红色诺卡氏菌的生物活性

为了考察红色诺卡氏菌菌体(NC)的生物活性, 通过一定浓度的NC对小鼠灌胃给药, 检测其毒性及对免疫器官、巨噬细胞(MΦ)吞噬功能的影响和对肉瘤S180抑制作用。结果表明小鼠口服NC, LD50>10 g/kg; NC明显增加小鼠胸腺脾脏重量、提升白细胞数量和提高小鼠MΦ的吞噬活性; 对小鼠腹腔MΦ具有明显的激活作用, 激活了的MΦ能增强抑杀白色念珠菌作用, 正常的小鼠MΦ也有一定的杀菌作用, 两者差异显著; 对小鼠S180腹水型转实体瘤具有明显的抑制作用。由此得出的结论是, NC毒性低, 能显著增强机体     

诺卡氏菌型放线菌的分类

诺卡氏菌型放线菌在分类学上属于细菌域 ,厚壁菌门 ,放线细菌纲 ,放线菌目中的一类形态相似的微生物。在自然界中分布广泛 ,但由于分离、分类方法所限 ,绝大多数 ( 85%以上 )还没有被人们所认识。诺卡氏菌型放线菌是一类重要的自然资源 ,某些种能产生抗生素 ,如利福毒素等 ;有些种产生可供利用的重要的代谢产物 ,如 2、3 二羟基 苯甲酸、环已乙酸、羟基苯酮丁酸、Ｌ 组氨酸、1 6α 羟基甾体等 ;某些种产生重要的酶类 ,如胆固醇氧化酶、葡萄糖异构酶、溶菌酶等 ;有些种可用于废水 (物 )的生物处理。另一方面 ,也有些种引起人和动物的诺卡氏…     

诺卡氏菌形放线菌的化学分类

通过对28株分别代表12个属的诺卡氏菌形放线菌及有关分类单位的胞壁组分、枝菌酸、甲基萘醒、磷酸类脂等化学特性的分析,结合数值分类,在相似值(s.m)80％水平上将这类菌分成了两个大的化学类群,在90％水平上再分成四个小的类群。除拟诺卡氏菌属是显著的化学异源类群外,其余均与传统分类的属一致,形成独立的化学分类单位。讨论了化学分类在诺卡氏菌形放线菌分类研究中的应用及对出现的化学异源类群的认识。     

诺卡氏菌形放线菌与有关分类单位的枝菌酸和磷酸类脂分析

通过对14株胞壁为I型和IV型的诺卡氏菌形放线菌与有关分类单盘的枝菌酸和磷酸类脂的分析,发现胞壁IV型原名为空腔诺卡氏菌N. coeliaca KCC A-0007菌株不含枝菌酸,磷酸类脂不属于任何已知类型(除含PE外,还含有PC),萘醌类型为MK-8(H4)。指出这株菌应从诺卡氏菌属转入无枝菌酸菌属,改定为空腔无枝菌酸菌Amycolata coeliaca[(Gray)Waksrnanet Henrici] comb. Nov. Liu ＆ Ruan,1986。另外还提出,区分类诺卡氏菌与链霉菌时,磷酸类脂类型比形态断裂特征更为重要。为此,将一株原定名为阿勒泰类诺卡氏菌Nocardioides al-taiensis (Wang,1982),依其磷酸类脂分析结果,与链霉菌(Ⅱ型)相同,而与类诺卡氏菌(I型)不同,改定为阿勒泰链霉菌Streptomyces altaiensis (Wang) comb．Nov．Liu ＆ Ruan, 1986。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架辅助治疗肿瘤作用的研究个例分析及文献复习

摘要 目的：探究红色诺卡氏菌细胞壁骨架(Nocardia rubra cell wall skeleton, N-CWS)辅助治疗肿瘤作用的研究。方法：在北京协和医院肿瘤内科近5年收治的实体肿瘤患者中,选取愿意接受N-CWS辅助治疗的患者,皮下注射红色诺卡氏菌细胞壁骨架（商品名艾克佳）,200～400 μg/次,每周2次,监测其肿瘤标志物血清癌胚抗原(serum carcinoembryonic antigen, CEA)、影像学及体力状况评分(eastern cooperative oncology group,ECOG评分)等变化,评估N-CWS疗效。结果：病例1加用N-CWS后CEA下降并保持低值4月左右,ECOG评分保持在0~1分。病例2加用N-CWS后CEA下降并维持稳定2月,ECOG 0~1分,患者自觉使用后体力较前好转。病例3在化疗6程后CEA保持最低,并保持稳定1个月。ECOG 保持在0~2分。病例1和病例2的CEA保持稳定的时间长于病例3,且ECOG评分保持低于病例3。结论：使用N-CWS辅助治疗肿瘤,患者CEA水平下降,体力状况改善,显著的改善了患者的症状。     

