超滤-高效液相色谱法检测pHLA复合物中的抗原肽北大核心CSCD

重组HLA-Ⅰ类分子/抗原肽复合物(pHLA复合物)在研究人类T细胞特异性免疫应答中有重要用途。pHLA复合物的制备以基因工程及蛋白体外稀释折叠复性技术为基础,在体外复性体系中重组HLA-Ⅰ类分子正确折叠,并结合抗原肽形成复合物。本研究建立了一种超滤-高效液相色谱法(超滤-HPLC法)定量检测重组pHLA复合物中的抗原肽,尤其针对少量制备产物中抗原肽的检测。通过将重组HLA-Ⅰ类分子和抗原肽加入到复性缓冲液中,使重组HLA-Ⅰ类分子的重链(heavy chain,HC)与轻链(β2m)复性折叠,与含锚定残基的VYF抗原肽结合形成pHLA复合物,经超滤去除未结合的游离抗原肽VYF而保留复合物,最后将pHLA复合物经酸处理破坏其相互作用从而释放抗原肽,再超滤收集VYF抗原肽并进行HPLC检测,所测得的VYF抗原肽即为重组HLA-Ⅰ类分子与抗原肽相互作用所结合的抗原肽。结果显示,制备的重组pHLA复合物可被HLA-Ⅰ分子构象特异性抗体W6/32识别,这说明重组HLA-Ⅰ类分子折叠构象正确,可鉴定为pHLA复合物;而超滤-HPLC法也可检测到pHLA复合物中含有抗原肽VYF,因此将超滤-HPLC法用于检测pHLA复合物的方法可行。与Western blotting法相比,超滤-HPLC法定量检测抗原肽浓度范围为0–9μg/mL,可根据复合物中结合的抗原肽量来优化不同结合条件,以提高HLA-Ⅰ类分子折叠效率并促进HLA-Ⅰ类分子结合抗原肽,还可根据pHLA复合物结合的抗原肽含量计算复性体系中形成pHLA复合物的制备率。因此文中所建立的超滤-HPLC法可用于pHLA复合物制备过程的质量控制,在T细胞特异性免疫研究、人工抗原呈递细胞以及特异性四聚体探针应用开发方面都具有优势。     

中国人群主要组织相容性复合物基因多态性及其与疾病相关性的研究

人类的主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)又称为人类白细胞抗原系统(human leukocytc antigens,HLA)。 MHC基因位于第6号染色体短臂,分布于2—3×10~6bp长度的DNA链上。根据结构和功能,HLA抗原可分为三类。HLA-Ⅰ类抗原,主要是HLA-A,-B,-C基因产物,存在于所有有核细胞的表面,这类也是经典的组织抗原,是淋巴细胞排斥带有异己抗原或病毒感     

抗人CD8单链抗体基因的构建

CD8分子分布于部分T淋巴细胞和胸腺细胞。是MHC Ⅰ类抗原的配体,它与MHC Ⅰ类分子结合可以稳定CTL与带有MHC Ⅰ类分子与抗原复合物的靶细胞的结合。近年来已有不少抗CD8的单抗被用于预防及治疗骨髓移植时的移植物抗宿主反应及心、肾移植时的免疫排斥反应,但这些鼠源性单抗应用于人体时,其异源性会引起免疫排斥反应,限制了它的临床应用,因而有必要对鼠源性抗体进行人源化     

异种移植中Galα(1,3)Gal抗原的研究近况

同种异体组织和器官移植物供体来源有限,使得异种移植再度成为移植领域的研究热点。异种移植的主要障碍是人体内存在的天然抗体与移植物表面含有α1,3半乳糖残基[Galα(1,3)Gal,αGal]的抗原结合,激活补体系统和炎症反应,导致超急性移植排斥反应(HAR)的发生,使移植物失活。除人类和旧世纪猴外,其它所有哺乳动物的体内都含有αGal抗原,该抗原是由一组具有Galα(1,3)Gal双糖末端的糖蛋白或糖脂组成的,它的形成依赖于α1,3半乳糖基转移酶(αGT)的催化。目前,针对αGal抗原克服超急性移植排斥反应的方法主要有如下几种：(1)酶处理去除内皮细胞表面的αGal抗原;(2)物理化学方法去除人体血浆中存在的特异性天然抗体;(3)基因工程方法改造表达催化αGal抗原形成的相关酶基因,从而影响该抗原的表达。     

