天花粉蛋白放射免疫测定法

天花粉蛋白(Trichosanthin)是一种使用简便而有效的中期妊娠引产药物。鉴于目前临床上一般采用肌肉注射天花粉蛋白粗提物引产,剂量5—10毫克,估计由肌肉转移至血循环的天花粉蛋白量,每毫升血液中至多也只有毫微克水平。因此,为了准确地了解天花粉蛋白在血循环中量上的动态变化,探讨天花粉蛋白的代谢规律,进一步深入研究天花粉蛋白在细胞水平和分子水平的作用原理,以及改进临床用药途径和降低有效剂量,建立天花粉蛋白的超微量分析技术就显得更加迫切和重要。     

天花粉凝集素和天花粉胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离和一些性质

用酸处理交联琼脂糖6B和水不溶胰蛋白酶,可分别从天花粉的丙酮粉制剂中得到一定纯度的天花粉凝集素和天花粉胰蛋白酶抑制剂。天花粉凝集素的分子量为60,000,等电点约5.5。天花粉胰蛋白酶抑制剂的分子量约6000,对胰蛋白酶的当量抑制比为1:4.3。由此认为上述两种生物活性物质不同于有引产活性的天花粉蛋白。不少植物种子或块茎中同时存在着外源凝集素和蛋白水解酶抑制剂。本文对这两类物质的共存现象作了讨论。     

天花粉凝集素和天花粉胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离和一些性质

用酸处理交联琼脂糖6B和水不溶胰蛋白酶,可分别从天花粉的丙酮粉制剂中得到一定纯度的天花粉凝集素和天花粉胰蛋白酶抑制剂。天花粉凝集素的分子量为60,000,等电点约5.5。天花粉胰蛋白酶抑制剂的分子量约6000,对胰蛋白酶的当量抑制比为1:4.3。由此认为上述两种生物活性物质不同于有引产活性的天花粉蛋白。不少植物种子或块茎中同时存在着外源凝集素和蛋白水解酶抑制剂。本文对这两类物质的共存现象作了讨论。     

高效液相色谱检测聚乙二醇化天花粉蛋白方法比较

目的：建立聚乙二醇化天花粉蛋白纯度的检测方法。方法：使用分子筛色谱法和反相高效液相色谱法测定了聚乙二醇天花粉蛋白。结果：聚乙二醇天花粉蛋白纯度分别为100％和98．14％。结论：高效液相色谱法简单易行、准确、灵敏度高,适用于聚乙二醇化天花粉蛋白纯度检测。     

注射用天花粉对早孕兔子宫收缩的作用

天花粉针剂中期引产的成功,是中西医结合、整理和提高祖国医药学遗产的一项重要成果。据报道,天花粉蛋白的引产原理,主要作用于胎盘绒毛的合体滋养层细胞。由于药物引起滋养层细胞的变性和坏死,破坏其功能,从而导致胎儿死亡,以达到引产目的。但是关于天花粉蛋白使滋养层细胞损伤,如何引起宫缩发动的问题,尚缺乏针对性研究。目前,天花粉针剂在临床上用于早孕流产,出现了可喜的苗头;以天花粉针剂和15甲基前列腺素 F_(2α)联合用药终止早孕,更取得显著进展。开展天花粉蛋白对妊娠     

天花粉蛋白及其与抗体的复合物对蛋白质合成的抑制作用(简报)(英文)