诺卡氏菌型放线菌细胞中脂肪酸的气相色谱分析

采用Sherolock全自动微生物鉴定系统,用气相色谱法,分析测定了4株诺卡氏菌型放线菌分离菌株的脂肪酸成分和含量,结果表明,该法具有分辨率高,稳定、重现性好,简便易行等特点,在一定程度上与16S rRNA基因序列比较结果相一致,能在种及菌株水平上反映出放线菌的基因型,系统发育和分类关系,是一种较好的脂肪酸定量测定方法,尤其适用于分析大量的菌株或分离株,可应用于放线菌种水平的分类和快速鉴定.     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对肺癌细胞的抗癌作用及机制

前人研究发现红色诺卡氏菌细胞壁骨架(N-CWS)具有较好的抗癌活性,然而其对肺癌的抗癌作用机制尚不清楚。本研究旨在揭示N-CWS对肺癌细胞的抗癌作用及机制。通过平板克隆形成实验测定N-CWS对人肺腺癌细胞系A549菌落形成的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低A549细胞的菌落形成能力(p0.05)。通过5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定N-CWS对肺癌细胞增殖能力的影响,发现N-CWS可按照浓度依赖性方式降低EdU阳性细胞比例(p0.05)。通过Transwell小室和伤口愈合实验评估N-CWS对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,发现N-CWS以A549浓度依赖性方式降低细胞的侵袭和迁移数量及伤口愈合百分比(p0.05)。通过qRT-PCR和Western blotting检测N-CWS对A549细胞E-cadherin、IL-6和MMP-9表达的影响,发现N-CWS以浓度依赖性方式上调了A549细胞的E-cadherin mRNA和蛋白表达(p0.05),但以浓度依赖性方式下调了IL-6和MMP-9的m RNA和蛋白表达(p0.05)。本研究证实红色诺卡氏菌细胞壁骨架可按照浓度依赖性方式降低肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其抗癌机制与上调E-cadherin和下调IL-6和MMP-9有关。     

一株鳢源鰤诺卡氏菌致病性与全基因组分析

【背景】鰤诺卡氏菌是一种典型的条件致病菌,感染鳢、鲈等多种名优鱼类,易造成存在机体损伤或免疫机能下降的鱼持续性感染,给水产养殖业造成了巨大损失。【目的】了解临床分离鳢源鰤诺卡氏菌对乌斑杂交鳢（斑鳢♀×乌鳢♂）的致病性,并从全基因组层面了解该病原菌的基因组和致病因子信息,为鰤诺卡氏菌后续病原学及鰤诺卡氏菌病防治技术和疫苗的开发研究提供有利的数据支撑。【方法】鰤诺卡氏菌NK201610020通过回归感染试验和发病鱼靶器官组织病理分析,了解鰤诺卡氏菌的毒力和病理特征。通过对试验菌进行全基因组测序和比较基因组学分析,挖掘该菌的基因组与毒力特征。【结果】回归感染试验结果显示,除1.5×10³组外,其余5个感染组致死率高达90%,LD₅₀为1.079×10³ CFU/mL,说明试验菌毒力较强。组织病理学观察到肝、脾、肾呈现严重的病理损伤,而且有肉芽肿结构形成。试验菌全基因组测序发现,全基因组大小为8294329bp,GC含量为68.10%,共预测到编码基因7812个。比较基因组学分析发现,不同地区不同宿主来源鰤诺卡氏菌在基因组基础特...     

基于SecA基因的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方法的建立及进化分析

为对诺卡氏菌病进行快速早期诊断,建立了鰤鱼诺卡氏菌(Nocardia seriolae)TaqMan qPCR检测方法。以鰤鱼诺卡氏菌的管家基因SecA为靶标设计引物和探针,对反应条件进行优化,制作标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性测试,并将建立的方法应用于临床样品的检测。结果表明,优化后,引物和探针终浓度分别为0.3和0.1μmol/L,退火延伸温度60℃时,qPCR在9.85×10¹⁰—9.85×10⁰ copies内呈良好的线性关系,灵敏度最高达9.85 copies;重复性实验结果显示,组间和组内变异系数均小于1%;特异性结果表明,对无乳链球菌、弗氏柠檬酸杆菌和维氏气单胞菌等13种病菌均无扩增曲线;临床对42份大口黑鲈样品进行检测,结果表明,qPCR检出率比普通PCR提高14.24%;对发病大口黑鲈的组织及结节部位检测显示,结节部位菌载量大幅高于非结节部位,最高相差1000倍;SecA基因分析结果显示,SecA基因在传代中和种内高度保守,种间具有一定的离散性,是个很好的用于诺卡氏菌种鉴定的靶基因。研究建立的鰤鱼诺卡氏菌qPCR检测方...     

