家蚕浓核病毒中国株基因组DNA的分离纯化与鉴定

家蚕浓核病毒中国株的正链DNA和负链DNA分别包裹在不同的病毒粒子中,而且两条链的大小不同,经高盐浓度的DNA抽提缓冲液提取后,在琼脂糖凝胶电泳谱中呈现出大小不同的两条带,一条6．4kb,另一条5．8kb。作者分别用高盐和低盐抽提缓冲液提取了家蚕浓核病毒中国株的基因组DNA,意外发现用低盐抽提缓冲液抽提出来的基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳谱中仅呈现一条带。推测可能是由于大小不同且不完全互补的正负链,在低盐缓冲液中形成有效的互补,因而呈现一条6．2kb的条带。     

疫苗

960999 禽痘病毒DNA复制及作图分析[英]/Zantinge, J. L.…//Can. J. Microbiol. -1995,41(4～5).-378～387[译自DBA,1995,14(17),95-10127] 产生了一种禽痘病毒Chick-N-Pox疫苗株DNA基因组的EcoRⅠ、BamHⅠ、NcoⅠ和PstⅠ限制性物理图谱。利用琼脂糖凝胶电泳和PAGE分析了EcoRⅠ、BamHⅠ、BglⅡ、NcoⅠ、StyⅠ、PstⅠ和PvuⅡ消化DNA的凝胶分布结果。从中估测禽痘病毒基因组的     

铜绿色假单胞菌AS1.860中萘质粒的分离和鉴定

本文报道了一种新的萘降解质粒ND1.860。铜绿色假单胞菌AS1.860经碱-SDS裂解,氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心,得到质粒DNA。通过电子显微镜观察到环状DNA分子,并根据轮廓周长推算其分子量为38.1×10~6道尔顿。ND1.860经过EcoRI消化产生10个片段,HindⅢ消化产生9个片段,由琼脂糖凝胶电泳得到的限制图谱与已报道的萘质粒明显不同。     

中红侧茧蜂多分DNA病毒基本特征研究

本文首次报道中红侧沟茧蜂(Microplitis mediator)雌蜂卵巢中存在多分DNA病毒(Microplitis mediator Plolydnavirus,MmPDV),初步研究了MmPDV形态和基本生理生化特征。利用蔗糖密度梯度超速离心分离纯化了MmPDv粒子,电镜负染显示PDV粒子分三段,带有－明显的尾部结构,大小约为130×35nm;SDS-PAGE电泳条带较多,至少可以分辨出26个电泳条带,表明病毒粒子衣壳蛋白复杂;琼脂糖凝胶电泳显示MmPDV基因组至少由大小不同、丰度不等的14个DNA分子组成,用6种内切酶(EcoRI,HindⅢ,BssHⅡ,Pst I,BamH I,Bgl I)酶切MmPDV基因组后,估算出MmPDV基因组大小约为l08kb。用雌蜂输卵管萼液注射小地老虎幼虫,注射后的小地老虎体重和龄期发育动态表明,MmPDV具有抑制寄主生长发育的生理功能。     

小麦丛矮病毒核酸的研究

小麦丛矮病毒(Wheat Rosette Stunt Virus.以下简称WRSV)的核酸可以通过SDS-尿素处理和苯酚抽提的方法分离获得。琼脂糖凝胶电泳测得核酸的分子量约为4.4×10~6道尔顿。核酸温度熔解曲线的测定证明它是一个单链的RNA。在电子显微镜下可观察到两种长度的核酸分子,一种长度约为3.5～4.0μ,相当于碱基数为14,000～16,000,另一种约为其一半;并能看到RNA的一些二级结构。     

中红侧沟茧蜂多分DNA病毒基本特征研究

本文首次报道中红侧沟茧蜂 (Microplitismediator)雌蜂卵巢中存在多分DNA病毒 (MicroplitismediatorPlolyd navirus,MmPDV) ,初步研究了MmPDV形态和基本生理生化特征。利用蔗糖密度梯度超速离心分离纯化了MmPDV粒子 ,电镜负染显示PDV粒子分三段 ,带有一明显的尾部结构 ,大小约为 130× 35nm ;SDS PAGE电泳条带较多 ,至少可以分辨出 2 6个电泳条带 ,表明病毒粒子衣壳蛋白复杂 ;琼脂糖凝胶电泳显示MmPDV基因组至少由大小不同、丰度不等的 14个DNA分子组成 ,用 6种内切酶 (EcoRI,HindIII,BssHII,PstI,BamHI,BglI)酶切MmPDV基因组后 ,估算出MmPDV基因组大小约为 10 8kb。用雌蜂输卵管萼液注射小地老虎幼虫 ,注射后的小地老虎体重和龄期发育动态表明 ,MmPDV具有抑制寄主生长发育的生理功能     

