慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞TLR4和NFκB的影响

目的：探讨慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞TLR4和NFκB的影响及作用。方法：采用慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,30只大鼠随机分为正常对照组（NC）、低O2高CO2 2周组（2HH组）和低O2高CO2 4周组（4HH组）,免疫组织化学法检测海马CA1／3区细胞TLR4和NFκB的表达,TUNEL法检测海马细胞凋亡。结果：模型组大鼠海马CA1／3区TLR4蛋白的表达随着时间延长而显著,2HH组（CA1：0．1275±0．0242,CA3：0．1156±0．0376）,4HH组（CA1：0．1522±0．0187,CA3：0．1427±0．0453）,与NC组比较有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。NC组大鼠海马CA1／3区可见NFκB／p65少量表达于胞浆,而模型组可见NFκB／p65在细胞核内不同程度表达,2HH组（CA1：0．1326±0．0324,CA3：0．1301±0．0112）,4HH组（CA1：0．1612±0．0428,CA3：0．1578±0．0365）,与NC组比较分别有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。模型组大鼠海马CA1／3区细胞凋亡明显增多,与NC组比较分别有显著性差异（P〈0．01）,以4HH组为著。结论：TLR4和NFκB激活可能在慢性低O2高CO2大鼠海马神经细胞凋亡中有重要作用。     

pH改变对心肌细胞内Ca2+浓度和细胞长度的影响

目的：探讨细胞内pH(pHi)改变对心肌细胞内Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)和细胞长度的影响。方法：心肌细胞内分别灌注20mmol/L丙酸钠和15mmol/L NH4Cl ,建立细胞内酸碱中毒模型。荧光指示剂indo-1和SNARF－1载入大鼠心肌细胞内,用荧光显微镜同时测定心肌[Ca^2 ]i、pHi和细胞长度。结果：细胞内酸中毒早期,收缩期和舒张期[Ca^2 ]i轻度增加,细胞缩短（CS）降低,细胞长度增加,心肌纤维对Ca^2 的敏感性和CS／[Ca^2 ]i降低（P＜0．01）;碱中毒时,收缩期和舒张期[Ca^2 ]i均较对照组降低,CS增加,细胞长度变短,心肌纤维对Ca^2 的敏感性和CS／[Ca^2 ]i增加（P＜0．01）。结论：酸中毒早期[Ca^2 ]i和细胞长度增加,碱中毒时[Ca^2 ]i和细胞长度降低。酸、碱中毒对Ca^2＋敏感性的影响并非线性关系,即单位pHi变化时酸中毒对敏感性的影响较碱中毒小。     

大鼠肺纤维化细胞凋亡及Cathepsin B基因变化的关系

目的:检测大鼠肺纤维化时细胞凋亡及组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)基因的变化,探讨细胞凋亡和CB基因变化在肺间质纤维化中的意义。方法:将20只大鼠分为正常对照组及模型组,每组10只,应用末端原位杂交(TUNEL)、RT-PCR、免疫组化技术检测博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、CB mRNA水平及蛋白表达的变化。结果:模型组大鼠肺组织中细胞凋亡指数为(13．7±3．4)%,对照组为(1．9±0．3)%,两组比较差异有统计学意义(t=-11．03,P＜0．01);模型组CB蛋白表达为29．76±4．62,正常对照组为78．48±5．36,两组比较差异有统计学意义(t=23 713;P＜0．01);CB mRNA在模型组为0．9413±0．0592,正常对照组为0．4280±0．0161,两组比较差异有统计学意义(t为—26．447,P＜0．01)。结论:博莱霉素致大鼠肺间质纤维化时引起肺组织CB表达上调,启动肺组织细胞凋亡程序,在肺纤维化发生、发展中起到重要的作用。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型中瘦素及白介素-8的表达分析