诺卡氏菌形放线菌β-甘露聚糖酶的化学修饰及活性中心的研究

分别用 PCMB、NEM、N- AI、NBS等对诺卡氏菌形放线菌β- D-甘露聚糖酶进行化学修饰 ,证明蛋白上的巯基、酪氨酸残基及色氨酸残基是维持酶活性的必需基团 .在加入少量底物后 ,β- D-甘露聚糖酶的最大荧光发射峰从天然状态下的 336nm处蓝移至 332 nm,且峰强度有所增大 .这表明其色氨酸残基隐藏在蛋白内部的疏水区域 .通过对该酶圆二色性扫描光谱的分析 ,表明蛋白内部有二硫键的存在 ;通过巯基乙醇化学修饰的研究 ,表明二硫键是影响该酶热稳定性的一个重要因素 .在蛋白的各种二级结构中 ,α-螺旋、β-折叠、β-转角、自由卷曲的比例分别为 1 6.6%、2 5.4%、2 0 .5%和 37.5% .     

红色诺卡菌固体培养基配方的优化

应用响应面优化设计法优化固体培养基配方,增大红色诺卡菌的固体培养细胞生物量。首先用Plackett-Burman法从现有培养基组分中找到影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素,再通过最陡爬坡法确定细胞生物量最大的配方,用作中心组合设计(Central Composite Design, CCD)实验的基础起始值,拟合数学模型方程,最后找到最优组分的组合。优化的配方转移至企业实施放大实验,对结果进行验证和比较。试验结果表明,培养基各组分中影响红色诺卡菌细胞生物量的关键因素为蛋白胨、NaCl、牛肉膏;最优固体培养基配方:蛋白胨42 g/L、牛肉膏8 g/L、NaCl 1.2 g/L、甘油10 mL/L、Na_2HPO_4·12H_2O 0.3 g/L、琼脂20 g/L。在细胞生物量方面最优固体培养基配方比原配方高104%。响应面优化设计可用于提高红色诺卡菌细胞生物量固体培养基的优化,也为红色诺卡菌培养条件、液体发酵的优化研究提供参考。     

加州鲈源鰤鱼诺卡氏菌的分离鉴定及致病性

[背景] 鰤鱼诺卡氏菌（Nocardia seriolae）是一种严重危害水产养殖业的病原菌,可引起以体表溃疡、出血及组织器官形成结节为特征的鱼类慢性肉芽肿疾病,目前尚无有效的防治方法。[目的] 明确引起安徽省临泉县某养殖场加州鲈（Micropterus salmonoides）结节病的病原菌,探讨其致病性,为该病的有效防治提供科学依据。[方法] 取肝脏结节病灶接种于TSB培养基分离优势细菌,利用表型检查结合分子生物学方法鉴定分离菌株。进一步通过检测分离菌株的毒力基因、测定其对加州鲈的半数致死量（LD₅₀）以及所感染加州鲈的组织病理学变化与组织载菌量,分析其致病性。[结果] 从病鱼体内分离到一株优势菌株NI,综合NI分离株的表型特性、16S rRNA基因序列与鰤鱼诺卡氏菌参考株相应序列的一致性以及特异性PCR扩增结果,确定其为鰤鱼诺卡氏菌。鰤鱼诺卡氏菌NI分离株携带毒力基因gapA、ibeA和mip,人工回归感染后加州鲈出现与自然病例相似的症状,其对加州鲈的LD₅₀为2.58×10⁶ CFU/尾。组织病理学观察到头肾、心脏、肝脏、胃和脾脏均出现慢性肉芽肿病变,肠管肌层疏松、肠绒毛脱落,肌肉组织中肌纤维疏松、间隙增宽。qPCR检测结果显示,组织中鰤鱼诺卡氏菌载量由高到低依次为头肾、心、肝、胃、脾、肠和肌肉。[结论] 鰤鱼诺卡氏菌是引起此次加州鲈结节病的病原菌,对该菌致病性的研究为加州鲈诺卡氏菌病的防控提供了理论依据。     

