辣椒离体再生及遗传转化研究进展

离体再生技术与遗传转化技术促进了传统农作物育种技术的发展并定向改良了辣椒性状.但由于辣椒较其它茄科植物再生困难,导致在利用DNA重组技术改良辣椒对生物和非生物胁迫抗性时增加了难度.近年来,辣椒器官再生、花药培养、胚培养和细胞培养等离体培养技术取得了巨大的成果.就辣椒离体培养及相关生物技术进行了综述,并指出了存在的问题并对其应用前景进行展望.     

液泡转化酶反义基因对番茄的遗传转化

以'中蔬4号'番茄的子叶为试材,通过农杆菌介导法遗传转化,将液泡转化酶反义基因导入再生植株,经PCR和Southern斑点杂交检测证明,5株转化植株基因组中整合有目的基因.遗传转化最佳条件为:在附加1.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IAA的MS培养基上再生培养,外植体预培养2 d,菌液浓度OD600=0.5,侵染时间5 min,共培养2 d.遗传转化后,对整合有目的基因的再生番茄叶片液泡转化酶活性测定,表明液泡转化酶活性明显受到抑制.获得的转基因植株为进一步研究液泡转化酶基因的功能奠定了基础.     

'早红'草莓高效遗传转化受体系统的建立

本文以草莓主栽品种'早红'组培苗离体叶片和叶柄为外植体,进行叶龄、暗培养、植物生长调节剂配比及抗生素敏感性研究,建立草莓高效遗传转化的受体系统.在含3.0 mg/L 6-BA与0.1 mg/L 2,4-D的MS培养基上,30 d叶龄的叶片再生频率高达98.31%,平均每叶片再生芽数5.09个,叶柄切段的再生频率为89.25%,平均每叶柄切段再生芽数4.92个,叶片的再生频率略高于叶柄;不定芽在含0.2 mg/L 6-BA与0.2 mg/L GA_3的MS继代培养基上培养成苗.将生长状态良好的不定芽转至含0.2 mg/L IBA的1/2 MS培养基上生根,生根率达100%,平均生根数量16.27条,平均根长1.85 cm.抗生素敏感性试验表明,草莓外植体适宜的卡那霉素选择压力为25 mg/L,头孢霉素的筛选浓度为300mg/L.本研究建立的再生体系可作为草莓遗传转化的受体系统.     

月季的植株再生及遗传转化研究进展

本文对近20年月季植株再生和转基因研究进展进行了较为系统的回顾和总结。月季通过器官和体细胞胚发生途径都能再生植株,但遗传转化主要是利用体细胞胚发生途径。通过农杆菌介导法和基因枪法,外源基因如报告基因、抗病基因和改变花色的基因等已转化成功。文章还对今后月季转基因研究的方向进行了讨论。     

月季的植株再生及遗传转化研究进展

本文对近20年月季植株再生和转基因研究进展进行了较为系统的回顾和总结.月季通过器官和体细胞胚发生途径都能再生植株,但遗传转化主要是利用体细胞胚发生途径.通过农杆菌介导法和基因枪法,外源基因如报告基因、抗病基因和改变花色的基因等已转化成功.文章还对今后月季转基因研究的方向进行了讨论.     

影响辣椒离体再生芽伸长因素研究

以辣椒子叶为外植体,比较不同浓度BA和IAA激素组合对辣椒再生芽诱导的差异,利用筛选出的高效芽诱导培养基为基础,研究了赤霉素、芽诱导时间、培养基有机成分、不同激素组合和品种等因素对辣椒不定芽伸长的影响。结果表明:不同基因型辣椒子叶再生能力不同,BA3.0mg.L-1 IAA0.5mg.L-1的激素配比对不定芽诱导频率最高;不定芽的伸长百分率随着GA3浓度的增加而增加,GA3的适合浓度为1.0～2.0mg.L-1;不定芽诱导时间对不定芽的伸长有一定的影响,诱导21d的不定芽,其伸长频率明显高于诱导14d的不定芽;B5有机成分在辣椒不定芽的伸长中效果优于MS有机成分;激素组合对不定芽伸长有一定的影响,Zeatin GA3激素组合对伸长效果最好,BA IAA GA3伸长效果较好,BA PAA(苯乙酸,phenylaceticacid) GA3伸长效果次之;不同品种辣椒不定芽的伸长能力有一定差异,楚风和苏椒五号再生芽伸长能力最佳。与IAA和NAA相比,IBA对再生芽生根效果较好。     

玉米的遗传转化

介绍近年来玉米遗传转化在受体系统、基因导入、选择标记和表达系统等方面的研究进展。     

基因枪在水稻遗传转化中的应用及其转化技术的优化

1983年Zambryski等人用根瘤农杆菌介导法进行烟草基因转移,获得了世界上首例转基因植株.随后,应用DNA直接导入技术如电击法(electroporation)和PEG介导法(PEG—mediated)成功地获得了转基因水稻植株.近年来,随着基因枪技术的建立和发展,水稻遗传转化成功的报道逐年增多.目前基因枪技术在植物遗传转化中的应用超过了根瘤农杆菌介导和其它转化方法的应用.这是因为基因枪转化技术不受植物种类的限制,不需要以原生质体作为转化的受体,可以将外源基因直接导入细胞、组织或器官,因而克服了根瘤农杆菌     

高等植物的遗传转化

自1944年Avery首次阐明肺炎双球菌的遗传转 化机理后,人们一直在探索适合高等植物的转化途径, 但早期用DNA直接处理种子或细胞均未取得成功。,。 197;年,Van LarebekeEs',等在根癌农杆菌中发现一 种与双子叶植物肿瘤诱导有关的质粒,即Ti质粒‘ 1977年ChiltonL",等用限制性内切酶谱法证明,在植 物的冠廖瘤组织中存在农杆菌Ti质粒的一个片段,称 为转移DNA (T-DNA), T-DNA在植物基因组中的 整合和表达导致肿瘤的发生。此后以Ti'质粒为基础 的植物遗传转化研究获得迅速发展,在理论和应用方 面均取得很大成就“,‘。本文主姿对植物转化的机理 和方法进行综述。     

