“瘤苗”——细胞因子转导人肿瘤细胞

Ⅰ基因治疗的现状自１９９０年９月美国国立卫生研究院（ＮＩＨ）及食品药物管理局（ＦＤＡ）批准第一个腺苷酸脱氨酶缺乏－严重联合免疫缺陷症（ＡＤＡ－ＳＣＩＤ）临床基因治疗草案至今正好１０年。从美国ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ出版社网站１９９９年６月发布的一些信息,可以了解这１０年国际上有关基因治疗研究（指临床）进展的概况。包括我国在内全世界已有２１个国家开展基因治疗临床试验,现有３８０个临床治疗草...     

细胞因子基因转导对人乳腺癌细胞MHC抗原及细胞膜糖蛋白表达的影响

为探讨细胞因子基因(人IL-2、IL-6)转导对于肿瘤细胞膜MHC抗原及细胞膜糖蛋白表达调控的影响,本文利用脂质体介导的方法,将含人IL-6、IL-2基因的逆转录病毒载体分别导入人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,采用间接免疫荧光染色流式细胞仪测定法,对基因转导的瘤细胞细胞膜糖蛋白及MHC抗原表达进行测定。结果表明经两种基因修饰的MCF-7细胞MHCⅠ型抗原表达均获得增强,此外,基因转导细胞可程度不同地表现出细胞膜多种糖蛋白表达的变化。提示肿瘤细胞膜抗原及糖蛋白表达的改变可能是细胞因子基因转导影响肿瘤细胞免疫原性的重要结构基础。     

细胞因子基因导入人肿瘤细胞的方法及鉴定

从人外周血单核细胞中抽提总ＲＮＡ为模板,分别用５‘含ＥｃｏＲⅠ３含ＢａｍＨＩ限制性酶切位点的细胞因子基因特异引物成含信号肽全长ＩＬ－２,γ－ＩＦＮ及α－ＴＮＦｃＤＮＡ。然后将这些细胞因子ｃＤＮＡ分别重组入含筛选标记基因Ｎｅｏ逆转录病毒载体ＬＸＳＮ中,采用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞系ＰＡ３１７。分别收集到含ＩＦＮ－γ,ＴＮＦ－α和ＩＬ－２基因的缺陷型逆转录病毒上清及只具空白载体质粒ｐＬＸＳ     

GM—CSF基因瘤苗抗肿瘤活性的实验研究

转细胞因子基因的肿瘤细胞疫苗是当今肿瘤免疫－基因治疗研究的热点。本文用逆转录病毒载体将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子基因转入大鼠Ｗａｌｋｅｒ瘤细胞株ＷＲＣ２５６,经Ｘ－射线灭活制备肿瘤疫苗。经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测证实,ＧＭ－ＣＳＦ基因已成功地导入了ＷＲＣ２５６细胞。     

淋巴抑瘤素对五株肿瘤细胞株的体外抑瘤效应的分析研究

淋巴细胞经刺激后分泌一种多肽类物质,这种细胞因子被称为淋巴抑瘤素。在体外培养中发现不同来源的肿瘤细胞对淋巴抑瘤素的敏感性是不同的,表现为三种类型:强反应株,此类细胞对其抑瘤效应反应强烈,抑制率达90％以上;弱反应株,此类细胞的抑制率在70％左右;另一类为负反应株,此类细胞对淋巴抑瘤素不但不表现出抑瘤效应,反而出现助长肿瘤细胞生长的效应。由于体外测定中有上述现象,所以建议在体内应用这类细胞因子时,应像抗菌素测抗菌谱一样测定其抗瘤谱,以利于对症用药。     

Ⅰ-A~k基因克隆转导及对肿瘤细胞成瘤的影响

采用ＲＴＰＣＲ方法合成小鼠ＭＨＣⅡ类分子ⅠＡｋ基因α和β链ｃＤＮＡ,插入逆转录病毒载体ｐＬＳＸＮ,构建ⅠＡｋα和ⅠＡｋβ表达载体,采用脂质体介导的重组质粒转移方法将ⅠＡｋα和ⅠＡｋβ基因导入ＥＬ４小鼠淋巴瘤细胞和Ｐ８１５小鼠肥大细胞瘤细胞,经流式细胞仪检测在细胞表面有ⅠＡｋ表达．将以上两种细胞注射到同源小鼠Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ２ｄ）皮下,观察到肿瘤产生后又消退,证明在肿瘤细胞中单独导入同种异型ＭＨＣⅡ类分子基因也能激活肿瘤的细胞免疫,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础．     

