羊胎盘提取液及其组分(SPIF-Ⅰ)的免疫活性研究

对羊胎盘提取液(Sheep p lacental extract,SPE)及其组分免疫调节活性因子-Ⅰ(Sheep p lacental immunoreglating ac-tivity factor-Ⅰ,SPIF-Ⅰ)进行高效液相色谱(HPLC)分析并通过E玫瑰花环试验进行免疫生物活性评价。结果表明:在羊胎盘提取液中质量分数为11.94%的SPIF-Ⅰ同羊胎盘提取液一样能显著促进人外周血淋巴细胞E玫瑰花环形成,具有明显的剂量-效应依赖关系。SPIF-Ⅰ是羊胎盘提取液中一种具有免疫调节的小分子活性多肽。     

羊胎盘提取液及其组分(SPIF-Ⅰ)的免疫活性研究

对羊胎盘提取液(Sheep p lacental extract,SPE)及其组分免疫调节活性因子-Ⅰ(Sheep p lacental immunoreglating ac-tivity factor-Ⅰ,SPIF-Ⅰ)进行高效液相色谱(HPLC)分析并通过E玫瑰花环试验进行免疫生物活性评价。结果表明:在羊胎盘提取液中质量分数为11.94%的SPIF-Ⅰ同羊胎盘提取液一样能显著促进人外周血淋巴细胞E玫瑰花环形成,具有明显的剂量-效应依赖关系。SPIF-Ⅰ是羊胎盘提取液中一种具有免疫调节的小分子活性多肽。     

芦荟多糖的分离纯化及性质研究

采用水提醇沉法提取芦荟多糖,经DEAE-C32柱层析分离,Sephades G-100进一步纯化,得AⅠ、AⅡ和AⅢ三种芦荟多糖。Sephadex G-100凝胶色谱表明,AⅠ组分为均一组分,其分子量约为3.8×10~4。借助气相色谱技术,研究了芦荟粗多糖和AⅠ组分的单糖组成。另外,红外光谱鉴定芦荟多糖主要为吡喃多糖。     

猴头多糖分离纯化的初步研究

目的：确定适合于猴头多糖分离纯化的方法。方法：以液体发酵生产的猴头菌丝为材料,提取猴头菌丝多糖进行分离纯化,以得到多糖纯品。结果：猴头菌丝粗多糖采用Sevag法除蛋白的次数应该控制在5-8次,而且Sevag法除蛋白所得的HMP,经DEAE-纤维素柱层析初步纯化,多糖主要分布在蒸馏水洗脱部分,命名为HMPⅠ,其含量为67.5%;HMPⅠ经Sephadex G-100凝胶柱层析纯化,得到两个组分：HMPⅠa、HMPⅠb;HMPⅠa为多糖主要组分,含量为71.8%;HMPⅠa经纯度鉴定为多糖纯品。结论：DEAE-纤维素柱层析结合Sephadex G-100凝胶柱层析的纯化方法,可以获得猴头多糖纯品。     

斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究

以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶（ACPase,EC.3.1.3.2）,进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱（UV）测     

黑曲霉纤维素酶系中内切β-葡聚糖酶的分离纯化

使用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤色谱及DEAE-Sephadex A-25(A-50)离子交换色谱等分离技术,从黑曲霉(Aspergillus niger)培养液中分离到7种内切β-葡聚糖酶组分,分别称为Ⅰ-2a、Ⅰ-2b、Ⅰ-2c、Ⅰ-2d,Ⅱa、Ⅱb和Ⅲa。经凝胶电泳鉴定均为单一带。     

从米糠中提取降血管紧张素转换酶抑制剂

采用盐析法提取米糠蛋白,分别选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等单独或联合水解米糠蛋白,以从酶解米糠蛋白中分离获得具有血管紧张素转换酶（ACE）抑制活性的短肽组分。经Sephadex G-15凝胶层析和SP—Sephadex C-25离子交换层析分离各酶解组分,并检测各组分的ACE抑制活性。结果表明,米糠蛋白的酶解分离产物中含有较强ACE抑制活性的组分,其中经胃蛋白酶和胰蛋白酶共同水解时得到的小分子量寡肽组分的抑制活性最强,为后续对其进行结构分析奠定了基础。     

阳春砂多糖的分离纯化及体外抗氧化作用研究

本实验研究了阳春砂多糖(AVP)及其纯化组分的抗氧化活性,首先采用DEAE-纤维素-52离子交换柱分级洗脱阳春砂粗多糖,再采用Sephadex G-100葡聚糖凝胶色谱柱进一步纯化得到纯化多糖;分别采用超氧阴离子自由基体系、羟基自由基体系、1,1-二苯基苦基苯肼自由基体系,对阳春砂多糖的抗氧化活性进行研究,并以维生素C为阳性对照物,实验结果表明阳春砂粗多糖及纯化组分对超氧阴离子自由基、羟基自由基、1,1-二苯基苦基苯肼自由基均有较强的清除能力,AVP-3体外抗氧化活性最强。     