天花粉蛋白在无细胞系统中显示强烈的抑制蛋白质生物合成的能力,其活性与经巯基试剂还原开裂的蓖麻毒蛋白相当。天花粉蛋白对BEL-7402人肝癌细胞的毒性甚低,但当它通过二硫键与抗肝癌单抗Hepama-1偶联后,其毒性增强五十倍。张学军和王家槐不久前发现天花粉蛋白与蓖麻毒蛋白A链的一级结构有很大的相似性~[5]。我们的实验结果与他们的发现互相印证。天花粉蛋白与抗体偶联后,可能通过抗体与细胞表面抗原的结合而内化,从而增强了它的细胞毒性。考虑到天花粉蛋白与其他植物单链致核糖体失活蛋白(RIPs)有不少特性十分相似,我们推断天花粉蛋白是RIP家族中的一员。天花粉蛋白与抗体偶联过程中,双功能试剂SPDP的修饰使天花粉蛋白的活性降低一个数量级,似乎意味着天花粉蛋白上的某些氨基可能对其活性至关紧要。发展新的偶联方法的工作正在进行。如能在双功能试剂修饰后保留其大部分活性,天花粉蛋白作为免疫毒素的“弹头”药物可能颇具潜力。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶附着在核糖体上。经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用BSA,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的比较观察,也证明滋养层细胞和绒癌细胞对天花粉蛋白的专一亲和性。更有趣的是:天花粉蛋白肝癌单抗胶体金结合物进入绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同;先以旰癌单抗处理也不影响天花粉蛋白肝癌单抗结合物进入绒癌细胞。然而,对于旰癌细胞,天花粉蛋白肝癌单抗胶体金颗粒则专一地结合在细胞的微绒毛表面,这种结合因先以肝癌单抗处理而明显地被竞争抑制。这些实验结果相互印证地提供天花粉蛋白对滋养层细胞和绒癌细胞高度专一的亲和性,并证明天花粉蛋白对靶细胞的原初损伤部位是核糖体。进一步探讨天花粉蛋白在靶细胞表面结合位点的化学性质以及这种蛋白在靶细胞内的转运机制将是重要的问题。     

天花粉蛋白引产原理的探讨

天花粉粗提物是从葫芦科植物栝楼的根提取出的中期引产药物,其纯化的引产有效成分为分子量约18,000的碱性蛋白质,称为“天花粉蛋白”。经鉴定对中期妊娠有很好的引产效果。同时,对宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎有独特的疗效,对绒毛膜上皮癌也有一定的疗效, 根据对天花粉蛋白的原初作用部位,胎盘和离体培养的人滋养层细胞的形态和功能损伤,以及抑制前列腺素合成对天花粉蛋白引产的影响等方面的研究结果,互相印证,初步阐明了天花粉蛋白引产作用原理:(1)天花粉蛋白直接作用于胎盘的滋养层细胞,并有一定的细胞专一性:(2)天花粉蛋白能选择地使胎盘绒毛合体滋养层细胞变性坏死,解体的细胞碎片留在血窦中,引起凝血,造成循环障碍和进一步的大量组织坏死,胎盘绒毛坏死是原发的,循环障碍是继发的:(3)胎盘绒毛的损伤反映在功能方面,HCG和甾体激素迅速下降到先兆流产的临界水平以下。由于胎盘形态和功能严重损伤的结果,破坏了母体和胎儿之间的内分泌关系和代谢物的交换,并假定可能通过尚未弄清楚的机制,引起前列腺素合成的增加,发动宫缩而导致流产。总之,天花粉蛋白是从中草药发掘出来的一个植物蛋白性的中期引产和抗增生性滋养层细胞疾病的药物。天花粉蛋白引产作用原理的初步阐明,在实践上为提高和扩大天花粉蛋白的     

天花粉中总黄酮提取工艺研究

本研究优化了天花粉中总黄酮的提取工艺,采用Al(NO3)3-Na NO2比色法测定了天花粉中总黄酮的含量。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验,以天花粉中总黄酮提取率为指标,探讨了甲醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间对天花粉中总黄酮提取率的影响。结果表明最佳提取工艺参数为:甲醇体积分数50%、料液比1∶15、提取温度70℃、提取时间90 min。在最佳工艺条件下测得天花粉中总黄酮平均含量为0.1184 mg/g。该方法操作简单,稳定性和重复性好,本实验首次测定了天花粉中总黄酮含量,为天花粉药材质量控制提供了依据。     