枳壳外植体离体再生及农杆菌介导的遗传转化

以枳壳实生苗的上胚轴及茎段为材料,在附加有ＢＡ和ＭＴ培养基上进行培养,上胚轴出芽率普遍高于茎段,ＢＡ为１ｍｇ／Ｌ时,出芽率最高,ＢＡ浓度升高,出芽率随之下降。外植体在培养基上的接种方式,对出芽有一定影响,上胚轴切段 形态学下端垂直插入,出芽率高。     

紫色辣椒腋芽增殖离体培养体系的建立

采用组织培养方法,研究了不同外植体类型、激素组合、蔗糖浓度对辣椒腋芽生成以及不同培养基对腋芽生根的影响。结果表明,辣椒腋芽生成的最佳外植体类型是4叶1心,最适的激素配方、蔗糖浓度组合是:MS B5(有机物) 6.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA 20 g/L糖;腋芽生根最佳激素组合是1/2MS 0.5 mg/LIBA,其生根率和生根数分别为62.5%,2.15个。     

石防风原生质体遗传转化及抗除草剂植株的再生

以石防风（Ｐｅｕｃｅｄａｎｕｍｔｅｒｅｂｉｎｔｈａｃｅｕｍ（Ｆｉｓｃｈ．）Ｆｉｓｃｈ．ｅｘＴｕｒｃｚ．）叶柄愈伤组织为材料建立以致密细胞团为主的悬浮培养物,用酶解法获得原生质体。用ＰＥＧ法将拟南芥菜（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）抗除草剂基因导入原生质体后进行液体浅层培养。转化细胞经除草剂ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ筛选,通过胚状体途径产生抗性小植株。转化处理１０６个原生质体,以加入４０～５０μｇ／ｍＬ质粒ＤＮＡ,ＰＥＧ终浓度为１０％,于１ｍＬ转化介质中,２６℃黑暗下处理２０ｍｉｎ的效果最好。ｃｔＤＮＡ的加入对转化结果无明显影响。分子杂交试验表明,突变的ａｌｓ基因已整合进转化植株的基因组中。转基因植株的细胞在脱分化过程中仍具有抗ｃｈｌｏｒｓｕｌｆｕｒｏｎ的能力;移栽成活的转基因小苗仍表现出抗除草剂特性,而未转化的植株在低浓度除草剂下即逐渐死亡。表明转入的ａｌｓ基因在石防风细胞内能够稳定表达。     

Plant Regeneration and Transformation of Sweet Papper (Capsicum frutescens)

Three strains of sweet pepper, (Capsicum frutescens) “Shuang Feng”, “Zhong Jiao No. 2” and “Zhong Jiao No.3” were screened out of six Chinese cuhivars for their high capacity of regeneration. The normal flowering and fertile regenerated plants have been obtained from cotyledons of seedlings from 10 to 16 days old by a four-step culture procedure; short induction, shoot elongation, rooting of excised shoot and transplanting into soil. MS was the basal medium in all steps, supplemented with different kind and different concentration Of phytohomores. Optimal shoot ioduction medium is MS +4–6mg/LBA+0.5mg/LIAA which gives rise a shoot regeneration frequency of 100%. 35% of the induced shoots elongated on the medium of MS+2mg/L Zeatin or 2mg/L. BA+l–3mg/L GA, and subsequently rooted on MS medium or in addition of 0.1–0.5mg/LNAA. The regenerants were transplanted into soil and developed into normal plants. In the transformation of sweet pepper using the leaf disc method, two kinds of wild type Agrobacterium tumefaciens, C58 and GV3111, have been screened out in regard to their high infection capacity. The transient expression of GUS gene was detected and Kanamycin-resistant shoots from infected cotyledons have been obtained. Further assay and transfering the TMV-resistant and CMV-resistant genes into sweet pepper are in progress.     

大豆胚尖遗传转化体系优化及抗逆基因GmPK转化研究

采用GUS基因瞬时表达检测方法,通过正交试验以AS浓度、侵染菌液OD值、侵染时间、共培养时间和恢复培养时间5个因素在4个水平上进行分析,优化了农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系,并在此基础上进行了抗逆基因GmPK的遗传转化。结果表明,采用共培养培养基中添加100μmol/L AS、侵染菌液OD600值0.9、侵染15h、共培养5d和恢复培养3d的转化条件最佳,GUS阳性率达74.59%,经PCR及RT-PCR进一步验证获得了转基因阳性植株。利用优化的最佳条件进行抗逆基因GmPK的转化,炼苗移栽成活的再生植株经PCR及PCR-Southern blotting验证,初步证明外源基因已经整合至大豆基因组,转化率为0.6%。     

葡萄遗传转化研究进展

本文从目的基因、遗传转化途径、再生系统以及筛选和鉴定四个方面评述了近10年来葡萄遗传转化的研究进展。与其它植物相比,葡萄遗传转化较困难,迄今为止仅获得了较少的转基因植株。葡萄再生频率低和葡萄组织对卡那霉素选择的敏感均是遗传转化困难的关键所在。     

高羊茅转基因研究进展

高羊茅为很重要的多年生冷季型草坪草,生物技术在其品种改良中具有很大的应用潜力。本文对高羊茅植株再生体系的建立及遗传转化方面的研究进展进行了综述。同时,对高羊茅转基因研究中存在的问题和前景作了讨论。