天然免疫细胞在急性器官移植免疫排斥中的作用

器官移植免疫排斥反应是一多分子、多细胞参与的复杂免疫应答过程.传统研究主要集中于适应性免疫细胞如T,B细胞在急性移植排斥反应中的作用.近年来,随着对天然免疫细胞亚群、功能及其异质性认识的不断深入,人们发现,除天然免疫细胞在移植免疫应答中的抗原提呈功能及炎性反应以外,其可以发挥直接效应功能,参与移植物的排斥.天然免疫细胞亚群在移植免疫排斥与耐受中的不同作用近来受到重视.本文对天然免疫细胞在急性器官移植免疫排斥和免疫耐受诱导过程中的作用作一简要综述.     

周围神经异体移植免疫机制的研究进展

周围神经异体移植由于移植物免疫原性的存在,移植后受体产生免疫排斥反应,造成移植失败。本文综述了移植物的免疫成分所在、SC及细胞因子在排斥反应中的作用、T淋巴细胞的激活途径及激活信号的转导过程,并讨论了减轻免疫排斥反应的治疗进展。     

人体巨噬细胞的研究 Ⅴ.单核细胞-巨噬细胞的HLA-DR抗原及其在淋巴细胞体外增殖反应中的作用

对小鼠的主要组织相容性复合体(H-2系统)的大量研究证明,除关系到同种异体移植物被排斥的 H-2D 和 H-2K 之外,在这两个位点之间还有一个与免疫反应密切联系的Ⅰ区.它由五个亚区组成,所编码的抗原称为Ⅰa抗原.H-2D 和 H-2K 抗原见于所有有核细     

抑制移植免疫排斥反应的研究进展

移植免疫排斥反应是制约器官移植成功率的重要原因之一,多年来人们研究采用多种方法来克服这种排斥反应。从直接降低MHCⅠ类分子表达的方法、Fas和Fas配体系统、微囊技术、移植物中导入各种细胞因子基因以及共刺激因子阻断剂等方面对近年来抑制移植免疫排斥反应的研究进展进行了综述 。     

细胞微囊化免疫隔离技术在移植医学中的应用

作为一种十分有效的免疫隔离技术,细胞微囊化可排除细胞移植中出现的宿主与移植物之间的双向排斥作用,从而使能分泌生物活性物质的细胞在移植后得以存活。目前报道的多种微囊材料中,以海藻酸钠一聚赖氨酸一海藻酸钠的应用最为广泛,可通过提高其生物相容性来减弱免疫排斥反应。细胞微囊化在医学治疗上正在发挥越来越大的作用,特别是基因修饰细胞日益成为研究的焦点。尽管该技术尚需改进,但它在异体和异种组织或细胞移植等方面有着广阔的应用前景。     

山萘酚通过增强Treg细胞免疫抑制功能延长移植物生存时间

目的:探讨应用山萘酚增强Treg细胞免疫抑制功能,从而抑制大鼠移植物排斥反应并改善移植物生存的作用和机制。方法:以Wister大鼠和SD大鼠分别为供、受体,建立同种异体皮肤移植排斥反应动物模型。观察受体老鼠皮肤移植物的情况,记录移植物失功时间(移植物皮片80%面积发生排斥)。RT-PCR检测移植7天后脾细胞、淋巴细胞FOXP3、CTLA-4和IL-10的mRNA水平,用HE染色组织病理学观察术后7天移植皮片的淋巴细胞浸润程度。体外实验T细胞增殖抑制试验加入山萘酚作为对照,观察Treg功能情况。结果:1.山萘酚能增强移植后同种异体移植物的生存时间(DMSO组6.3±0.3天,山萘酚组13.7±0.39天,P<0.01);2.RT-PCR显示山萘酚可增强细胞CTLA-4(对照组9.24±0.17,山萘酚组12.48±0.145,P<0.05)、FOXP3(对照组0.96±0.07,山萘酚组1.41±0.07,P<0.01)和IL-10(对照组0.95±0.12,山萘酚组1.50±0.16,P<0.05)的mRNA水平;3.体外T细胞增殖抑制实验中,山萘酚可增强Treg细胞的免疫抑制功能。结论:在大鼠皮肤移植模型中,山萘酚可延长皮肤移植物的生存时间,提高Treg细胞相关IL-10、FOXP3和CTLA-4的mRNA水平;体外实验中,能抑制效应T细胞的增殖,表明山萘酚在提高移植物生存方面存在一定的价值。     