天花粉蛋白可以插入含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜

天花粉蛋白发挥细胞毒性需要跨过脂膜双分子层进入细胞质,但是这一过程的机制尚不清楚。在内吞过程中,膜的拓扑方向始终保持不变,天花粉蛋白首先接触磷脂膜双分子层的非胞质一侧。利用混合磷脂制备的磷脂单分子层和磷脂双分子膜来模拟天然细胞膜的非胞质侧,检验了天花粉蛋白与该混合磷脂膜问的相互作用。结果表明,在37℃、酸性pH下,天花粉蛋白对含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜有较强的插膜能力;但在低温,如25℃、中性pH下,天花粉蛋白的插膜能力明显减弱。天花粉蛋白可以较深地插入混合磷脂膜双分子层中,使其色氨酸内源荧光被磷脂疏水尾链上的自旋基团淬灭。天花粉蛋白的插膜行为可以对磷脂膜产生瞬间的扰动,引起包裹的荧光染料泄漏。增加天花粉蛋白的浓度,可以促进天花粉蛋白与脂膜的相互作用。     

天花粉蛋白研究讨论会在京举行

1986年4月22日至25日,中国科学院在北京举行了天花粉蛋白研究讨论会。天花粉蛋白是我国科研人员于20多年前从民间流传的引产中药天花粉中发现并提取出来的一种单链碱性蛋白质。经过科学院有机化学所和细胞生物所(前实验生物所)与一些医疗部门(如上海龙华医院、瑞金医院等)结合临床多年研究和改进,发现结晶天花粉蛋白能有效而安全地用于抗早孕、中期引产和治疗葡萄胎、宫外孕甚至抑制一些肿瘤。动物实验证明,天花粉蛋白能相当专一地损伤胎盘滋养层合体细胞,从而在细胞水平初步阐明了引产机理。为了进一步从分子水平深入开展研究,有机所从1973年左右开始了天花粉蛋白氨基酸序列     

免疫抑制和天花粉蛋白终止妊娠作用的初步研究

天花粉粗提物是从中药栝楼根提取出来的一种蛋白质性药物。对中期引产有显著效果,对宫外孕、葡萄胎以及绒毛膜上皮癌也有一定疗效(上海市天花粉科研协作组,1976)。据临床观察,注射天花粉粗提物的病人,特别是有和天花粉接触史者,往往出现过敏反应(皮疹,肌肉疼痛,胸闷,甚至休克)。并可能测出抗体。目前,临床虽采用皮试方法,剔除     

天花粉蛋白对体外培养不同种类细胞的作用

本文进行了天花粉蛋白对离体培养的葡萄胎细胞、早孕蜕膜细胞、人胎儿肾皮质部细胞、HeLa细胞和鼻咽癌上皮细胞的损伤作用的比较研究。为了探索天花粉蛋白选择损伤细胞是否存在专一结合细胞的可能性,又以不敏感的蜕膜细胞为材料,应用辣根过氧化物酶标记技术进行了天花粉蛋白与细胞结合和进入细胞内定位的实验。此外,并以肝癌细胞为材料研究了对细胞增殖率的影响。结果表明葡萄胎合体滋胚层细胞和胎盘合体滋胚层细胞一样都是最敏感的细胞,经1微克天花粉蛋白处理即出现形态上损伤,至50微克则大多数细胞呈现不可逆的退化损伤,而其它类型的细胞则表现出有相当大的抗性。过氧化物酶标记追踪天花粉蛋白在细胞内分布的结果表明天花粉蛋白与蜕膜细胞有一定的亲和力,提示天花粉蛋白似乎不存在严格的细胞结合专一性;而天花粉蛋白在细胞内的分布一般仅限于细胞质,这一现象似乎提示细胞质区可能就是天花粉蛋白直接作用的靶的范围。细胞增殖率的实验结果表明50微克以上的药物剂量对肝癌细胞增殖率有一定的抑制作用,剂量增加抑制作用也增加。但是,经过一定的修复期以后,细胞增殖率又可得到完全恢复,反映了对细胞生长抑制的可逆作用。上述实验结果进一步加强了天花粉蛋白对滋胚层细胞具有一定细胞损伤专一性的结论。本文并对细胞损伤专一性问题进行了讨论。     