目的：观察COPD大鼠模型中瘦素（1eptin）、白细胞介素8（IL-8）的表达情况,分析其相关性,探讨leptin在COPD发生发展中的作用及意义。方法：36只雄性SD大鼠随机分为①健康对照组;②COPD模型1组：分别于第（1、14）d经气管内注入内毒素200ug,熏5％香烟（第1、14d除外）,2h／d,共4周;⑧COPD模型2组：单纯熏5％香烟2h／d,共12周。观察肺组织病理变化,免疫组化法测定leptin、IL-8在支气管肺组织的表达情况,放免法测定血清leptin及IL-8浓度。结果：细胞因子leptin及炎性因子IL-8在支气管肺组织阳性表达。LPS联合熏烟诱导COPDl组支气管肺组织中leptin（52．67±04．72）和IL-8（59．56±3．94）表达较单纯熏烟诱导COPD2组leptin（38．89±2．57）和IL-8（55．22±3．42）表达明显升高,P〈0．05,两组COPD大鼠模型支气管肺组织中leptin及IL-8表达较正常对照组leptin（16．90＋1．52）和IL-8（28．00±4．24）表达均明显增高,P〈0．05,COPD1组血清中leptin（3．26±0．95）ng／mL和IL-8（107．51±13.38）pg／mL较COPD2组中leptin（2．42±0．69）ng／mL和IL-8（（94．07±11．20）pg／mL明显增高,P〈0．05,两组COPD大鼠模型血清中leptin及IL培浓度较正常对照组leptin（0．95±0．56）ng／mL和IL-8（39．48±6．35）pg／mL浓度显著升高,P〈0．05。血清中Leptin与IL-8表达水平呈显著~-ffn关（r值分别为0．720．670．84均P〈0．05）。经过q检验,两两之间比较均有统计学意义。结论：leptin和IL-8均参与cOPD炎症反应过程,并且具有相关性,LPS促进二者的表达。     

青藤碱对人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度影响的体外研究

目的探讨青藤碱（SIN）对人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度的体外影响及其效应机制。方法建立体外人外周血CD4^＋T淋巴细胞模型,分别作以下处理：（1）空白对照组;（2）环孢素（CsA）组（50ng／m1）;（3）低浓度SIN组（10μmol／1）;（4）中浓度SIN组（200μmol／1）;（5）高浓度SIN组（1000μmol／1）。分别用MTT比色法和流式细胞术（FCM）检测CD4^＋细胞增殖和细胞内Ca^2＋荧光强度。采用方差分析比较各组间差异的统计学意义。结果（1）高浓度SIN组、中浓度SIN组与其他各组细胞增殖抑制率存在差异（F=1444．228,P=0．000）;（2）FCM检测细胞内Ca^2＋浓度结果：中浓度SIN组、高浓度SIN组与其他各组差异有统计学意义（F=479．055,P=0．000）;（3）经SIN处理后,人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖抑制率和细胞内Ca^2＋浓度之间存在负相关r=-0．836,P=0．005）。结论SIN能浓度依赖性地抑制人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖和细胞内Ca^2＋浓度升高,人外周血CD4^＋T淋巴细胞增殖抑制率和细胞内Ca^2＋浓度之间存在显著性负相关。     