鰤诺卡氏菌对大口黑鲈头肾巨噬细胞的侵染过程

【背景】鱼类诺卡氏菌病潜伏期和病程较长,感染率和死亡率较高,给水产养殖业带来较大的经济损失,其病原鰤诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是胞内寄生菌,侵入细胞后引起慢性感染是主要的致病机制。【目的】构建鰤诺卡氏菌侵染大口黑鲈(Micropterus salmoides)头肾巨噬细胞体外模型,观察鰤诺卡氏菌侵染巨噬细胞的过程并探究鰤诺卡氏菌对巨噬细胞的凋亡作用。【方法】采用密度梯度离心法分离巨噬细胞,通过特异性染色和PCR扩增巨噬细胞表达基因mpeg1对细胞进行鉴定,并通过CCK-8法和氧呼吸暴发活性测定检测巨噬细胞的活性;通过倒置荧光显微镜和流式细胞术观察侵染过程中细菌与细胞的形态与数量变化;通过双荧光流式细胞术检测、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放试验及线粒体膜电位检测,探究鰤诺卡氏菌对巨噬细胞的凋亡作用。【结果】从大口黑鲈头肾分离获得纯度高的巨噬细胞,经染色和PCR法鉴定为巨噬细胞;筛选出最优的体外培养条件为1640培养基+1%青霉素链霉素+1%胎牛血清。在脂多糖刺激后,巨噬细胞的氧呼吸暴发能力显著提高(P<0.05)。GFP-鰤诺卡氏菌侵染细胞2 h后细菌被细胞吞噬,4 h细胞变圆且贴壁率降低,6 h细菌大量繁殖并包围细胞,8 h后细胞大量死亡。凋亡相关实验结果表明,侵染初期巨噬细胞凋亡率增加,LDH释放增加,线粒体膜电位下降;随着侵染时间延长,细胞凋亡率下降、LDH释放量及线粒体膜电位下降减少,说明鰤诺卡氏菌对巨噬细胞起先促进后抑制凋亡的作用。【结论】通过密度梯度离心法成功分离大口黑鲈头肾巨噬细胞,并通过鰤诺卡氏菌侵染细胞后初步摸清鰤诺卡细菌在细胞水平的致病机理,建立了鰤诺卡氏菌侵染大口黑鲈头肾巨噬细胞的体外模型;证实了鰤诺卡氏菌可侵染巨噬细胞并抑制细胞凋亡,从而达到在巨噬细胞内存活,为进一步开展鰤诺卡氏菌与巨噬细胞相互作用并阐明鰤诺卡氏菌的致病机制奠定了研究基础。     

Oxidation of isoeugenol by Nocardia iowensis

Isoeugenol is a starting material for both the synthetic and biotechnological production of vanillin and vanillic acid. Nocardia iowensis DSM 45197 (formerly Nocardia species NRRL 5646) resting cells catalyze the conversion of isoeugenol to vanillic acid, vanillin, vanillyl alcohol and guaiacol. The present study used a variety of chemical, microbial and enzymatic approaches to probe the pathways used by N. iowensis in the oxidation of isoeugenol to these products. Of three possible pathways considered, initial side-chain olefin epoxidation, epoxide hydrolysis to a vicinal diol, and diol cleavage to vanillin and subsequently further oxidation to vanillic acid appears as the most likely route. Isoeugenol was not oxidized to ferulic acid, a well-known microbial transformation precursor for vanillin and vanillic acid. ¹⁸O-Labeled oxygen (one atom) and water (two oxygen atoms) were incorporated into vanillic acid during the whole-cell biotransformation reaction with isoeugenol indicating the likely involvement of oxygenase and hydrolase systems in the bioconversion reaction. Vanillin was converted to singly labeled vanillic acid in the presence of H₂¹⁸O suggesting the presence of an aldehyde oxidase. Cell extracts achieved the conversion of isoeugenol to vanillic acid and vanillin without cofactors. Partial fractionation of two enzyme activities supported the presence of isoeugenol monooxygenase and vanillin oxidase activities in N. iowensis.     

9株鱼源鰤诺卡氏菌生物学特征和致病性比较

[背景]鰤诺卡氏菌(Nocardia seriolae)是一种革兰氏阳性好氧菌,易引起鲈形目鱼类结节病发生,近几年对大口黑鲈、杂交鳢等名优鱼类的危害越来越大.[目的]比较分析9株不同年份、不同地区患结节病的不同淡水鱼品种分离的鰤诺卡氏菌的种间同源关系、生长特性、致病性以及药物敏感性差异,为进一步研究制定相应的防控与治疗...     