以抗病毒作用为指标测定天花粉蛋白生物活性的微量方法

天花粉蛋白是从祖国医药宝库中发掘的引产药物。近年来,研究者证明,天花粉蛋白在组织培养上可抑制人免疫缺损症病病毒(HIV)和其它病毒的复制。 天花粉蛋白生物活性的测定,一般用小白鼠等怀孕动物测定引产活性,也有人用兔网织红细胞裂解液体外转译体系,测定其抑制蛋白合成的能力。前者天花粉蛋白用量大,后者用量虽小,但实验较繁琐而且需同位素标记的氨基酸和必要的设备。     

天花粉蛋白引起敏感细胞膜上G蛋白激活的初步研究

天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是一种单链核糖体失活蛋白,具引产、抗肿瘤、抗HIV等多种生物学功能。天花粉蛋白专一性杀伤敏感细胞的机制一直未被研究清楚。本文首次以生物分子相互作用分析(BIA)证明在天花粉蛋白敏感的细胞膜上存在着能与天花粉蛋白专一结合的组分。我们进一步利用[~(35)S]GTPγS结合实验发现天花粉蛋白能够激活敏感细胞膜上的G蛋白,而对不敏感细胞没有相应的G蛋白激活。这些结果表明了在敏感细胞膜上天花粉蛋白特异受体的存在。     

荧光标记抗体追踪天花粉蛋白引产作用部位的研究

目前,天花粉粗提物作为中期引产药物,虽然在临床已广泛使用,但是对天花粉蛋白中期引产的原理还不甚了解。根据临床引产下来的胎盘病理观察,发现滋养层细胞广泛坏死,绒毛间隙有大量的纤维蛋白沉着。天花粉粗提物对宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎和     

成熟天花粉蛋白基因在酵母中的表达

本文利用DNA重组技术,将酵母α因子的启动子和信号序列与成熟天花粉蛋白基因融合,从而构建了天花粉蛋白的酵母表达载体。将该载体转入酵母细胞,转化子在选择培养基中培养24小时后,获得了高效表达。表达的天花粉蛋白位于细胞内。     

生长调节物质对栝楼毛状根生长和天花粉蛋白合成的影响

添加GA3和CCC虽然影响栝楼毛状根的生物量积累 ,但是有利于促进天花粉蛋白 (TCN)的合成 ,当GA3的添加量为 2mg/L时 ,天花粉蛋白含量增加了 18 9% ,添加 1mg/L～ 2mg/LCCC的天花粉蛋白提高了 2 8%。分别添加维生素B1或B5会延长毛状根的生长迟滞期 ,但是 ,后期的生长非常迅速 ,并可以促进天花粉蛋白的合成。同时添加维生素B1和B5可以缩短生长迟滞期 ,并能促进毛状根的生长 ,同时添加1mg/LB1 4mg/LB5有利于促进天花粉蛋白总量的增加。     

天花粉蛋白对滋养层细胞专一损伤机制的研究

在体外培养条件下,天花粉蛋白胶体金以受体介导的内吞方式进入滋养层细胞和绒癌细胞,最终进入胞质溶胶着在核糖体上,经相同处理的肝癌细胞,绿猴肾细胞和正常鼠胚肝细胞,金颗粒既不与这些细胞表面结合,也没有被专一内吞的现象。分别用ＢＳＡ,转铁蛋白活化的胶体金处理滋养层细胞和绒癌细胞的方式与天花粉蛋白的结果相同,先以肝癌单抗处理也不影响天花粉蛋白的结果相同,先以肝癌单抗处理也不影响天花粉蛋白的肝癌单抗结合物进     

天花粉过氧化物酶的提纯及其同工酶组成测定

本文介绍从新鲜天花粉块根榨汁中发现有14种碱性和酸性过氧化物酶并进行了提纯,同时,对提纯的碱性和酸性天花粉过氧化物酶制剂的同工酶组成进行了鉴定。