海枣曲霉地衣多糖酶和木聚糖酶的底物特异性

海枣曲霉木聚糖酶x—I、x—u和x一III作用于不同底物对,x_I对地衣多糖的水解活性最强,对麦麸半纤维素H和B也有一定的水解活性,因而该酶为具有木聚糖酶活性的地衣多糖酶(LichⅢe,l,3一l,4一卢一D—Glucan 4一glucnohydrolasc,Ec 3．2．1．73)。 X—II对燕麦木聚糖、麦麸半纤维素B和H均有很高的水解活性,对其他木聚糖及地衣多糖的水解活性也较高,因而为具有地衣多糖酶话性的木聚糖酶o x—Iil对落叶松木聚糖的水解活性最高,对其他木聚糖也有较高的水解话性,但不能水解地衣多糖等β一葡聚糖,故为一种专一的木聚糖酶。X一1水解麦麸半纤维素B、x一Ⅱ水解燕麦术聚糖及x—Iu承解落叶松木聚糖的Km值分别为9·9、2．1和1．8mg／ml。酶水解产物的纸层析分析结果表明,x—I水解不同木聚糖后的产物主要为分子量较大的寡聚木糖,未发现木二糖、木糖及阿拉伯糖。X_Il的水解产物主要为木二糖 及木二糖以上的寡糖,并有少量木糖和阿拉伯糖,且阿拉伯糖远多于木糖。X-III的水解产物中以木二糖为最多,也有较多的木二糖以上的寡聚木糖,木糖和阿拉伯糖的量较少,且阿拉伯糖远少于木糖。     

Bacillus pumilus WL-11木聚糖酶A的纯化、鉴定及其底物降解方式

对一株Bacilluspumilus WL_11木聚糖酶的纯化、酶学性质及其底物降解模式进行了研究。经过硫酸铵盐析、CM_Sephadex及SephadexG_75层析分离纯化,获得一种纯化的WL_11木聚糖酶A ,其分子量为26.0kD ,pI值9.5 ,以燕麦木聚糖为底物时的表观Km 值为16.6mg mL ,Vmax值为12.63μmol (min·mg)。木聚糖酶A的pH稳定范围为6 0至10 4 ,最适作用pH范围则在7.2至8.0之间,是耐碱性木聚糖酶;最适作用温度为45℃～55℃,在37℃、45℃以下时该酶热稳定性均较好;50℃保温时,该酶活力的半衰期大约为2h ,在超过50℃的环境下,该酶的热稳定较差,55℃和60℃时的酶活半衰期分别为35min和15min。WL_11木聚糖酶A对来源于燕麦、桦木和榉木的可溶性木聚糖的酶解结果发现,木聚糖酶A对几种不同来源的木聚糖的降解过程并不一致。采用HPLC法分析上述底物的降解产物生成过程发现木聚糖酶A为内切型木聚糖酶,不同底物的降解产物中都无单糖的积累,且三糖的积累量都较高;与禾本科的燕麦木聚糖底物降解不同的是,木聚糖酶A对硬木木聚糖降解形成的五糖的继续降解能力较强。采用TLC法分析了WL-11粗木聚糖酶降解燕麦木聚糖的过程,结果表明燕麦木聚糖能够被WL-11粗木聚糖酶降解生成系列木寡糖,未检出木糖,这说明WL-11主要合成内切型木聚糖酶A,同时发酵液中不含木糖苷酶,适合用来酶法制备低聚木糖。     

Bacillus pumilus WL-11木聚糖酶A的纯化、鉴定及其底物降解方式

对一株BacilluspumilusWL_11木聚糖酶的纯化、酶学性质及其底物降解模式进行了研究。经过硫酸铵盐析、CM_Sephadex及SephadexG_75层析分离纯化,获得一种纯化的WL_11木聚糖酶A ,其分子量为2 6 0kD ,pI值9 5 ,以燕麦木聚糖为底物时的表观Km 值为16 6mg mL ,Vmax值为12 6 3μmol (min·mg)。木聚糖酶A的pH稳定范围为6 0至10 4 ,最适作用pH范围则在7 2至8 0之间,是耐碱性木聚糖酶;最适作用温度为4 5℃～5 5℃,在37℃、4 5℃以下时该酶热稳定性均较好;5 0℃保温时,该酶活力的半衰期大约为2h ,在超过5 0℃的环境下,该酶的热稳定较差,5 5℃和6 0℃时的酶活半衰期分别为35min和15min。WL_11木聚糖酶A对来源于燕麦、桦木和榉木的可溶性木聚糖的酶解结果发现,木聚糖酶A对几种不同来源的木聚糖的降解过程并不一致。采用HPLC法分析上述底物的降解产物生成过程发现木聚糖酶A为内切型木聚糖酶,不同底物的降解产物中都无单糖的积累,且三糖的积累量都较高;与禾本科的燕麦木聚糖底物降解不同的是,木聚糖酶A对硬木木聚糖降解形成的五糖的继续降解能力较强。采用TLC法分析了WL_11粗木聚糖酶降解燕麦木聚糖的过程,结果表明燕麦木聚糖能够被WL_11粗木聚糖酶降解生成系列木寡糖,未检出木糖,这说明WL_11主要合成内切型木聚     

