胰酶对皮肤角质细胞分离和传代的影响

考察不同的胰酶浓度及其作用时间对角质细胞分离和传代的影响。实验发现在胰酶浓度 0.25%时作用5min可获得的总活细胞量和有克隆形成能力的细胞量均优于其它培养条件 ;而在胰酶浓度0.05%时作用 5min可获得最大的原代角质细胞贴壁率。随着胰酶浓度的提高 ,传代角质细胞的贴壁率和贴壁速率常数以及克隆形成率均随之增加 ,因此在传代培养时使用 0.25%胰酶浓度进行消化较为适宜.     

酵母过氧化物酶体的形成机制

过氧化物酶体是细胞中一种重要的细胞器.过氧化物酶体在细胞功能的发挥和人体健康方面有着重要作用.目前,以酵母过氧化物酶体为模型,研究过氧化物酶体的形成机制是研究热点.从过氧化物酶体起源、生成方式介绍最新研究进展,总结在酵母细胞中参与过氧化物酶体形成的必需基因(pex),及其编码Peroxin蛋白在过氧化物酶体形成过程中的...     

超声波在生物工程中的应用

研究发现在酶和细胞催化的生物反应过程中,较低强度的超声作用可提高酶的催化活性或加速细胞的代谢过程。本文主要简述超声波作用的物理机制并对其在生物工程中的应用前景进行讨论。     

动物细胞DNA多聚酶

该书分十部分:一、引言;二、动物细胞中DNA多聚酶的增殖;三、αDNA多聚酶;四、βDNA多聚酶;五、r及σDNA多聚酶;六、动物细胞DNA多聚酶在细胞DNA复制中的作用七、动物细胞DNA多聚酶在细胞DNA修复中的作用;八、DNA合成的精确性;九、动物细胞DNA多聚酶的生物学;十、展望.     

大鼠附睾钠钾离子主动转运的超微结构研究

在超微结构水平上研究大鼠附睾的离子转运机制,确定离子主动转运相关的钠-钾三磷酸腺苷酶(Na-K-ATPase)的分布。结果表明大鼠附睾上皮细胞具有二类NPP酶活性,即依赖于钾的,对乌巴因敏感的和对Levamisole有抵抗作用的K-NPP酶;不依赖于钾的,对乌巴因不敏感的和对Levamisole有抵抗作用的非K-NPP酶。K-NPP酶只分布在大鼠附睾各段和输出小管近段的主细胞基底膜与侧膜上,非K-NPP酶分布在主细胞的高尔基氏体、内质网膜和致密体上。附睾上皮细胞中的基底细胞、晕细胞和亮细胞均缺少酶的分布。低钾液附睾组织灌流和用棉酚处理动物,均使非钾-NPP酶活性增强,对K-NPP酶活性有抑制作用。     

乙酰肝素酶与胃癌发展的关系及其检测

乙酰肝素酶是目前发现的哺乳动物细胞中惟一能切割细胞外基质中硫酸乙酰肝素蛋白多糖侧链——硫酸乙酰肝素的一种葡萄糖醛酸内切酶,在胃癌侵袭转移中起重要作用。我们就乙酰肝素酶的分子结构特点、在胃癌侵袭转移中的作用机制及其检测等方面的研究进展进行综述。     

“探究影响酶活性的因素”的实验教学组织

细胞代谢是细胞最基本的生命特征,酶在细胞代谢中具有重要作用。“探究影响酶活性的因素”是普通高中生物课程标准中必修1“分子与细胞”模块中要求的第一个探究性实验,组织实施好这个典型的探究实验不仅利于学生理解酶在新陈代谢中的作用,更利于发展学生的科学探究能力,提高学生的生物科学素养。     

抗氧化剂芦丁对星形胶质细胞iNOS基因表达的影响

研究抗氧化剂芦丁对星形胶质细胞可诱导型一氧化氮合酶基因表达的抑制作用,并探讨其作用的机制,以脂多糖和γ-干扰素诱导星形胶质细胞表达可诱导型一氧化氮合酶,应用蛋白质印迹分析以及ESR自旋捕集技术研究了芦丁对星形胶质细胞产生内源性一氧化氮的作用,研究结果表明芦丁能够有效地抑制星形胶质细胞可诱导型一氧化氮合酶基因的表达、减少内源性一氧化氮的生成,而这一抑制作用是通过NF-κB信号通路实现的,芦丁对星形胶质细胞的活化具有明显的调控作用。     

