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原位杂交和原位PCR技术在鱼类基因定位中的应用 总被引:5,自引:0,他引:5
染色体原位杂交( in situ hybridization, ISH)是基因物理定位的主要方法之一,它根据核酸分子碱基互补配对的原理,将标记的外源核酸探针与染色体上变性处理后的单链DNA互补配对,再经检测而将靶顺序在染色体上的位置显示出来。 原位PCR技术是将原位杂交与PCR技术有机的结合,在原位扩增目的DNA片段,并在原位检测其扩增产物,因而兼有PCR及原位杂交技术二者的优越性:既可以同时获得组织及细胞的形态结构信息与分子信息,进行定性、定位分析,又具有比原位杂交更好的敏感性与专一性。 染色体原位… 相似文献
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LDL受体基因cDNA的RT—PCR分离,克隆及其在RFLP中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaI片段的作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuI位点是个限制性片段长度多态性位点,所克隆的cDNA含有可译框架的全 相似文献
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以DEV基因组DNA为模板, 用简并PCR、改良Targeted gene walking PCR、改良的热不对称交错PCR和Long-PCR, 获得了5350 bp、11083 bp和2905 bp三段DEV未知基因片段, DNA序列分析发现包含9个开放阅读框, 将这些序列提交GenBank分别获得的登录号为: EF554396~EF554403。结果表明, 多种PCR方法联合使用可以高效的实现对鸭肠炎病毒未知基因的克隆。 相似文献
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谱系地理学研究旨在探究历史上发生的影响目前遗传谱系系统发育和空间分布格局关系的生态与进化过程。叶绿体DNA具有单亲遗传、低突变率、单倍体等特征, 其分子标记不同程度地保留着植物长期进化的历史遗传痕迹, 有助于深度解析谱系地理变异的形成机制。本文探讨了上述特征是怎样影响分子标记的选择、扩大或缩小群体遗传结构分化、延长或缩短空间基因溯祖时间、促进或阻碍种间基因渐渗及谱系分选(复系、并系和单系形成)进程, 重点阐述了这些影响过程的理论基础, 并结合实际例子阐述谱系地理研究进展。由于位点间在突变率、选择强度及它们与漂变互作等方面存在异质性, 今后一个研究重点就是基于叶绿体全基因组序列分析谱系地理变化格局, 包括分析DNA位点间的基因渐渗或基因流动程度差异分布及沿着叶绿体DNA序列上谱系分选差异分布。 相似文献
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本文综述了PCR技术的来源、原理以及PCR技术的研究进展,此外还着重叙述了PCR技术在畜牧业中的应用及其展望,指出PCR技术在畜牧业中正发挥着越来越重要的作用。 相似文献
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利用RT-PCR技术分离低密度脂蛋白受体基因cDNA,将长为2605bp的cDNA插入质粒pJN6,并经全序列测定证实,该序列与已报道序列相比,存在两个变异碱基,即第754位C→T,和1654位的G→A,这两个变异碱基并不改变编码的氨基酸,利用LDL受体基因cDNA中的ClaⅠ片段作为探针,检测到LDL受体基因上外显子8的StuⅠ位点是个限制性片段长度多态性位点。所克隆的cDNA含有可译框架的全部密码,因此可作为基因表达材料。 相似文献
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一种新型免疫PCR基因探针的构建及其在诊断中的初步研究 总被引:5,自引:0,他引:5
利用叶绿素分子 (chlorophyll)作为共价连接蛋白质与核酸的中间分子 ,构建了甲胎蛋白 (α fetoprotein ,AFP)抗体的基因探针 ,并用构建的基因探针通过免疫PCR对AFP进行了诊断的初步研究 .结果表明 ,其检测灵敏度比ELISA高 1 0 4~1 0 5 倍 .基因探针的构建方法完全避免了蛋白质与有机溶剂的接触 ,基本保持了抗体的原有活性 ;并且人为地将蛋白质定向地锚定在dsDNA分子上 ,使PCR扩增不受任何影响 .构建的基因探针采用一定的保藏方法 ,室温中活性保存至少 6个月 .构建方法精简 ,成本低 ,易于推广应用 相似文献
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简并PCR技术及其在基因克隆中的应用 总被引:14,自引:0,他引:14
本文简要介绍简并PCR技术,包括什么是简并引物,如何设计简并引物,进行简并PCR的反应条件,应用简并PCR获得全长基因的方法和简并PCR技术的应用范围,并对简并PCR技术的局限性及其新进展进行讨论。在此基础上,简述基因的克隆策略以及简并PCR技术在基因克隆中的应用。简并PCR技术是寻找和发现“新”基因或蛋白质家族新成员的一种非常有用的工具。
