示.能为普通实验室所采纳的二氧化硅吸附法操作上简单、重复性好,其结果可与M13顺序分析系统相媲美。 相似文献
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47个早期人胚胎低丰度表达基因ESTs筛选及结果分析 总被引:1,自引:0,他引:1
构建高质量cDNA文库在基因克隆、mRNA差异展示、表达序列标签测序和基因定位等研究中具有十分重要的作用。为了从早期胚胎中分离人类新基因,构建了受精后3周龄的人cDNA文库,用标记的一链cDNA探针对该文库的6508个克隆子进行菌落原位杂交,得到1677个无任何杂交信号的低丰度表达克隆子,从中随机挑选了47个进行5′端部分测序,将测序结果与三大基因库进行序列同源性比较,发现18个克隆(38.3%) 相似文献
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目前 ,DNA测序的核心仪器是使用荧光染料标记的、具有CCD光学系统的DNA测序仪 ,其工作原理主要包括 :用不同的荧光染料确定A、G、C和T这 4种碱基的延伸反应 ,通过激光的激发 ,每种染料可以发射出不同的电信号 ,测序仪收集这些光波信号后 ,通过计算机数据分析 ,可得到相应的碱基序列。利用这种方法 ,所有 4种染料可在同一凝胶泳道中检测和辨别 ,消除了因泳道之间迁移率的差异所引起的误差 ,增加了测序的精确度 ;同时 ,可以增加在同一块凝胶上所能分析的模板DNA数量。毛细管电泳技术的应用可使测序样品的加样自动化 ,且无须用… 相似文献
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双链DNA模板循环测序的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用末端标记引物进行双链DNA循环测序是实验室快速,准确获得双链DNA模板序列的有效方法。实验结果表明:该测序法不仅能消除由于模板不纯所导致的引物的非特异性结合等因素而产生的非特异条带,而且能降低PCR产物测序的背景问题。 相似文献
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锌指基因是一种造血调节基因,编码锌指结构蛋白,主要在髓细胞中表达,促进髓细胞分化,在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中,促使病情缓解。本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中,探索并建立了单向聚合酶链反应(PCR)扩增特定单链DNA,直接测序的新方法。它能产生质和量均佳的单链DNA,无需纯化即可直接用于测序,使复杂的测序研究简便易行,可在2,3天内完成。这种单向PCR扩增特定单链DNA直接测序的方法,经对锌指基因的cDNA测序,得到验证。此法不仅适用于疾病研究中的DNA测序,还可制各单链DNA探针,更利于基因结构组成的研究。 相似文献
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栖热菌属热稳定DNA聚合酶 总被引:7,自引:2,他引:5
DNA聚合酶是能够以DNA或RNA为模板 ,在寡核苷酸或蛋白质引物的引导下催化合成DNA的一类酶 ,已经分离纯化的有上百种 ,其中有半数已经被克隆和测序。它们之间在DNA序列、氨基酸序列、二、三级结构方面有较高的同源性 ,且与RNA聚合酶和反转录酶之间也有不同程度的同源性[1~ 4] 。1 DNA聚合酶的分类DNA聚合酶有许多不同的类群 ,如很小的 (3 9kDa) ,来自哺乳动物的修复性单亚基DNA聚合酶 ,巨大的 (可高达 90 0kDa)、多亚基(可达 2 0多个亚基 )的复制性DNA聚合酶 (如Eco聚合酶Ⅲ )。有些DNA聚合酶则… 相似文献
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新型的NDA序列测定策略:PCR产物直接测序 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA序列的测定在现代分子生物学中的应用越来越广泛 ,传统的模板制备方法是将待测序列的DNA片段插入质粒或病毒载体中 ,然后让其在宿主细菌细胞中增殖。尽管这套方法已被简化和标准化 ,但由于其涉及到活细胞的保存和使用 ,不可避免地会带来诸如载体和宿主细胞基因发生突变等不利影响。而用PCR技术直接从基因组或克隆片段制备测序模板 ,可以完全避免细菌培养、模板提取等重复性操作 ,也克服了以上弊端 ;由于PCR技术快速、简便 ,在检测人类遗传病的基因突变时 ,需要比较患者和正常人中的突变分布情况 ,应用PCR直接测序技术就能… 相似文献
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我们应用以义技术,结合Lipofectin导入和GPT筛选方法,研究了DNA聚合酶ε在HeLa细胞DNA复制过程中的功能,针对DNA聚合酶ε和α的反义寡核苷酸都能够专一地抑制HeLa细胞的DNA合成。首镒直接证明了DNA聚合酶ε在哺乳动物细胞的DNA复制过程中具有重要作用。. 相似文献
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锌指基因是一种造血调节基因,编码锌指结构蛋白,主要在髓细胞中表达,促进髓细胞分化在急性早幼粒白血病维甲酸治疗中,促使病情缓解,本文报道了我们从基因分子上研究锌指基因作用中,探索并建立了单向聚合酶链反应扩增特定单链DNA,直接测序的新方法,它能产生质和量均佳的单均DNA,无需纯化即可直接用于测序,使复杂的测序研究简便易行,可在2,3天内完成,这各单向PCR扩增特定单链DNA直接测序的方法,经对锌指基 相似文献
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一种快速有效纯化DNA序列分析模板的方法 总被引:3,自引:0,他引:3
介绍一种DNA序列分析模板的快速、有效的纯化方法。该法对DNA模板的回收率可达95%以上。多次测序结果表明,此法与其他常规纯化方法相比,具有简便、快速、有效、可靠等优点,其测序结果电泳带清晰,无模糊带及“鬼带”出现,重复性及稳定性较好。 相似文献