腹膜淋巴孔与淋巴转归NO-cGMP-Ca2+信号转导途径研究

为研究一氧化氮(nitric oxide,NO)调节大鼠腹膜淋巴孔和淋巴吸收的细胞内信号转导机制,在体外培养的间皮细胞上,利用cGMP检测试剂盒和激光共聚焦扫描显微镜,研究NO对间皮细胞内cGMP和游离钙离子浓度(Ca^2 )的影响;并利用动物实验研究NO-cGMP-Ca^2 通路对大鼠腹膜淋巴孔和淋巴吸收的影响。结果发现：(1)与对照组相比,NO供体Sper NO （spermine／nitric oxide complex)可以剂量依赖性地升高间皮细胞内cGMP的浓度(P＜0．01)。此作用可被可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylyl cyclase,sGC)特异性抑制剂1H-[1,2,4]噁二唑[4．3-a]喹喔啉-1-one酮(1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one,ODQ)阻断(P＜0．05,P＜0．01)。Sper／NO可使间皮细胞内[Ca^2 ],相对水平降低(P＜0．05),但此效应可被ODQ阻断;L-型电压依赖性钙通道阻滞剂nifedipine,可使细胞内的[Ca^2 ];在短时间内迅速明显下降(P＜0．05),达平衡后再加入Sper／NO并不能引起[Ca^2 ];的进一步改变(P＞0．05);(2)NO可以剂量依赖性地提高大鼠膈组织淋巴孔最大分布面积(P＜0．01)和对示踪剂的吸收量(P＜0．05),ODQ可明显抑制NO引起的淋巴孔和淋巴吸收的改变(P＜0．01)。该结果首次发现nifedipine能显著增加淋巴孔最大分布面积(P＜0．01)及膈组织对台盼蓝的吸收量(P＜O．05),而且nifedipine预处理后Sper／NO并不能使淋巴孔的淋巴吸收进一步升高(P＞0．05)。结果提示,NO可以通过降低cGMP水平降低大鼠腹膜间皮[Ca^2 ],且此过程和L-型电压依赖性钙通道有关;NO可通过NO-cGMP-[Ca^2 ],通路,促进淋巴孔的开放和吸收。     

大鼠脑创伤后caspase-3的过度表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠脑创伤后海马神经组织中casepase-3表达及其在细胞凋亡中的机制。方法：雄性Wistar大鼠72只随机分成对照组和创伤组。用Marmarou方法造成大鼠重型弥漫性颅脑创伤,采用免疫组织化学检测海马CA1区神经细胞casepase-3蛋白表达情况,原位细胞DNA断裂检测末端标记（TUNEL）法观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡动态变化。同时行TUNEL与caspase-3双标染色。结果：对照组海马区神经细胞casepase-3未见明显表达,创伤组海马CA1区神经细胞casepase-3表达在伤后3小时开始升高,伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天下降明显。对照组海马区未见TUNEL阳性细胞,创伤组海马区TUNEL阳性细胞伤后3小时开始增多,伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天下降。可见创伤组TUNEL染色与caspase-3免疫染色双标阳性的细胞伤后6小时细胞数量逐渐增多,于伤后3天达高峰（P〈0．01）,伤后7天双标阳性细胞数量下降。Casepase-3表达与TUNEL阳性细胞明显相关（P〈0．01）。结论：大鼠脑创伤后casepase-3的过度表达是影响大鼠脑创伤后神经细胞凋亡原因之一,抑制casepase-3活性表达对神经组织起保护作用。     

TNF—α对哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖及ERK1／2活性的影响

目的探讨TNF—α对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖及对ASMCs上ERK1／2mRNA、p-ERK1／2表达水平的影响。方法通过对哮喘模型大鼠ASMCs培养,分别以0．2μg／L、1．0μg/L、20μg/L TNF-α干预ASMCs生长。采用流式细胞仪、MTT法检测ASMCs增殖情况,观察不同浓度TNF—α对ASMCs增殖的影响。RT-PCR检测ASMCs上ERK1／2mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测磷酸化ERK1／2蛋白的表达及定位。结果哮喘组ASMCsS期比例、A值、ERK1／2mRNA、p-ERK1／2蛋白的表达量分别为（34．45±2．08）％、（0．550±0．010）、（0．995±0．118）、（130．77±4．16）,与对照组（11．17±0．96）％、（0．292±0．008）、（0．576±0．098）、（163．82±1．38）比较均显著增高（均P〈0．01）。各TNF—α干预组ASMCs的S期比例、A值、ERK1／2mRNA和p-ERK1／2蛋白表达量与哮喘组比较均显著降低（均P〈0．01）,0．2μg/L和1．0μg／LTN-α组p-ERK1／2蛋白表达量高于对照组（P〈0．01）,20μg／L TNF-α组p-ERK1／2蛋白表达量与对照组比较无差异（P〉0．05）。结论与正常鼠相比,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖明显,处于S期的细胞比例明显增高。经TNF—α干预后,慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞处于S期的细胞比例减少,增殖减弱,TNF-α可能抑制慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖。TNF—α可下调慢性哮喘大鼠气道平滑肌细胞上ERK1／2mRNA及p-ERK1／2表达,TNF-α可能通过抑制ERK信号转导通道的活性对气道平滑肌细胞的增殖进行调控。     