木霉菌发酵羊胃容物产木聚糖酶的分离纯化及特性

目的:为城市屠宰场牛羊胃容物类的生物垃圾型可再生资源的潜在工业化开发应用(城市无害鲜生物垃圾变废为宝的低碳生物循环经济工程)提供了部分可靠科学依据.方法:M-112木霉菌固态发酵羊胃容物的粗酶提取液,经20～60%饱和度的硫酸铵粗分级分离、Sephadex G-25脱盐、Sephadex G-150到Sephadex G-100分子筛顺序纯化,通过蛋白质测定、酶活测定、SDS-PAGE和底物-PAGE电泳等.结果:制备到一种分子量约为64.7kDa的电泳纯木聚糖酶,其回收率为5.59%,纯化倍数10.43,比活力为253.36IU/mg.纯化出的木聚糖酶,经性质研究表明,其Km=11.20g/L,Vmax=0.70μmoL/min;最适温度为65℃,最适pH为6.0,该酶在中温条件下稳定性好,在酸性至弱碱性(pH 3.0～8.0)条件下稳定性好.结论:采用改良的凝胶色谱技术,首次纯化出木霉菌固态发酵羊胃容物所产的木聚糖酶.     

纳豆中抗氧化肽的分离纯化与活性研究

从发酵的纳豆中提取具有抗氧化活性的多肽,通过分子筛层析和反相高效液相色谱对纳豆上清液进行分离纯化,并采用电喷雾串联质谱进行结构鉴定.结果表明:纳豆发酵后的蛋白(多肽)混合物经Sephadex G-50凝胶色谱进行分离纯化后得到3个组分(F1、F2和F3),其中组分F3的抗氧化活性最强,总还原力达到(8.4±0.6)mm...     

荞麦麸皮多糖的分离纯化及其外貌表征的分析

采用水提醇沉法对荞麦麸皮多糖(Buckwheat bran polysaccharide,BBP)进行提取,通过DEAE-52纤维素柱层析法和Sephadex G-200对其进行分离纯化,采用凝胶过滤法对多糖组分的分子量进行测定,采用扫描电镜对荞麦麸皮多糖及其分离纯化的多糖组分的外貌进行分析,用红外光谱对分离纯化的三个荞麦麸皮多糖组分的苷键构型进行分析。结果表明:DEAE-52纤维素和Sephadex G-200对荞麦麸皮粗多糖具有较好的分离纯化效果,得到了三个多糖组分(BBP-Ⅰ、BBP-Ⅱ和BBP-Ⅲ),其分子量分别为1.56×10~4Da、5.85×10~4Da、8.45×10~4Da。扫描电镜的结果表明,BBP其表面粗糙,凹凸不平,三个分离纯化的多糖组分形貌差异较大,分别以球状、片状、棒状为主。红外光谱扫描表明BBP-Ⅰ和BBP-Ⅲ为ɑ-糖苷键化合物,BBP-Ⅱ为β-糖苷键化合物。荞麦麸皮多糖组分外貌的差异性为其进一步的结构探究提供了重要依据。     

淫羊藿多糖的分离纯化及结构初步分析

从淫羊藿中提取多糖并鉴定其初步结构和单糖组成.采用超声-水提醇沉法提取粗多糖、Sevag法去蛋白、DEAE-52纤维素及Sephadex G-100柱层析法纯化得到淫羊藿多糖EPSⅠ-1和EPSⅡ-1.应用紫外光谱法和红外光谱法对其结构做初步分析.采用高效液相色谱法(HPLC)测定其单糖组成及摩尔比.均一的EPSⅠ-1和EPSⅡ-1多糖在紫外和红外中具有多糖的特征吸收峰,组成中含有吡喃环结构;EPSⅠ-1的单糖组成为鼠李糖和葡萄糖,摩尔比为1:1.13;EPSⅡ-1的单糖组成为果糖、葡萄糖和一个不确定的糖,摩尔比为1:1.91.有效地分离纯化了淫羊藿多糖,这为淫羊藿多糖的广泛应用奠定了实验基础.     

中国林蛙和中华蟾蜍皮肤抗菌肽的分离纯化及其抗菌活性

分别以中国林蛙长白山亚种Rana chensinensis changbaishansis和中华蟾蜍Bufo gargarizans的鲜皮为原料,通过酸化乙醇法提取抗菌肽粗提液,再经葡聚糖凝胶层析进一步分离纯化获得抗菌肽纯品,采用滤纸片法进行抑菌活性研究.结果 表明,经Sephadex G-50和Sephadex G-100分离纯化后获得3种多肽,中国林蛙与中华蟾蜍皮肤中的活性多肽对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌都具有一定的抗菌作用,其中多肽Ⅲ具有最佳的抑菌效果.抗菌肽相对含量比较的结果表明,蟾蜍皮肤中抗菌活性肽的含量较高,是理想的抗菌肽提出和纯化的源材料.     