移植排斥反应的免疫生物学及其药理学调控

<正>同种异体器官移植是对受体免疫系统敲一警钟。异体组织抗原激活受体免疫系统引起排斥反应。器官移植的外科问题目前已基本得到解决,进一步改善移植物功能存活率和延长受者生命的希望寄托到免疫学研究的进展。     

滋养层细胞表面主要组织相容性复合体

胎盘滋养层是直接与母体接触的与母体基因型不同的胎儿组织,滋养层细胞是否表达主要组织相容性复 合体(MHC)抗原以及表达何种MHC抗原对于妊娠成功与否至关重要.非经典MHCⅠ类抗原发现较晚,其中 HLA-G在滋养层细胞表达,可以保护带有父方同种异体抗原的胎儿免受母体免疫系统的杀伤.经典MHCⅠ类抗 原有多种亚型,不同亚型在滋养层细胞的表达有所不同.MHC Ⅱ类抗原在妊娠维持过程中表达极弱,新近的研 究资料表明,滋养层细胞CⅡTA在MHCⅡ类基因表达调控中起主要作用.     

胰腺或胰岛移植后1型糖尿病复发的预测

胰腺或胰岛移植后的1型糖尿病复发(T1DR)是影响远期移植物功能的关键因素之一。由T1DR导致的移植物功能丧失约占7﹪,与慢性同种排斥反应的发生率相当。然而,由于T1DR引起的复发性高血糖缺乏特异性,导致一直以来临床上T1DR发生被严重低估。移植物组织活检提示特异性靶向β细胞的炎性T细胞浸润是诊断T1DR的“金标准”。但是,作为一种有创性操作,组织活检不作为常规筛查T1DR方法。研究显示监测移植受者的胰岛自身抗体和抗原特异性T细胞对T1DR具有预测价值。本文就胰岛自身抗体和抗原特异性T细胞对预测T1DR作一综述。     

滋养层细胞表面主要组织相容性复合体抗原的研究进展

胎盘滋养层是直接与母体接触的与母体基因型不同的胎儿组织，滋养层细胞是否表达主要组织相容性复合体(MHC)抗原以及表达何种MHC抗原对于妊娠成功与否至关重要.非经典MHCⅠ类抗原发现较晚，其中HLA-G在滋养层细胞表达，可以保护带有父方同种异体抗原的胎儿免受母体免疫系统的杀伤.经典MHCⅠ类抗原有多种亚型，不同亚型在滋养层细胞的表达有所不同.MHCⅡ类抗原在妊娠维持过程中表达极弱，新近的研究资料表明，滋养层细胞CⅡTA在MHCⅡ类基因表达调控中起主要作用.     