缺血后处理对大鼠再灌注损伤肺细胞凋亡的影响

目的：探讨缺血后处理对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响。方法：健康雄性sD大鼠24只,随机分为对照组（C组）、缺血／再灌注组（I／n组）和缺血后处理组（IPostC组）（n=8）。对比观察各组血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）活力及含量变化,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡情况,免疫组化及RT-PCR法检测肺组织中Bax、Bcl一2蛋白和基因的表达。结果：I／R组与c组相比,MDA含量、MPO活力明显升高,SOD活力明显下降（均P〈0．01）,肺组织原位细胞凋亡检测示I／R组凋亡指数（AI）（39．03±3．46）显著高于C组（2．88±0．34）,Bcl-2／Bax比值在蛋白和基因水平明显降低（均P〈0．01）;IPostC组与I／R组相比MDA含量显著降低（P〈0．05）,MPO活力显著降低（P〈0．01）,SOD活性升高（P〈0．01）,AI为8．03±0．88显著低于L／R组,并能明显升高Bcl-2／Bax比值（均P〈0．01）。结论：缺血后处理通过减轻脂质过氧化反应及中性粒细胞聚集,降低Bax／Bel．2比值,使肺组织细胞凋亡减少,从而有效地减轻肺缺血／再灌注损伤。     

米诺环素对糖尿病大鼠视网膜神经细胞凋亡的影响

目的：观察米诺环素对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡的影响,研究米诺环素对糖尿病视网膜神经保护作用,对米诺环素在糖尿病视网膜疾病中抑制神经细胞凋亡提供理论支持。方法：选择健康成年雄性SD大鼠30只,随机分成正常对照组、糖尿病模型组和米诺环素治疗组,每组10只。腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠糖尿病。米诺环素治疗纽给予米诺环素腹腔注射（45mg／kg）,共注射10d,模型组和对照组腹腔注射等体积生理盐水,于给药后8周的3组动物处死,冰浴下取其视网膜组织,随后制备视网膜石蜡切片,采用末端脱氧核糖核酸介导生物素化脱氧尿嘧啶缺口末端标记L（TUNEL）法进行凋亡细胞原位标记,行视网膜神经细胞凋亡计数,对所有数据进行统计学分析。实验结果拟用均数和标准差（x±s）表示,P〈0．05为差异有统计学意义。结果 相同观察时相,与阴性对照组比较,模型对照组大鼠视网膜TUNEL阳性细胞显著增多（P〈0．01）,在米诺环素组,大鼠视网膜TUNEL阳性细胞数比模型对照组明显减少,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：米诺环素能有效降低糖尿病大鼠视网膜神经细胞的凋亡,对糖尿病视网膜神经细胞有保护作用。     

Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨人参皂甙Rb1、Rg1在肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡中对Bol-2、Bax表达的影响。方法：制备家兔肾缺血／再灌注血清（SIR）和对照组血清（SC）用于HK-2细胞培养,TUNEL法检测细胞凋亡。实验分组：对照组、缺血／再灌注组、Rb1干预组、Rg1干预组,培养24h后免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax的表达。结果：与缺血／再灌注组比较,Rb1干预组和Rg1干预组Bax的表达明显下降（P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值增大。结论：人参皂甙Rb1、Rg1对肾缺血／再灌注血清诱导HK-2细胞凋亡具有保护作用。     