不同分子量菊芋多糖的生物活性研究

研究不同醇沉组份的菊芋多糖分子量和其抑制α-葡萄糖苷酶活性与抗氧化活性差异。菊芋水提物分级醇沉获得粗多糖,过Sephadex G-50凝胶柱进行纯化,得到重均分子量为1959、2180、2746、2011 Da的多糖组分:JAP-1、JAP-2、JAP-3和JAP-4。测定这些组分体外抑制α-葡萄糖苷酶活性和对DPPH与羟基自由基清除能力。结果表明,JAP-4具有较明显的抑制α-葡萄糖苷酶活性,在5 mg/mL时抑制率为20.32%。JAP-1、JAP-2、JAP-3和JAP-4均有显著的抗氧化活性,其中JAP-2对DPPH自由基和羟基自由基的清除活性优于其他组分。JAP-2在2 mg/mL时对DPPH自由基和羟基自由基清除率分别达到84.50%和89.74%,接近于Vc的抗氧化活性。不同分子量菊芋多糖的活性存在差异,可能是由于分子量的不同所导致。     

家蝇幼虫体内一种抗菌蛋白的分离纯化

30%H2O2诱导家蝇幼虫90min,继续饲喂24h后利用硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25 和Sephadex G-75两步凝胶过滤、CM-Sepharose Fast Flow弱阳离子交换的纯化方法,得到一种电泳纯的抗菌蛋白,经过VDS凝胶扫描得到其分子量为28kDa,命名为AP28。抑菌活性分析表明,AP28对实验中涉及的大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都有明显的抑制作用。     

霍山铁皮石斛糖蛋白的制备及抗氧化活性

以霍山铁皮石斛枫斗为试验材料,经脱脂脱色、0.3 mol/L盐溶液浸提、Sevage法脱蛋白、硫酸铵分级沉淀、透析、聚乙二醇10 000浓缩、冷冻干燥得到粗品;经SDS-PAGE电泳、DEAE 52离子柱和Sephadex G-100凝胶柱分离纯化得到糖蛋白并测定其抗氧化活性。SDS-PAGE电泳显示硫酸铵饱和度越大,盐析作用越强,糖蛋白条带越明显,糖蛋白分子量在6.62×10~4附近;DEAE 52离子柱和Sephadex G-100凝胶柱逐步分离纯化得到2个组分的糖蛋白GP1和GP2;分光光度法测定GP1和GP2中糖蛋白含量分别约为95%和87%;抗氧化结果表明,霍山铁皮石斛糖蛋白具有较强的还原能力且可有效地清除自由基·DPPH、·OH和·O~-_2。     

鸡胚脊髓背角中神经营养活性物质的初步分离和检测

从9d龄鸡胚脊髓背、腹角组织提取液中,用SephadexC-75凝胶层析法分离出DⅠ和DⅡ,VⅠ和VⅡ各组蛋白质组分,体外培养检测各组分对鸡胚背根节的神经营养活性,结果表明,DⅡ组分具有明显的促背根节神经突起生长的作用,而DⅠ组分无此作用;经SDS-PAGE电泳检测,DⅡ组分中蛋白质的分子量范围是61-15kD。而腹角的分离组分VⅠ和VⅡ对背根神经节神经突起的生长并无明显作用。     

Nano LC-MS/MS从具有增强小鼠记忆作用的人参组分中鉴定22种新肽

在我们先前的研究中发现人参非皂苷部分具有改善小鼠记忆活性。为确定活性组分,实验采用对人参水提物经超滤、透析、Sephadex G-15凝胶柱层析分离纯化,通过UV对糖与蛋白的监测,得到P1、P2两部分。药理实验结果表明,P2经腹腔注射给药7 d,40 mg/kg,能明显改善小鼠记忆获得障碍和小鼠记忆巩固障碍。P2采用纳升级超高效液相-质谱联用仪(Nano LC-MS/MS)进行结构分析,首次从人参中得到22种新肽,且具有辅助改善学习记忆的作用。     

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定

建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法。将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7%。最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ。     

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007抗菌蛋白的分离纯化

对拮抗细菌吡咯伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)JK-SH007菌株抗菌蛋白进行了初步研究。研究发现,JK-SH007菌株的抗菌粗蛋白对热和蛋白酶K不敏感,碱性环境不利于抑菌蛋白活性的发挥。JK-SH007菌株的无菌发酵滤液经硫酸铵沉淀、透析(3.5kD)、冷丙酮沉淀(-20℃)、Sephadex G-50葡聚糖凝胶分子筛层析及DEAE-Sephadex A-25离子交换层析分离纯化,得到了蛋白组分A-Ⅱ-2,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不是单一组分,该复合组分具有明显抑制3种杨树溃疡病病原真菌金黄壳囊孢(Cytospora chrysosperma)、拟茎点霉(Phomopsis macrospore)、七叶树壳梭孢(Fusicoccum aesculi)生长的作用。