携细胞因子的溶瘤病毒的研究现状CSCD

随着科技的发展和对肿瘤认识的不断深入,针对肿瘤的治疗手段除了常规的放化疗和外科手术之外,免疫治疗已经逐渐兴起,并展现了良好的发展前景。以溶瘤病毒为代表的肿瘤免疫治疗方法已逐渐成为肿瘤治疗领域的研究热点,本文就溶瘤病毒的杀瘤原理、种类及携带细胞因子的溶瘤病毒在肿瘤治疗中的研究现状进行综述。     

肿瘤抗原基因转导树突状细胞的研究进展

树突状细胞 (Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ ,ＤＣ)是体内功能最强的抗原提呈细胞 ,它们的表面表达主要组织相容性复合物 (ＭａｊｏｒＨｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙＣｏｍｐｌｅｘ ,ＭＨＣ)分子和共刺激分子 ,为淋巴细胞的活化提供双信号。ＤＣ活化后分泌ＩＬ - 12、ＩＬ - 18及干扰素等细胞因子刺激辅助型Ｔ细胞 (ＨｅｌｐｅｒＴｃｅｌｌｓ ,ＴＨ)增殖 ,促使ＴＨ0 和ＴＨ2 细胞向ＴＨ1细胞分化 ,并强烈激发ＴＨ1型免疫应答[1] ,从而增强机体的抗肿瘤、抗感染、自身免疫性疾病和移植排斥等细胞免疫反应。应用ＤＣ的抗肿瘤实验主要是…     

Ⅰ-Ak基因克隆转导及对肿瘤细胞成瘤的影响

采用RT-PCR方法合成小鼠MHCⅡ类分子Ⅰ-A^k基因α和β链cDNA,插入逆转录病毒载体pLSXN,构建Ⅰ-A^k α和Ⅰ-A^k β表达载体,采用脂质体介导的重组质粒转移方法将Ⅰ-A^k α和Ⅰ-A^k β基因导入EL4小鼠淋巴瘤细胞和P815小鼠肥大细胞瘤细胞,经流式细胞仪检测在细胞表面有Ⅰ-A^k表达.将以上两种细胞注射到同源小鼠C57BL/6(H-2^d)皮下,观察到肿瘤产生后又消退,证明在肿瘤细胞中单独导入同种异型MHCⅡ类分子基因也能激活肿瘤的细胞免疫,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础.     

抗巨噬细胞移动因子对病毒瘤苗免疫效果的影响

给小鼠腹腔注入AM F 能抑制巨噬细胞的移动,并且能影响瘤苗的免疫效果,由原来70% 的保护率下降至33.3% (P< 0.01)。而NDV 等病毒能降低AM F 的抑制作用,由30% 的存活率上升为60% ～70% (P< 0.01)。当抗病毒抗体存在时,又失去了病毒拮抗AM F的抑制作用,由60% ～70% 的存活率下降为20% ～30% 存活率     

重组人干细胞因子

选择大肠杆菌的偏性密码,合成了可溶形式的人干细胞因子的ＣＤＮＡ。通过ＰＣＲ完成了合成片段的一次性组装与克隆,并在Ｅ．ｃｏｌｉ中进行了温控型的高效表达,目的蛋白中菌体总蛋白的４０％左右。表达产物复性后,经离子交换,凝胶过滤层析,得到了电泳纯的ｒｈＳＣＦ。经测定,ｒｈＳＣＦ氨基端序更及其它理化性质一天然ｈＳＣＦ完全一致,并要刺激人骨髓细胞的增殖,导致粒、巨核系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）大小、数量的明显增加,     

人乳头瘤病毒E5基因

本对人乳头瘤病毒早期基因之一Ｅ５基因的致癌性的分子机理进行了综述,对Ｅ５蛋白与生长因子受体的相互作用,一些癌基因的反式激活作用及细胞缝隙在连接的损伤作用进行了讨论。     