艾滋病毒核酸探针的制备

 采用PXY104(含化学合成的HIV-env26肽基因4重串联体结构)为材料。温和裂解法提取质粒DNA,制备电泳纯化,Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶解,低融点琼脂糖凝胶电泳回收HIV-DNA片段作为核酸探针;用[α-~(32)P]dATP通过缺口移位法标记,比放射性为4.05—6.69×10~7cpm/μgDNA通过分子杂交能测出lPg的靶DNA,初步试验结果表明,在本文试验条件下,可用该探针检测与之互补的核酸分子。     

猪圆环病毒2型新疆株全基因组的滚环扩增与序列分析

滚环扩增技术是一种体外恒温DNA扩增方法,特异性好,敏感性强,已广泛应用于微生物学领域。首先采用鉴别PCR对来自新疆某地区的5份猪病料进行猪圆环病毒2型的检测,接着对检出的2份猪圆环病毒2型阳性DNA样品进行滚环扩增。滚环扩增产物经单一限制性内切酶(SacⅡ)酶切及琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果显示2份样品都出现了猪圆环病毒2型基因组大小的条带。对目的条带进行回收、克隆与测序,结果表明2株新疆株猪圆环病毒2型的全基因组大小皆为1768bp。遗传进化分析显示2株的基因型为PCV2a和PCV2e。     

pBR322 DNA的超螺旋波动

开环状pBR322 DNA在不同溴乙啶浓度下通过DNA联接酶转变为闭环状分子。除去溴乙啶后,每种样品中都含有一组超螺旋数即拧数(W_r)不同的闭环状分子。这些样品和天然pBR322DNA的W_r都直接用琼脂糖凝胶电泳加以分析和测定。作者观察到用同样的培养剂在37℃培养同一菌株所获得的不同pBR322DNA样品,其超螺旋数值可以在相当大的范围内波动。为了便于比较不同的超螺旋DNA,作者采用了一种新的单位——超螺旋跨距,它可能有助于进一步研究环状双链DNA的本质。     

棉铃虫核多角体病毒DNA的限制性内切酶酶解图谱和电镜观察

棉铃虫核多角体病毒(NPV)加入0.01 Mna₂CO₃—0.05 MNaCl溶解后,用水饱和苯酚-SDS提取NPV DNA。电镜观察证明NPV DNA为非均一性环状结构分子。测量了28个分子的长度,其中15个分子长度为27±5μm,相当分子量为(73±13)×10⁶道尔顿,其余的是较大和较小的分子。限制性内切酶XbaⅠ,XhoⅠ BamHⅠ,EcoRⅠ,BgⅠ Ⅱ分别把NPV DNA酶解为20,9,10,18和11个限制性片段。由片段总和法计算得平均分子量是73.3×10⁶道尔顿。     

两类新型DNA质粒pSC1和pSC2的分离与观察

本文报道从一株啤酒酵母E4-2A分离到两类脱氧核糖核酸质粒pSC1与pSC2。经琼脂糖凝胶电泳分离质粒DNA分子,证明这两类质粒的分子量不同于已知的酵母2μmDNA质粒。电镜分析指出这两类新型核外DNA质粒的长度为0．91士0·12μm(pSCl)和0.48士0.10μm(pSC2),经计算分子量分别相当于1．9x106和1．0 x106。pSCI由共价闭环和开环两种构型组成,而pSC2仅有开环型。     

猪流行性感冒病毒H3N2亚型体外诱导猪肺巨噬细胞发生凋亡

本文旨在探讨H3N2亚型猪流行性感冒病毒(SIV)引起机体免疫抑制的机制.用SIV分离株体外感染猪肺巨噬细胞(PAM),发现SIV可在PAM中进行生产性复制.感染后96 h,病毒的血凝效价达到64.琼脂糖凝胶电泳显示,感染细胞的DNA呈"梯样"图谱;流式细胞仪检测显示,细胞在感染后24 h出现明显的亚二倍体DNA峰,72 h凋亡细胞达25%.光学显微镜和电子显微镜下可见感染细胞的形态发生特征性改变,如细胞皱缩、细胞表面微绒毛消失、胞质内出现大量空泡、细胞核染色体发生浓缩等.结果提示,SIV可在体外诱导PAM凋亡,推测PAM凋亡可能是SIV引起机体免疫抑制的重要因素之一.     

pBR322 DNA的超螺旋波动

开环状pBR322 DNA在不同溴乙啶浓度下通过DNA联接酶转变为闭环状分子。除去溴乙啶后,每种样品中都含有一组超螺旋数即拧数(W_r)不同的闭环状分子。这些样品和天然pBR322 DNA的W_r都直接用琼脂糖凝胶电泳加以分析和测定。作者观察到用同样的培养剂在37℃培养同一菌株所获得的不同pBR322 DNA样品,其超螺旋数值可以在相当大的范围内波动。为了便于比较不同的超螺旋DNA,作者采用了一种新的单位——超螺旋跨距,它可能有助于进一步研究环状双链DNA的本质。     

