植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

转hDAF基因小鼠的构建(英文)

本工作构建了含有ｈＤＡＦ基因的转基因小鼠,以便研究ｈＤＡＦ基因能否消除异种器官移植中的排斥反应。 采用ＤＮＡ重组的方法构建ｈＤＡＦ基因的表达载体ｐＳＰ６４ＨＰ（Ｆｉｇ．１）。通过受精卵显微注射,将其中的目的基因片段,转移到小鼠体内,建立转基因小鼠。再通过Ｄｏｔ ｂｌｏｔｔｉｎｇ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ杂交方法对出生小鼠的基因组特征进行查证。 连续两次对直接裂解菌液做ＰＣＲ扩增,筛选出重组质粒（Ｆｉｇ．２＆３）,酶切图谱（Ｆｉｇ．４）和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交（Ｆｉｇ．５）分析结果与预期吻合,出现预期条带;小鼠受精卵注射后存活比率为７７．９％,受精卵的发育率为３．４％,出生小鼠中,１０．５％出现清晰杂交信号。 表明：ｈＤＡＦ基因表达载体构建成功;并整合入小鼠基因组中。     

寡核苷酸阵列比较基因组杂交技术及其应用

阵列-比较基因组杂交技术（array comparative genomic hybridization, array CGH）能在全基因组水平和/或高分辨率基础上检测染色体拷贝数的变化,主要应用于遗传学和肿瘤学研究。Array CGH中微阵列探针通常是PCR扩增的BAC克隆或cDNA分子。最近几年,寡核苷酸阵列比较基因组杂交（oligonucleotide array CGH, oaCGH）逐渐开始应用。oaCGH与BAC array CGH比较,具有操作更简便、探针设计更灵活、分辨率更高等多项优点,预计oaCGH将逐步取代利用BAC克隆片段或cDNA分子的array CGH。oaCGH的应用及其与其它高通量检测技术的结合将促进新的癌症相关基因、肿瘤耐药基因的发现。本文综述了现有主要oaCGH平台在空间分辨率、探针长度、灵敏度、特异性等方面的特点及其应用,概括了oaCGH近年来的进展。     

镰孢属几种植物病原真菌分子核型的研究

利用脉冲电场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ－ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ）,研究了４株串珠镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、１株尖镰孢（F．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、１株茄镰孢（Ｆ．ｓｏｌａｎｉ）和１株Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．的分子核型以及不同地域和寄主来源的串珠镰孢种内菌株间的分子核型差异。以凝胶包埋法（不破除分生孢子细胞壁）制备供试菌株电泳样本,采用３组条件组合进行电泳,分离出供试串珠镰孢完整染色体ＤＮＡ１０～１３条,分子量分布范围０．７Ｍｂ～６．９Ｍｂ,基因组大小为４２．２６Ｍｂ～４７．７５Ｍｂ;尖镰孢８条,分子量分布范围１．２Ｍｂ～６．７Ｍｂ,基因组大小为３２．２５Ｍｂ;茄镰孢６条,分子量分布范围２．４Ｍｂ～６．３Ｍｂ,基因组大小为２５．２Ｍｂ;Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．９条,分子量分布范围０．８Ｍｂ～６．８Ｍｂ,基因组大小为３６．４５Ｍｂ。结果表明,供试４种镰孢菌染色体数目、ＤＮＡ分子量及基因组大小都有较大不同,分子核型差异较大。不同来源的串珠镰孢种内菌株间分子核型亦有明显差异。     

镰孢属几种植物病原真菌分子核型的研究*

利用脉冲电场凝胶电泳（ｐｕｌｓｅｄ－ｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ,ＰＦＧＥ）,研究了４株串珠镰孢（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）、１株尖镰孢（F．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、１株茄镰孢（Ｆ．ｓｏｌａｎｉ）和１株Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．的分子核型以及不同地域和寄主来源的串珠镰孢种内菌株间的分子核型差异。以凝胶包埋法（不破除分生孢子细胞壁）制备供试菌株电泳样本,采用３组条件组合进行电泳,分离出供试串珠镰孢完整染色体ＤＮＡ１０～１３条,分子量分布范围０．７Ｍｂ～６．９Ｍｂ,基因组大小为４２．２６Ｍｂ～４７．７５Ｍｂ;尖镰孢８条,分子量分布范围１．２Ｍｂ～６．７Ｍｂ,基因组大小为３２．２５Ｍｂ;茄镰孢６条,分子量分布范围２．４Ｍｂ～６．３Ｍｂ,基因组大小为２５．２Ｍｂ;Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．９条,分子量分布范围０．８Ｍｂ～６．８Ｍｂ,基因组大小为３６．４５Ｍｂ。结果表明,供试４种镰孢菌染色体数目、ＤＮＡ分子量及基因组大小都有较大不同,分子核型差异较大。不同来源的串珠镰孢种内菌株间分子核型亦有明显差异。     