病毒酶的研究及其进展

病毒的主要生物学特性之一是只有一种类型的核酸为其基因组(RNA或DNA),并必须在活细胞中增殖。虽然病毒复制需要细胞组分参与,但病毒基因编码的酶在病毒复制中的作用已日益受到重视。各种不同的病毒具有不同的病毒酶,包括复制核的酶、整合人细胞染色体的整合酶、引发(priming)DNA     

体外人表皮细胞对胰蛋白酶耐受的探讨

目的:观察人表皮细胞对胰酶消化的耐受能力,通过不同细胞恢复贴壁时间不同来探索分离和纯化表皮细胞的新方法,并探讨胰酶耐受细胞的干性表达,及其与muse细胞的可能相关性。方法:中性蛋白酶及胰酶消化获取表皮细胞,用0.25%的胰酶悬浮表皮细胞,以3.0×105/m L的细胞密度种植于12孔板,每间隔半小时或1小时终止胰酶1孔,其中胰酶作用时间最长达46小时。记录不同细胞贴壁时间、生长状态,并在接种后第7天,对贴壁细胞进行Nestin、Sox10抗体免疫细胞化学染色。结果:随着胰酶作用时间的延长,贴壁细胞数目递减,细胞贴壁所用时间也延长。所有孔中最早出现的贴壁细胞为树突状细胞,这些细胞开始生长缓慢,大约4天后生长迅速,10天后部分孔出现鱼群样细胞团。部分孔经Nestin、SOX10抗体的免疫细胞化学染色结果均为阳性,其中以Nestin抗体较明显。结论:人表皮细胞对胰酶消化的耐受能达46小时,从形态学观察判断,黑素细胞贴壁早于角质形成细胞,大多数贴壁后细胞增殖力强,干细胞表面标记显示部分阳性。     

细胞色素P450酶系与除草剂代谢

细胞色素P450是广泛存在于动物、植物和微生物体内的一类具有混合功能的血红素氧化酶系。它不但能够催化苯丙烷类、萜类化合物和脂肪酸等内源性物质的生物合成 ,而且参与许多外源性物质包括除草剂等的生物氧化。综述了代谢除草剂的细菌、哺乳动物和植物细胞色素P450酶系 ,概述了细胞色素P450酶系参与除草剂代谢的作用方式 :脱烷基化作用、环甲基化羟基化作用和芳环的羟基化作用等。这些细胞色素P450酶系在培育除草剂抗性作物、生物安全和生物修复方面表现出了巨大的潜能     

豹蛙酶研究进展

豹蛙酶是一种抗肿瘤药物,属于核糖核酸酶A超家族,它的核糖核酸酶活性低,细胞毒性较强,在体内外对多种肿瘤具有显著杀伤作用,是目前全球正在重点研究的100种新药之一。豹蛙酶用于恶性间皮瘤的治疗目前处于Ⅲ期临床研究阶段,用于非小细胞肺癌和其他固体肿瘤的治疗也处于临床Ⅰ期或Ⅱ期研究阶段。豹蛙酶通过多种机制导致肿瘤细胞凋亡,抗病毒作用是其进一步研究开发的重点。     

α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面的α-Gal抗原

目的:探讨脆弱类杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶清除猪细胞表面α-Gal抗原的作用。方法:用不同浓度的α-半乳糖苷酶酶解猪红细胞、猪胚肾细胞PK15、猪睾丸细胞ST和原代培养的猪成纤维细胞上的α-Gal抗原,酶解温度为26℃,作用时间为2 h;用25μg/m L的FITC-IB4凝集素标记酶解前后的细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面α-Gal抗原的清除率。结果:流式细胞检测结果表明,不同组织来源的猪细胞表面的α-Gal抗原的表达量明显不同,所需酶的剂量也不同,但其表面的α-Gal抗原均能被α-半乳糖苷酶清除。结论:脆弱类杆菌来源的α-半乳糖苷酶可以清除猪细胞表面的α-Gal抗原,提示该酶对降低异种移植引起的超急性排斥反应有重要意义。     

线粒体在细胞凋亡中的作用

线粒体在凋亡中的作用越来越受到重视,它在细胞凋亡中起中心作用,释放凋亡活性物质,介导凋亡的酶促反应,参与凋亡调控,决定细胞是凋亡还是坏死。     

多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白（MRP1）的表达抑制作用

为了研究多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白表达抑制的作用．我们构建了含有20个可以自身切割的顺式作用核酶和10个靶向MRP1基因特定位点的反式作用核酶的多核酶表达系统。利用RT—PCR、Westem blot和MTT分析了多核酶系统分别与MRP1靶基因质粒和MRP1 全长基因质粒共转染的HEK293细胞。结果显示．多核酶表达系统能够明显降低荧光融合蛋白在HEK293细胞中的表达。RT—PCR分析表明．懈用靶mRNA降低程度与多核酶表达系统所含的反式作用核酶数目有关。Westernblot分析显示了与RT—PCR相似的结果。Mrrr分析表明,多核酶表达系统能够逆转由MRP1基因转染HEK293细胞产生的多药耐药性。结果提示．含有多个核酶的表达系统对MRP1基因的抑制效应优于单核酶的表达系统。因此．该策略可能用于基因治疗肿瘤或其他疾病．     