狭叶薰衣草的离体培养及挥发性成分的分析

为建立新疆狭叶薰衣草(Lavandula angustifolia)的快速繁殖体系,以种子、茎、叶为外植体,对种子萌发、愈伤组织诱导、丛芽分化和生根的最适培养条件进行了研究;用水蒸气蒸馏法提取狭叶薰衣草挥发油,采用气相色谱-质谱法测定挥发油成分。结果表明,种子浸泡的适宜时间为6 h,切开种皮培养,出芽时间最少为6 d;诱导种子出芽的适宜培养基为MS+6-BA2 mg/L;以茎为外植体诱导愈伤组织效果较好,适宜培养基为MS+6-BA 2 mg/L+2,4-D 1 mg/L;诱导分化丛芽的适宜培养基为MS+6-BA 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L;生根的适宜培养基为1/2MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L;盆栽薰衣草和无菌苗薰衣草的挥发油主要成分相差较大,离体培养的薰衣草的主要挥发性成分有叶绿醇、丁香油烃、氧化石竹烯等。     

Cloning and Characterization of the Replicon of the Nocardia italica Plasmid, pNI100

A 19-kb plasmid, pNI100, was isolated from Nocardia italica CCRC12359; its replicon was cloned and characterized as having a single open reading frame (ORF) of 1188 bp specifying 396 amino acids (aa). Analyses of the deduced aa sequence of the Rep protein indicated that characteristics of three consensus sequences and a P-loop-like motif in the Rep protein of plasmid pSG5, a conjugative plasmid involving a rolling-circle replication mechanism, were conserved in those of plasmid pNI100. Phenotypically, a pock structure was produced in the regenerated mycelium by introducing pNI100 DNA into the Streptomyces lividans protoplast. This result strongly suggests that pNI100 is a conjugative plasmid and probably replicates by a rolling-circle replication mechanism. By using the replicon of pNI100, a bifunctional plasmid pNI105 that could replicate in both Escherichia coli and S. lividans was constructed and found to be a useful cloning shuttle vector.     

短叶对齿藓组织培养的研究

以采自白云鄂博主矿区的短叶对齿藓为试验材料,研究了不同消毒剂以及不同浓度植物激素6-BA和IAA对短叶对齿藓愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明:短叶对齿藓配子体最佳消毒剂及作用时间为体积浓度百分比75%乙醇浸泡30s,再用质量浓度0.1g/L升汞消毒90s;采用Knop培养基培养短叶对齿藓茎叶段,质量浓度为0.1mg/L 6-BA促进愈伤组织分化形成配子体,质量浓度1.0mg/L 6-BA则抑制短叶对齿藓愈伤组织形成,IAA有助于原丝体的萌发生长。     

抑制猪霍乱沙门氏菌的乳酸菌的分离、鉴定及潜在抑菌物质分析

猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)是一种常见的食源性致病菌。为了预防和治疗该菌引起的疾病,饲养者在饲料中大量添加抗生素,致使猪肉存在严重的食品安全问题。从健康成年无量山乌骨鸡肠道内容物中筛选出具有抑菌作用的乳酸菌,测定其对猪霍乱沙门氏菌的抑菌效果,分析乳酸菌抑制猪霍乱沙门氏菌的有效成分,并对筛选的乳酸菌种进行了分子生物学鉴定。采用双层平板法对具有抑制猪霍乱沙门氏菌的乳酸菌进行筛选,采用牛津杯法对抑菌效果进行测定,并采用酶蛋白敏感性测定、热处理、有机酸处理等方法分析抑菌活性物质有效成分,采用16S rDNA分子标记对乳酸菌进行鉴定,并构建系统发育树。结果显示,从健康鸡肠道中筛选出18株乳酸菌,其中2株对猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、肠炎沙门氏菌亚种(Salmonella enteritidis subspecies)、志贺氏菌(Shigella)、无乳链球菌(Streptococcus agatactiae)具有良好的抑菌效果;不同蛋白酶、pH处理对乳酸菌无细胞培养液抑菌效果均有不同程度的影响,但是经80℃处理的乳酸菌无细胞培养液,其抑菌效果未明显改变。经鉴定,2株乳酸菌分别为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。从健康成年无量山乌骨鸡肠道内容物中分离得到的植物乳杆菌菌株L2和短乳杆菌菌株L4对猪霍乱沙门氏菌等致病菌具有明显地抑制作用,推测其抑菌有效成分可能为小肽类及有机酸,这对减少抗生素使用,提高猪肉食品的品质与安全性具有一定价值。