胸腺内注射供体BMSCs对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响

目的:将供体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)胸腺内注射(intrathymic injection,IT)至受体胸腺,探讨其对同种异体腹部皮瓣移植排斥的影响及机制。方法:全骨髓贴壁培养法培养并纯化BN大鼠BMSCs,流式细胞术对其表型进行鉴定。受体Lewis鼠随机分为A组(空白对照组)、B组(BMSCs组)、C组(60Coγ射线4Gy全身照射组)、D组(全身照射+BMSCs组),每组6只。各组大鼠第0天进行同种异体腹部皮瓣移植,A组移植前14天IT PBS,B组移植前14天IT供体BMSCs,C组移植前15天给予60Coγ射线4Gy全身照射,移植前14天IT PBS,D组除移植前15天4Gy全身照射外,移植前14天IT供体BMSCs。大体观察移植皮瓣存活情况并绘制生存曲线,排斥终点流式检测脾细胞调节性T细胞(Treg)比例变化,体外混合淋巴细胞反应检测受体脾淋巴细胞对供体抗原反应性变化。结果:全骨髓贴壁培养法能够很好培养出BMSCs,其P3代流式细胞术表型鉴定结果为CD11b/c、CD45阴性,CD29、CD90阳性。B组的移植皮瓣存活时间与A组相比无明显差异(P>0.05),而D组的移植皮瓣平均存活时间较C组延长3.4天,差异具有统计学意义(P<0.01),脾细胞Treg比例显著增高(P<0.01),脾淋巴细胞对供体抗原反应性显著降低(P<0.05)。结论:IT供体BMSCs联合60Coγ射线4Gy全身照射通过上调受体脾细胞Treg比例能有效降低受体脾淋巴细胞对供体抗原的反应性,显著延长同种异体腹部皮瓣移植物存活时间。     

移植免疫简介

移植免疫简介刘年方（江苏省江都市小纪中学２２５２４１）在组织移植或器官移植中,受者接受供者的移植物后,受者的免疫系统与供者的移植物相互作用而发生的免疫应答“,称为移植免疫。研究移植免疫的主要目的是了解移植排斥反应发生的机制,以预防和控制排斥反应的发生...     

供体特异输注及FK506对同种异体小鼠心脏移植急性排斥反应的影响

目的:探讨供体特异输注(donor-specific transfusion,DST)及不同剂量FK506对同种异体小鼠心脏移植的影响.方法:应用显微外科技术制作颈部移植心脏急性排斥反应小鼠模型,将移植受体小鼠分为4组:对照组(单纯移植组,未加DST),DST 移植组,DST 移植 FK506(2meg/(kg·d))组,DST 移植 FK506(0.3mg/(kg·d))组,比较各组移植心脏生存时间,心肌病理改变及外周血血清细胞因子水平:血清IL-2,IL-4,IL-10和IFN-γ水平.结果:术前1天应用DST与连续应用较小剂量FK506可显著延长移植物存活.术后第七天病理检查发现联合应用DST和FK506的两组移植物急性免疫排斥反应明显比其他两组减轻.血清中IL-2和IFN-γ水平在联合应用DST和FK506的两组明显低于其它两组,IL-4和IL-10水平在联合应用DST和FK506的两组高于对照组和DST 移植组.结论:术前DST及持续应用较小剂量FK506可有效抑制同种异体小鼠颈部心脏移植术后急性排斥反应,显著延长移植物的生存时间.     

白癜风的HLA等位基因遗传学研究进展

白癜风的病因尚不明,国内外研究表明其发生与遗传因素相关,其遗传特征不符合孟德尔遗传规律,而是属于多基因遗传的范畴.主要与人类白细胞抗原HLA-Ⅰ类、Ⅱ类及Ⅲ类基因及其产物相关,以往文献报道认为HLA-Ⅱ类基因与白癜风的关系最为密切.HLA基因的多态性决定HLA分子的多样性.充分认识HLA基因水平的多态性,有助于白癜风的基因诊断和治疗.     

开发排斥反应的图像诊断法

美国麻省总医院心内科的矶部光章等开发了早期诊断移植脏器排斥反应的图像诊断技术。方法是使用放射性同位素标记的单克隆抗体从患者体内检测随着排斥而早期在移植脏器上诱导的组织适应抗原(MHC抗原)2级。代替了活检等方法。可进行排斥反应的非侵袭性诊断。矶部准备在循环器官系统的医学专门杂志Circulation,92年2月号上发表用小鼠进行的心脏移植的实验结果。打算与国内的大学协议在日本进行开发实验。移植脏器,发生排斥反应时在排斥的脏器侧诱导MHC抗原。MHC抗原是支持T细胞进行抗原识别反     

主要组织相容性抗原的研究进展

主要上容性抗原是一种分布在细胞表面，并具种系特异性的抗原蛋白，用以将细胞内加工过程的肽段提呈到细胞表面，以激活免疫细胞，在移植器官的排斥反应、抗感染抗肿瘤当中起重要作用