Na+K+-ATP酶抑制引起的细胞凋亡和杂合性细胞死亡

Na^ -K^ -ATP酶也称Na^ 泵或Na^ -K^ 泵,是哺乳类细胞膜进行离子转运的跨膜载体蛋白。其基本作用是维持细胞膜内外Na^ -K^ 电化学梯度的平衡。近来研究表明,Na^ -K^ -ATP酶在细胞死亡中起重要作用,细胞K 缺失导致凋亡,在某些类型的细胞中,同一细胞兼具细胞肿胀、细胞器溶解等坏死特征和染色质凝集、DNA梯带、caspase级联反应等凋亡特征,呈现一种特殊的细胞死亡形式,即杂合性细胞死亡。     

甘露醇和6—BA处理对水稻细胞过氧化物酶及IAA氧化酶活性的影响

研究了甘露醇和６０ＢＡ处理对水稻服浮细胞再分化、过氧化物酶及ＩＡＡ氧化酶的影响。结果表明,甘露醇处理能延迟水稻细胞衰老,提高细胞再分化能力,降低细胞过氧化物酶和ＩＡＡ氧化酶活性,６－ＢＡ（２ｍｇ／Ｌ）虽然明显降低细胞过氧化物酶活性,但对ＩＡＡ氧化酶及细胞衰老无明显影响,讨论了过氧化物酶及ＩＡＡ氧化酶在水稻胚性细胞形成上的可能作用。     

钙调神经磷酸酶及其研究进展

钙调神经磷酸酶是蛋白磷酸酶家族中的一个成员，是细胞信号传递中的效应酶和调节酶，尤其在Ｃａ＾２＋信号传递系统中起着举足轻重的作用。同时，ＣａＮ又是典型的Ｃａ＾２＋／ＣａＭ结合酶、调节酶。ＣａＮ参与了多种重要的细胞过程，包括它和学习记忆及老年性痴呆的关系，以及它在Ｔ细胞活化过程中的关键作用和在细胞死亡中的重要作用等。     

利用渗透交联固定化细胞促进生物转化

固定化技术已在生物工程中得到广泛的实际应用,特别是应用于生物转化以提高酶或细胞的稳定性,实现连续操作等。对于含胞内酶的细胞的生物转化．一般先破碎细胞,使酶释放出来,再进行酶固定化。由于酶的稳定性通常与细胞膜的结台有关^[1],细胞破碎中常导致酶的失活。如果不破碎细胞,对完整细胞固定化,又会有传质困难抑制酶活力的发挥。我们研究出渗透交联固定化细胞技术以解决这个矛盾。先采用某种试剂(多为表面活性剂)处理细胞,提高细胞的通透性,再进行交联固定化．可以保证酶的活力破坏较小,又减小了传质阻力。既提高了固定化细胞的稳定性,又提高了固定化细胞的表观酶活。称这种固定化技术为渗透交联固定化细胞技术。Prabhuaney等采用CTAB-戊二醛处理聚丙烯酰胺凝胶包理的含青霉素酰化酶E. coli细胞^[2]。Nmhida采用1,6-己二胺-戊二醛处理含天冬氨酸酶的E．Coli细胞^[3]。渗透交联固定化处理会损伤细胞和酶是这种技术的一个矛盾。本文采用多乙烯多胺-戊二处理方法．因多乙烯多胺既起到表面活性剂的作用．又是交联剂。而且渗透能力比CTAB和1,6-已二 胺为低,故对细胞和酶损伤较小。     

产延胡索酸酶的皱褶假丝酵母固定化细胞

1．比较了用聚丙烯酰胺凝胶、琼脂凝胶和明胶三种包埋方法制备的固定化细胞的酶话力和回收率。其中以聚}呵烯酰胺凝胶包埋的细胞酶的表现活力和回收率最高,表现活力最高为723 7单位／克细胞,回收率最高为90％左右。 2. 比较了固定化细胞和自然细胞延胡索酸酶的一般性质：pH,温度和二价金槭离子对两者的酶促反应速度的影响。固定化细胞热稳定性比自然细胞好一些。Mn++,Mg++,Ca++和Fe++二价金属离子对两种细胞酶的热钝化均无保护作用。