小鼠白细胞介素21瘤苗的构建及其抗肿瘤效应研究

目的:建立稳定表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的肿瘤细胞瘤苗,观察其在小鼠体内是否能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。方法:将已鉴定的重组质粒pcDNA3.1/mIL-21用脂质体法转染Sp2/0细胞制备瘤苗,RT-PCR法鉴定瘤苗中mIL-21的表达。通过流式细胞仪检测细胞周期来反映瘤苗体外增殖活性,再将其接种BALB/c小鼠,监测肿瘤生长情况,观察mIL-21瘤苗诱导的抗肿瘤效应;用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4含量。结果:得到稳定表达mIL-21的瘤苗Sp2/0-mIL-21。与对照组相比,体外增殖活性无差异。皮下接种BALB/c小鼠后,肿瘤生长缓慢,部分小鼠无瘤体生长并长期存活;用野生株Sp2/0瘤细胞再次攻击未长肿瘤的实验小鼠,4周后亦未见肿瘤生长。接种瘤苗小鼠血清中IFN-γ水平明显上升,IL-4无明显增高。结论:成功构建了mIL-21瘤苗Sp2/0-mIL-21,其能诱导有效的抗肿瘤免疫反应及免疫记忆效应。     

重组人干细胞因子

选择大肠杆菌的偏性密码,合成了可溶形式的人干细胞因子（ｈＳＣＦ）的ｃＤＮＡ。通过ＰＣＲ完成了合成片段的一次性组装与克隆,并在Ｅ．ｃｏｌｉ中进行了温控型的高效表达,目的蛋白可占菌体总蛋白的４０％左右。表达产物复性后,经离子交换、凝胶过滤层析,得到了电泳纯的ｒｈＳＣＦ。经测定,ｒｈＳＣＦ氨基端序列及其它理化性质与天然ｈＳＣＦ完全一致,并可刺激人骨髓细胞的增殖,导致粒、巨核系集落（ＣＦＵ－ＧＭ）大小、数量的明显增加,显示天然ｈＳＣＦ的生物活性。     

人乳头瘤病毒基因检测方法的进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）的部分型别与某些性病和宫颈病变有关,特别是宫颈癌的发生发展的重要因素,因而ＨＰＶ的检测显得更为重要。本文综述几年来国内、外关于ＨＰＶ基因检测方法的进展及评价,特别是多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法的应用。     

人乳头瘤病毒转化基因致癌的分子机制研究进展

人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）与宫颈癌及其他生殖道和肛周等恶性肿瘤有密切关系。本文综述了近年来ＨＰＶ１６转化基因在转录耕接、转录调控及致癌机制等方面的研究进展。     

人乳头瘤病毒致癌机制的研究进展

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位,每年约有50万宫颈癌新发病例,其中80％在发展中国家,我国每年约有新发病例13．15万,占世界新发病例的28．8％。近年来宫颈癌发病年龄趋向年轻化,从原来的40-50岁提前到35岁左右。人     

人乳头瘤病毒致瘤的免疫机制研究进展

人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）是一种重要的ＤＮＡ肿瘤病毒。本文就近几年来ＨＰＶ致瘤的免疫机制从免疫系统、免疫细胞、免疫因子等方面的研究作了综述。     

人乳头瘤病毒致癌机制的研究进展

宫颈癌发病率居全球女性恶性肿瘤的第二位,每年约有50万宫颈癌新发病例,其中80%在发展中国家,我国每年约有新发病例13.15万,占世界新发病例的28.8%.近年来宫颈癌发病年龄趋向年轻化,从原来的40～50岁提前到35岁左右[1].     

MCF细胞中人干细胞因子基因新调控元件的鉴定

人干细胞因子（ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ,ｈＳＣＦ）是一个多功能细胞生长因子,调节某些哺乳动物干细胞如原始胚细胞的增殖、分化和移居。为研究ｈＳＣＦ基因的转录调控机理,对ｈＳＣＦ基因５’旁侧序列不同长度片段进行亚克隆,构建系列重组ｐＧＬ２荧光素酶报告基因载体,转染人乳腺癌细胞株ＭＣＦ并检测ｌｕｃ基因一过性表达活性。然后应用电泳迁移率变动分析技术,鉴定活性片段与ＭＣＦ细胞核抽提蛋白质