高秆野生稻与栽培稻杂交后代的RFLP分析

应用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析了高秆野生稻（Ｏｒｙｚａ ａｌｔａ Ｓｗ ａｌｌｅｎ）与栽培稻（Ｏ．ｓａｔｉｖａ Ｌ．）之间的多态性差异,以及二者杂交后通过胚挽救获得的后代植株的染色体大致组成情况。结果表明,高杆野生稻基因组与栽培稻基因组差别极大,经胚挽救获得的杂种后代植株大部分为三倍体,不育;两个部分不育的植株中发生了染色体丢失,基因组趋向栽培稻的基因组。结果还表明,在野生稻与栽培稻杂交获得后代的过程中,可能存在一种非传统的遗传重组机制导致野生稻染色体片段向栽培稻基因组的“渗入”     

黄瓜中LFY同源基因CFL的克隆和分析

ＬＦＹ同源基因在高等植物花分生组织的发生中发挥着重要的作用。克隆了黄瓜（ Ｃｕｃｕｍｉｓｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．） 中的ＬＦＹ同源基因ＣＦＬ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交的结果显示它在黄瓜基因组中为单拷贝基因,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交结果显示它主要在花芽和幼叶中表达。讨论了ＣＦＬ基因在黄瓜开花和营养生长中可能发挥的作用     

水稻DH群体的分子连锁图谱及基因组分析

利用扩大的籼粳杂交来源（窄叶青８号×京系１７）的水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）加倍单倍体（ＤＨ）群体,构建了包含４４４个位点的分子连锁图谱,覆盖水稻基因组１９６２ｃＭ（ｃｅｎｔｉＭｏｒｇｏｎ）,标记间的平均图距小于５ｃＭ。此图谱包括２７６个ＲＦＬＰ标记、３４个ＲＡＰＤ标记、８９个微卫星标记、１０个ＡＦＬＰ标记、２６个端粒重复相关序列（ＴＡＳ）标记以及９个同工酶标记。该遗传图谱与其它的水稻高密度遗传图谱具有较高的可比性,并有自己的特点,适于进行各种持续性的遗传学研究     

原位分子杂交法检测恙螨体内肾综合征出血热病毒核酸的研究

为探讨肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）在恙螨体内的分布和定位,采用原位分子杂交技术检测恙螨体内ＨＦＲＳＶＲＮＡ。结果发现：原位分子杂交技术的检出阳性率较ＩＦＡＴ高;ＨＦＲＳＶ阳性信号颗粒呈弥散分布,多见于恙螨幼虫和若虫的腹部组织细胞内,该部位是恙螨的卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞。前体组织细胞内少见;个别幼虫和若虫的前足和中足细胞内亦可见到ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号。在原位分子杂交中,若虫组织细胞内的ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号较幼虫密集而且量多,表明ＨＦＲＳＶ在恙螨体内可传递并有增殖现象     

用gFM31探针进行谷子品种的指纹分析

用高度多态性探针ｇＦＭ３１对５９个谷子（ＳｅｔａｒｉａｉｔａｒｌｉｃａＢｅａｕｖ．）品种（包括地方品种、育成品种及品系）进行ＤＮＡ指纹分析,共鉴别出５８种类型,而黑谷和黑粒１５１６给出完全相同的带型,二者有可能是同一材料。通过对ｇＦＭ３１ＤＮＡ序列分析,未发现其中有小卫星ＤＮＡ和微卫星ＤＮＡ序列。该探针虽在谷子品种中显示很高的多态性,但与禾谷类的其他物种的ＤＮＡ杂交信号微弱,表现出较强的谷子基因组特异性。     

FasL—Fas／APO—1（CD95）系统

Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）与Ｆａｓ受体（Ｆａｓ,即ＡＰＯ－１,又称ＣＤ９５）分别属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ）家族,以膜分子或可溶性分子形式存在于哺乳类机体内。ＦａｓＬ或Ｆａｓ单克隆抗体（ＦａｓｍＡｂ）与Ｆａｓ结合可引起Ｆａｓ了性反应细胞的功能增强,继而出现程序性细胞死亡（ＰＣＤ）。ＦａｓＬ与Ｆａｓ相互作用及其所介导的信息途径是目前ＰＣＤ研究的重要内容之一。     

肝炎病毒蛋白对双链RNA依赖性蛋白激酶的调节作用

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）蛋白以及丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ与双链ＲＮＡ依赖性蛋白激酶（ＰＫＲ）之间可以进行特异性结合,使病毒感染的靶细胞对干扰素（ＩＦＮ）的敏感性发生了改变。同时,肝炎病毒基因组及其编码产物与感染靶细胞中ＰＫＲ分子之间的结合,将产生广泛的生物学效应。     

尾状山羊草与硬粒小麦,普通小麦的杂交及外源染色质检测

尾状山羊草（AegilopscaudataL．）具有丰富的抗病虫和高赖氨酸、高蛋白优良性状,是进行小麦（TriticumaestivumL．）遗传改良的重要遗传资源。合成了硬粒小麦（TriticumdurumDesf．）-尾状山羊草双二倍体、进行了普通小麦与双二倍体的杂交。并以作者克隆的尾状山羊草C基因组特异重复序列PAeca212为探针,对上述杂交后代的花粉母细胞进行了染色体原位杂交检测。证实了新合成的双二倍体中有7对C基因组染色体;在F2中检测到C基因组染色体的自发纯合易位,显示出从C基因组向小麦转移外源基因的光明前景。     