香烟烟雾暴露对雄性大鼠血浆尼古丁、可替宁的影响

目的通过对吸烟大鼠血浆尼古丁、可替宁含量的测定,探讨香烟在体内的内暴露水平。方法清洁级SD雄性大鼠160只,随机分为2、4、6、8、12周的低、中、高染毒剂量组及对照组,每组10只。采用呼吸道静式染毒,每日染毒一次,染毒周期为2、4、6、8、12周。观察大鼠的一般毒性效应,运用气相色谱-质谱联用法检测吸烟大鼠血浆中尼古丁、可替宁的含量。结果香烟烟雾暴露组大鼠在第3周后逐渐开始出现间歇咳嗽,腹式呼吸加剧,鼻噪音等症状,暴露时间越长,症状越明显;染毒剂量越高,染毒周期越长,大鼠体重减少越明显,与空白对照组相比,差异有显著性(P0.01);大鼠血浆尼古丁的保留时间为7.5~8.5 min,随暴露时间的延长,暴露剂量的增加,大鼠血浆中尼古丁含量较空白对照组(155±56.65)ng/m L有所增加;大鼠血浆可替宁的保留时间为11.5~12.5 min;随暴露时间的延长,暴露剂量的增加,大鼠血浆中可替宁含量较空白对照组(340±41.97)ng/m L有所增加,且呈现剂量-反应关系,不同暴露周期间可替宁含量的差异有显著性(P0.05),且暴露时间与暴露剂量存在交互效应(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可造成大鼠机体不同程度的损伤,大鼠血浆可替宁浓度能够有效反映香烟烟雾内暴露情况,且呈现较好的剂量-反应关系。     

反复正加速度暴露后大鼠心肌的细胞凋亡改变

目的：探讨不同水平的1周重复多次的正加速度（＋Gz）暴露后大鼠心室肌凋亡的现象及变化规律。方法：12只雄性SD大鼠随机分为＋6Gz组,＋10Gz组和对照组,每组4只：＋Gz组大鼠分别暴露于＋6Gz／3min和＋10Gz／3min,1次／d,连续暴露1周;对照组大鼠置于离心机室,但不受加速度作用。大鼠于末次暴露后1天,取左心室,采用透射电镜和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察心肌细胞凋亡情况。所有实验数据进行方差分析及LSD—t检验。结果：电镜下,除＋10Gz组可观察到心肌细胞核内异染色质增多、浓缩、边集现象外,各组未见典型的凋亡改变。TUNEL染色可见,＋6Gz组、＋10Gz组大鼠心肌细胞凋亡指数较对照组均显著增高（F=42．47,t6G=5．04;t10G=7．43,P〈0．01）;＋10Gz组大鼠心肌凋亡指数较＋6Gz组显著增多（t6G／10G=2．39,P〈0．05）。结论：＋Gz重复暴露可引起大鼠心肌细胞凋亡,且随着G值的增大,细胞凋亡指数呈增多趋势。     

KI对l染铅近曲肾小管上皮细胞I A 表达及凋亡的影响

目的：研究碘化钾对染铅肾小管上皮细胞XIAP的表达及凋亡的影响,探讨其对抵抗铅导致的近曲肾小管上皮细胞损伤的可能机制。方法：应用流式细胞术检测染铅HK-2细胞及对照组细胞中XIAP的表达及凋亡情况。结果：染铅HK-2细胞中XIAP的表达明显低于对照组,且虽然铅浓度的增高而降低（P〈0．05／P〈0．01）,碘化钾能够减弱上述变化（P〈0．05／P〈0．01）;染铅HK-2细胞的凋亡率明显高于对照组,且虽然铅浓度的增高而升高（P〈0．05／P〈0．01）,碘化钾能够降低染铅细胞的凋亡率（P〈0．05／P〈0．01）。结论：碘化钾能够上调染铅HK-2细胞中抗凋亡蛋白XIAP的表达,降低凋亡率,在一定程度上降低铅对细胞的损伤。     