Abstract:Degenerate PCR is introduced in this paper,including what is degenerate PCR,how to design degenerate primers,how to optimize degenerate PCR parameters,how to applying degenerate PCR to obtain full-length gene and which fields can apply degenerate PCR.The limits and recent advances of degenerate PCR are also discussed.Based on this introduction,strategies of gene cloning and applications of degenerate PCR in gene cloning are summarized in brief.Degenerate PCR is a very useful tool for searching and discovering new genes and new members of a protein family. 相似文献
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毛细胞白血病经常与5q13.3断裂位点相关联,该断裂位点区域及位于这一区域的重要基因有待研究。我们探索了DNA纤维荧光原位杂交方法(即DNA纤维FISH)检测该断裂位点的可行性。实验选用含有断裂位点区域的两个基因组克隆及位于断裂位上是的两个cos质粒探针与带有结构性到位(5)(p13.1q13.3)的线性DNA共杂交(DNA来自HCL患者的细胞系)。实验证明该断裂位点将探针信号一分为二。根据这些结果描绘出断裂位点区域图。研究表明,DNA纤维FISH方法是绘制高精度物理图谱和检出遗传重排的一种有效的研究手段。 相似文献
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PCR芯片实质上就是固定有与研究对象有关的许多已知基因的引物阵列并可用于PCR检测的固相载体,其制作时最关键的是目的基因的引物设计。与基于杂交的芯片技术不同,PCR芯片技术是一种高通量的,准确、灵敏的定量检测基因表达的技术,它将待测基因的引物固定于固相载体上,通过简单的、经过优化的定量PCR体系和荧光定量PCR仪,实现待检样品中已知基因的扩增,用于定量检测待检样品中已知基因的表达情况。PCR芯片由于其操作简单、结果准确、数据产出快而多等特点,已应用于疾病发病机制、药物作用机理和细菌分型等研究领域,并将在生命科学研究领域得到更为广泛的应用。 相似文献
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PCR技术应用的新进展 总被引:3,自引:0,他引:3
近年来,随着PCR技术方法学的逐步改进和完善,更加显示出它的实用性.这不仅扩大了其用武之地,也促进了分子生物学的快速发展.文章着重介绍PCR在基因工程和蛋白质工程应用中的某些新进展,包括不需连接的克隆技术、随机引导/定位PCR、cDNA末端随机快速扩增、重组PCR和大引物PCR. 相似文献
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用克隆池PCR法筛选小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC文库获得抗病基因候选克隆 总被引:7,自引:0,他引:7
用根据抗病基因保守区设计的一对简并性引物,从小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL cDNA中PCR扩增获得一个具有抗病基因核苷酸结合位点(Nucleotide binding site,NBS)结构特点的DNA片段克隆N7。从小麦-簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC(Transformation-competent artificial chromosome,TAC)文库的22块96孔板提取所有2112个克隆池(每个池含约1000个克隆)的质粒,再根据N7的核苷酸序列设计一对特异引物,用克隆池PCR(pooled PCR)法经分级筛选从文库中获得一个阳性克隆。以N7为探针,通过Southern杂交证实了该TAC克隆为真正含有抗病候选基因的克隆。研究结果表明克隆池PCR法对克隆数目巨大的基因组文库的筛选很有效。 相似文献
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利用PCR技术,从正常人胎肝染色体DNA中克隆到长度为1572bp的人促红细胞生成素(EPO)基因组基因片段,它包含除第一个外显子和第一个内含子外所有外显子及内含子。再人工合成13bp外显子1的编码区,并与1572bp片段拼接,从而得到除第一个内含子的人促红细胞生成素基因组基因。将克隆得到的EPO基因插入载体pSV2-dhfr得到pSV2-EPO表达载体,转染COS-7细胞后获得高效表达。利用自行研制的小鼠抗人EPO单抗及兔抗人EPO多抗,对表达产物进行ELISA定量测定,细胞分泌EPO量高达251±7U/ml.Krystal法测得体外生物活性241.5±6.5U/ml.用EPO单抗免疫沉淀结合SDS-PAGE对转染细胞的表达产物做了进一步鉴定,清晰地看到了EPO条带。从高效表达EPO的转染细胞中分离纯化mRNA,用RT-PCR方法扩增并克隆到EPO的cDNA,这为EPO在其它系统中的表达及EPO的功能与结构的研究打下了基础。 相似文献
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利用PCR技术克隆乳链菌肽前体基因 总被引:3,自引:0,他引:3
乳链菌肽(Nisin)是由核糖体合成,经翻译后修饰、加工而含有稀有氨基酸的一种小肽分子。它对许多革兰氏阳性菌,包括利斯特氏菌属、梭菌属和芽孢杆菌属这些腐败苗和病原菌有强烈抑制作用。 已被50多个国家和地区广泛应用于乳制品、罐头食品、高蛋白食品及乙醇饮料的防腐保鲜,是越来越 受到人们重视的一种无毒的天然食品防腐剂⑴。对乳链菌肽分子结构与功能及生物合成遗传控制的研 究不仅有应用价值,而且有其理论意义。本实验室以产乳链菌肽的乳酸乳酸球菌ATCC 11454总DNA 为模板,利用PCR技术成功地扩增了乳链菌肽前体基因,并对其核苷酸序列进行了测定。 相似文献