质粒DNA超螺旋构象的激光喇曼光谱研究

将pBR322重组质粒DNA纯化,经琼脂糖凝胶电泳鉴定其主要具共价闭合环状空间构象。对此制备物进行激光喇曼散射光谱分析,发现在表征其二级结构为B型的特征模之外,还有另外二个表征磷酸脱氧核糖主链骨架振动状态的特征模854和1083cm~(-1)。本文对此进行探讨,认为这二个特征模与闭合环状DNA分子的超螺旋状态有关,可作为质粒DNA三级结构的特征模。碱基堆积状态分析表明,超螺旋的存在使分子中脱氧胸苷的堆积反应活性增强,并使AT碱基间Hoogsteen型氢键有相当数量的破坏,导致反映脱氧胸苷参与氢键组成的二个基团振动状态的特征模1378cm~(-1)产生相对于线性DNA分子的明显减色及脱氧胸苷羰基双键振动模向高波数偏移。     

土拨鼠肝炎病毒表面抗原基因的位置,核苷酸序列及其与人的乙型肝炎病毒表面抗原基因的比较

结果部分(摘登) 开始DNA序列分析的时候,首先要用几种最有效的限制性内切酶消化Eco WHV DHA~+,并用2％琼脂糖凝胶电泳把这些DNA片段分开。如图Ⅰ(从略见原文)所示:HaeⅢ和HinfⅠ消化的Eco WHV DNA。给出了一系列体积大小不同盼DNA片段,其中各有一个片段大于1000个碱基。用HaeⅢ和HinfⅠ混合消化时,这些大片段消失了。这     

片段富集后以质粒为载体直接克隆构建文库

最近,我们叙述了应用较小的然而却是有代表性的质粒构建文库技术,对特异性基因组DNA进行克隆的一种简便而快速的实验方法(1)。这一方法是用多种限制性内切酶对基因组DNA进行消化,用Southern吸印分析方法鉴定出所需要的片段,然后用琼脂糖凝胶电泳(?)定分子大小。     

限制性片段凝胶电泳

DNA琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳装置的设计有很多种。有些装置很容易用玻璃或有机玻璃制成,而且用这些简单装置可得到极好的结果(图1)。     

庆丰链霉菌质粒DNA的分离及电镜观察

本文报道用清亮裂解液PEG沉淀法从庆丰链霉菌M-15菌株中分离到质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳用溴化乙锭染色及CsCl-EtBr密度梯度离心,在紫外线下观察均表明除了染色体带之外还有一条质粒带。我们摄制的电镜照片表明存在共价闭合超盘旋和开放环形两种分子构型,以多数大小相近的分子周长取平均值,按1微米=2.07×10~6道尔顿的公式计算,庆丰链老菌质粒DNA分子量约为10×10~6道尔顿。     

人乙型肝炎病毒(HBV)adr亚型基因组的多态性

由乙型肝炎adr亚型病毒(HBVadr)携带者26人的混合血清,得到了HBVadr基因组克隆株(PADR)158株,对这些克隆株进行四种限制性内切酶(BglⅡ,HindⅢ,PstⅠ,XhoⅠ)切点测定,并对其中S株的13种限制性内切酶图谱进行比较研究,发现同为adr亚型病毒,其基因组的限制性酶切图谱存在差异。另外,通过HindⅢ)切点得到的12个克隆株(PADR-H),也进行了酶切图谱分析。在这170个克隆株中,已经发现了5种类型的HBVadr基因组限制性酶切图谱,其中有6种酶(AvaⅠ,EglⅠ,BglⅡ,HincⅡ,HindⅢ,HpaⅠ)的7个变异点。本文报道了HBVadr基因组的多态性现象。     

DNA拓扑异构酶Ⅱ与ⅠA的进化分析

DNA拓扑异构酶与断开DNA链和改变其拓扑结构有关。先前的研究认为,拓扑异构酶TypeⅡB是由TypeⅡA通过基因的复制、重组和缺失所造成。然而,本研究结果则显示,TypeⅠA与TypeⅡB的进化关系较近,而TypeⅡA与TypeⅡB的关系较远。因此,TypeⅡB可能是由TypeⅠA演化而来,或者说,TypeⅡB是TypeⅠA在古细菌中的特化形式;TypeⅡB可能是由TypeⅡA通过形成TypeⅠA后演化而成的,而不是由TypeⅡA直接通过基因的复制、重组和缺失所造成。在由TypeⅡA演化成为TypeⅠA,最后演化为TypeⅡB的过程中,DNA拓扑异构酶的催化机制也发生了变化从需要金属离子的协助,演化到了不需要镁离子的存在协助其催化。