慢性高原病血清血管生成因子的变化

目的：慢性高原病（CMS）以红细胞过度增生、肺动脉高压和低氧血症为特征,但对该病的发病机制尚未完全阐明。本研究以CMS患者和高原世居藏族健康人为研究对象,探讨血管生成相关因子在CMS发生、发展过程中的作用。方法：以海拔4380m地区的CMS患者35例（CMS组）和高原世居藏族健康人13名（世居组）为研究对象,西宁地区（海拔2260m）世居健康人17名为对照组,采用固相双抗体夹心ELISA方法测定血清碱性成纤维生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）和血小板源生长因子（PDGF）浓度,同时测定血红蛋白（Hb）浓度、红细胞比积（Hct）和动脉血氧饱和度（SaO2）。结果：血清bFGF浓度CMS组（107．26±7．86）ng／L与世居组（37．01±9．16）ng／L和对照组（40．58±5．34）ng／L比较,有显著差异（P〈0．01）;血清PDGF浓度CMS组（630．18±9．89）ng／L与世居组（292．16±6．88）ng／L和对照组（287．68±8．33）ng／L比较,有显著差异（P〈0．01）;血清VEGF浓度CMS组（543．74±6．76）ng／L与世居组（125．51±7．26）ng／L和对照组（76．26±4．60）ng／L比较,有显著差异（P〈0．01）,世居组与对照组比较,也有显著差异（P〈0．01）。CMS患者血红蛋白（Hb）浓度与其血清bFGF、PDGF和VEGF水平均呈正相关（P〈0．01）。血清bFGF、PDGF、VEGF之间亦呈正相关（P〈0．01）。结论：CMS患者血清bFGF、PDGF和VEGF水平显著高于居住在同一个海拔高度的健康人和居住在西宁地区的健康人,提示CMS患者血管生成因子过度表达,血管新生可能是CMS病理生理的重要方面;血清VEGF水平高原健康人高于西宁地区健康人,提示VEGF高表达可能是高原健康人对高原环境适应机制的组成部分;CMS患者Hb浓度与其血清bFGF、PDGF和VEGF水平均呈正相关,提示在CMS患者中,bFGF、PDGF和VEGF可能与红细胞生成有?     

叶酸靶向载顺铂羧甲基-β-环糊精纳米复合物的制备及对鼻咽癌的体外抑制效应

为达到鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NeC）的靶向化疗,该研究通过酰胺化反应和配位偶联技术制备叶酸（folicacid,FA）分子靶向载川页铂（cisplatin,CDDP）羧甲基-β-环糊精（carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM—β—CD）纳米复合物（FA-CM—β—CD—CDDP）,采用邻苯二胺（o-phenylenediamine,OPDA）比色法检测复合物中CDDP含量,紫外分光光谱检测FA含量,透射电镜观察复合物形态,激光粒度仪测定复合物粒径大小。荧光显微镜观察NPC叶酸受体（folatereceptor,FR）阳性HNE-1细胞及FR阴性CNE-2细胞对偶联FITC的复合物的吞噬及OPDA比色法检测细胞内CDDP的浓度。通过MTT法、集落形成实验和流式细胞术检测复合物对HNE-1细胞增殖能力和凋亡的影响。研究结果显示,复合物中偶联的FA和CDDP浓度分别为340gg／mL和2mg／mL,CDDP包封率达20．00％,复合物粒径均匀且大小为157．8nm。HNE-1细胞内见较多FITC,细胞内CDDP浓度为6．24ng／mL,而CNE-2细胞内FITC较少,细胞内CDDP浓度仅约2．01ng／mL。HNE-1生长抑制率在24h明显高于对照组（CM—β—CD—CDDP）,其IC50（4．80μg／mL）明显低于对照组（6．97μg／mL）,但当所载的CDDP终浓度达到16．00μg／mL时,两组抑制率均达到80％以上;作用48h两组抑制率无明显差异。在24h,当复合物的CDDP终浓度为1．00μg／mL时,HNE—1的集落形成率为33．21％,明显低于对照组（52．27％）。当复合物的CDDP终浓度为0．25μg／mL和1．00μg／mL时,HNE-1的凋亡率分别达12．65％和22．35％,明显高于对照组（6．91％和14.21％）。研究结果表明,成功构建的FA—CM—β—CD．cDDP纳米复合物能够靶向抑制FR阳性的NPC细胞增殖并促进其凋亡。     