微阵列（microarrays）技术及其应用

微阵列分为cDNA微阵列和寡聚核苷酸微阵列,微阵列上“印”有大量已知部分序列的DNA探针,微阵列技术就是利用分子杂交原理,使同时被比较的标本（用同位素或荧光素标记）与微阵列杂交,通过检测杂交信号强度及数据处理,把他们转化成不同标本中特异基因的丰度,从而全国比较不同标本的基因表达水平的差异,微阵列技术是一种探索基因组功能的有力手段。     

第18届国际生物化学与分子生物学学术会议将于英国伯明翰举行

国际生物化学与分子生物学联合会（ＩＵＢＭＢ）和欧洲生物化学联合会（ＦＥＢＳ）将于２０００年７月１６日至７月２０日,在英国伯明翰市召开“第１８届国际生物化学与分子生物学学术会议”。会议的主题是：基因组计划完成之后…：在第三个千年中,对分子和细胞的认识与开发。会议主要的论题是：基因组：序列和结构;进化和调控;基因组和生物信息学;基因组：功能分析;基因组的生物技术应用;免疫识别和应答;基因组的实验功能分析;神经退行性变疾病和朊病毒;细胞生长和死亡;酶催化作用：机制和途径;运输和导向;蛋白质折叠;代谢,…     

胃肠道肿瘤TGF－α基因表达的研究

用分子杂交技术及流式细胞方法研究了转化生长因子α（ＴＧＦα）在人胃肠道肿瘤组织中的表达。结果提示：ＴＧＦα在胃肠道肿瘤中起重要作用,其表达可受ＴＰＡ的调节。     

一个AA基因组特异的串联重复序列的克隆及其在中国普通野生稻和栽？…

从籼稻“窄叶青”中克隆到了１个重复序列（ｐＯｓ１３９）。经分子杂交证明,ｐＯｓ１３９为一稻属内ＡＡ基因组特异的串联重复序列。序列分析表明,ｐＯｓ１３９以３５５ｂｐ为一重复单位。以ｐＯｓ１３９为探针对２９份中国普通野生稻和４３份中国栽培稻的基因组ＤＮＡ进行的分子杂交表现,籼、粳亚种之间具有明显的差异,籼稻杂交带数明显多于粳稻,普通野生稻与籼稻相似,具有较多的杂交带数。拷贝数测定结果表明,ｐＯｓ１３９     

二倍体大白菜与四倍体结球甘蓝杂种的获得及其SSR鉴定与GISH分析

为创制结球甘蓝-大白菜异附加系、异代换系、易位系,利用二倍体大白菜（AA,2n=20）为母本与四倍体结球甘蓝（CCCC,2n=36）杂交,通过胚挽救获得了异源三倍体杂交种（ACC,2n=28）;利用SSR对杂交种进行鉴定,6株F1均能扩增出父本的特征带,表明这6株是真杂交种。异源三倍体基因组原位杂交结果表明,未加封阻时,大白菜与结球甘蓝染色体均有较强的杂交信号;当加入适当比例的封阻时,来自大白菜和结球甘蓝染色体上的杂交信号强弱有明显差别;封阻过度时,大白菜与结球甘蓝染色体的杂交信号都十分微弱。说明大白菜与结球甘蓝基因组具有较高的同源性。     

病原菌毒力岛研究进展

毒力岛作为基因组岛的一种亚类,是细菌染色体上具有特定结构和功能特征的可移动基因大片段,经基因水平转移（转导、接合或转化）获得,可使细菌基因组进化在短期内发生“量的飞跃”,直接或间接增强细菌的生态适应性,与病原菌的致病性密切相关。毒力岛存在于多种动植物病原细菌中,对于细菌的毒力变异、遗传进化甚至新病原亚种形成有重要意义。简要综述了病原菌毒力岛的研究进展,介绍了毒力岛的结构、功能特征及其在病原菌进化中作用。     

一个AA基因组特异的串联重复序列的克隆及其在中国普通野生稻和栽培稻中的分化特征

从籼稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．ｓｐｐ．ｉｎｄｉｃａ）“窄叶青”中克隆到了１个重复序列（ｐＯｓ１３９）。经分子杂交证明,ｐＯｓ１３９为一稻属内ＡＡ基因组特异的串联重复序列。序列分析表明,ｐＯｓ１３９以３５５ｂｐ为一重复单位。以ｐＯｓ１３９为探针对２９份中国普通野生稻和４３份中国栽培稻的基因组ＤＮＡ进行的分子杂交表明,籼、粳亚种之间具有明显的差异,籼稻杂交带数明显多于粳稻,普通野生稻与籼稻相似,具有较多的杂交带数。拷贝数测定结果表明,ｐＯｓ１３９在普通野生稻和籼稻中丰度均较高,在粳稻中丰度较低。结合ｐＯｓ１３９的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果和以前的ＲＡＰＤ结果,认为籼稻和粳稻共同起源于普通野生稻。