血必净干预对慢性阻塞性肺疾病大鼠体内炎症因子的影响

目的：通过观察血必净干预对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠体内炎症因子的影响,探讨血必净治疗COPD的机制。方法：36只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、COPD模型组（简称模型组）、血必净干预组（简称干预组）,每组12只。采用香烟烟雾暴露加气管内滴注脂多糖法建立COPD大鼠模型。造模时间共30天,其中干预组在后15天给予血必净4ml／Kg体重尾静脉注射。分别测定各组肺功能,肺组织病理学变化,血清及肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）浓度。结果：模型组大鼠FEV0．3／FVC[（57．8±5．6）％]和动态肺顺应性（Cydn）[（0．098＋0．006）cmH20·mL^-1·s^-1,lcmH20=0．098kPa]均明显低于对照组[（81．4±3．1）％和（0．195±0．012）cmH20·mL^-1·S^-1],而干预组大鼠[（67．2±3．2）％和（0．142±0．024）cmH20·mL‘S‘。]则较模型组有显著提高,差异均具有统计学意义（t值分别为-13．940、-15．165、-5．552、-6．927,均P〈0．01）;模型组大鼠平均气道阻力（RI）[（0．802±0．070）mL／cmH20]明显高于对照组[（0．224±0．069）mL／cmH20],而干预组[（0．475±0．050）mL／cmH20]则较模型组有明显下降,差异均具有统计学意义（t值分别为-22．389、-12．658,均P〈0．01）;模型组大鼠血清和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-8浓度[（27．8±7．4）pg／mL和（340．0±79．6）pg／mL、（209．9±82．1）pg／mL和（337．3±96．4）pg／mL、（37．7±11．4）pg／mL和（69．6±18．9）pg／mL]均显著高于对照组,差异均具有统计学意义（t值分别为-12．466、-19．648、-11．749、-16．364、12．550、14．834,均P〈0．01）,而干预组大鼠[（9．6±5．6）pg／mL和（45．6±22．9）pg／mL、（36．3±17．9）pg／mL和（42．9±20．5）pg／mL、（10．3±5．6）pg／mL和（15．7±8．0）pg／mN．~4较模型组有显著降低,差异均具有统计学意义（t值分别为-9．367、-17．390、-10．106、-14．631、10．475、12．772,均P〈0．01）。结论：COPD大鼠血清及肺泡灌洗液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-8的浓度均显著增高,血必净干预能显著下调上述关键致炎因子的表达,并与其临床症状、肺功能、病理学改变相印证。因此,我们推测：血必净可能通过下调COPD炎症时TNF-α、IL-6、IL-8等关键致炎因子的表达,进一步抑制气道炎症的级联效应来发挥其强大的抗炎作用。     

香烟烟雾和脂多糖对大鼠肺组织热休克蛋白70表达的影响

目的观察香烟烟雾和脂多糖对大鼠肺组织Hsp70表达的影响。方法48只成年雄性Wistar大鼠随机分为6组:健康对照30d组、健康对照3个月组、单纯薰香烟30d组、单纯薰香烟3个月组、单纯气管注入脂多糖组、薰香烟30d加气管注入脂多糖组,每组8只。采用SABC免疫组化法观察Hsp70在各组大鼠肺组织中的表达。结果(1)健康对照30d组、健康对照3个月组、单纯薰香烟30d组、单纯薰香烟3个月组Hsp70阳性产物的平均吸光度值分别为0·194±0·027,0·189±0·025,0·339±0·049,0·147±0·033。单纯薰香烟30d组与健康对照组30d相比大鼠肺组织Hsp70水平显著升高(P<0·05);单纯薰香烟3个月组与健康对照3个月组相比大鼠肺组织Hsp70水平显著降低(P<0·05);单纯薰香烟3个月组与单纯薰香烟30d组相比大鼠肺组织Hsp70水平显著降低(P<0·05)。(2)健康对照30d组、单纯气管注入脂多糖组、薰香烟30d加气管注入脂多糖组Hsp70阳性产物的平均吸光度值分别为0·194±0·027,0·285±0·059,0·143±0·024。单纯气管注入脂多糖组与健康对照30d组相比大鼠肺组织Hsp70水平显著升高(P<0·05);薰香烟30d加气管注入脂多糖组与健康对照30d组相比大鼠肺组织Hsp70水平显著降低,差异具有显著性(P<0·05);薰香烟30d加气管注入脂多糖组与单纯气管注入脂多糖组相比大鼠肺组织Hsp70水平显著降低(P<0·05)。结论香烟烟雾或脂多糖短期暴露使大鼠肺组织Hsp70表达升高;香烟烟雾长期暴露或香烟烟雾与脂多糖短期联合暴露使大鼠肺组织Hsp70表达降低。提示Hsp70可能与慢性阻塞性肺疾病的发病有一定关系。     

褪黑素对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护机制研究

目的：研究褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用及其机制探讨。方法：不同浓度的褪黑素作用于体外培养的内皮细胞脂质过氧化损伤模型,实验分为5组,即正常对照组（Ctrl）,脂多糖（LPS）氧化损伤组：在培养基中加入2mmol／L的LPS诱导损伤4h;LPS加MLT低剂量（200t~mol／L）组、中剂量（400ixmol／L）组、高剂量（600txmol／L）gai。采用MTT法观察MET对HUVECs活性的影响;用双波长荧光分光光度法测定HUVECs细胞内游离钙离子浓度;检测各组内皮细胞匀浆中丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH·Px）活性;用ELISA法测定培养的细胞上清液中白细胞介素6（IL．6）表达的变化;并测定细胞凋亡率。结果：①LPS作用后血管内皮细胞损伤明显,细胞增殖减少,细胞培养上清液和细胞匀浆中MDA含量、细胞内钙离子浓度和IL．6均升高,SOD、GSH-Px活性下降,凋亡率可达38．9±1．1％,均与正常对照组有统计学差异（P〈0．01）;②加入MET可明显减轻LPS对抗氧化酶SOD、GSH—Px的影响,同时MDA含量、细胞内钙离子浓度和几一6均明显下降,并显著减少凋亡细胞数量,各指标差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：褪黑素可保护和修复LPS引起的血管内皮细胞损伤,其作用途径可能与保护细胞的线粒体,提高了该细胞的抗氧化酶活性,降低细胞内钙离子浓度作用有关。     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的：建立常见凋亡诱导剂顺铂（Cisplatin）诱导非洲绿猴肾细胞（Vero）凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法：分别以不同浓度的顺铂处理Veto细胞48h,用噻唑蓝（MTT）比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果：以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4,5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为（79．02±6．10）％、（68．84±4．42）％、（56．66±4．07）％、（46．83±3．76）％、（29．04±5．93）％（P〈0．01）;经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1．66％±0．19％、16．65％±1．26％、24．82％±1．03％、36．22％±1．04％、48．49％±1．24％、43．34％±1．17％（P〈0．01）。结论：本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。