棘孢曲霉SML22木聚糖酶系主要组分的纯化与性

经超滤浓缩、分子筛色谱、阴离子和阳离子交换层析,由棘孢曲霉发酵液最终分离得到4个电泳纯的木聚糖酶主要组分Xy-1、Xy-2、Xy-3和Xy-4。通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得各组分的分子量分别是92.13、32.40、42.40和27.03 kD。实验证明这些酶组分均属于酸性木聚糖酶,Xy-1、Xy-2、Xy-3和Xy-4的最适反应pH分别为5.0、4.0、4.6 和3～3.5。各酶组分在酸性条件下较稳定,碱性条件下酶活丧失较快。Xy-1及Xy-2的最适反应温度在75℃,在50℃以下比较稳定;Xy-3及Xy-4最适反应温度为55℃,在40℃以下比较稳定。通过对各酶组分米氏常数的测定可知,Xy-1及Xy-2对底物桦木木聚糖的Km值分别为0.36%和0.26%,Xy-3及Xy-4的Km值为2.46%和13.9%。4种组分的Vmax分别为4.01μmol/min/mg、8.81μmol/min/mg、81.97μmol/min/mg、4.71μmol/min/mg。Cu2+、Ag+对各组分都有较强的抑制作用, Mg2+、Ba2+、Ca2+能促进Xy-3的木聚糖酶活,Ca2+也可大幅度促进Xy-4的木聚糖酶活性。     

嗜碱芽孢杆菌C-125木糖苷酶基因的表达与酶特征鉴定

嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)C-125菌株的基因组中,一个编码木糖苷酶的基因(BH1068)被克隆并在大肠杆菌中获得高效表达。通过全面分析纯化蛋白,确证了它的木糖苷酶功能。该酶在pH4～9的范围内保持稳定,最适pH值为中性,有较宽的最适温度(35°C～45°C),且能在45°C范围内保持稳定。这些特性使得该酶可在较为宽广的条件下对木聚糖进行酶促降解。该酶对人工合成底物对硝基苯-β-木糖苷(p-nitrophenyl-β-xylose,pNPX)的比活力为174mU/mg蛋白质,且木糖对其反馈抑制较弱(抑制常数Ki为300mmol/L)。结果显示该酶是活性较高且较耐木糖抑制的细菌源木糖苷酶。该酶与商品化的木聚糖酶一起水解山毛举木聚糖(Beechwood xylan)时显示了增效作用,且水解率可获40%。该酶最适pH为中性,对木糖耐受等特性与大多数来源于真菌、最适pH为酸性、对木糖敏感的木糖苷酶将有较好的互补。结果表明该酶在木聚糖或含木聚糖多糖的单糖化过程可能发挥重要作用。     

棘孢曲霉SM-L22木聚糖酶系主要组分的纯化与性质

经超滤浓缩、分子筛色谱、阴离子和阳离子交换层析 ,由棘孢曲霉发酵液最终分离得到 4个电泳纯的木聚糖酶主要组分Xy 1、Xy 2、Xy 3和Xy 4。通过SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳测得各组分的分子量分别是 92 1 3、32 4 0、4 2 4 0和 2 7 0 3kD。实验证明这些酶组分均属于酸性木聚糖酶 ,Xy 1、Xy 2、Xy 3和Xy 4的最适反应pH分别为 5 0、4 0、4 6和 3～ 3 5。各酶组分在酸性条件下较稳定 ,碱性条件下酶活丧失较快。Xy 1及Xy 2的最适反应温度在75℃ ,在 5 0℃以下比较稳定 ;Xy 3及Xy 4最适反应温度为 5 5℃ ,在 4 0℃以下比较稳定。通过对各酶组分米氏常数的测定可知 ,Xy 1及Xy 2对底物桦木木聚糖的Km 值分别为 0 36 %和 0 2 6 % ,Xy 3及Xy 4的Km 值为 2 4 6 %和1 3 9%。 4种组分的Vmax 分别为 4 0 1 μmol min mg、8 81 μmol min mg、81 97μmol min mg、4 71 μmol min mg。Cu2 、Ag 对各组分都有较强的抑制作用 ,Mg2 、Ba2 、Ca2 能促进Xy 3的木聚糖酶活 ,Ca2 也可大幅度促进Xy 4的木聚糖酶活性。     

酶法水解超级稻秸秆木聚糖制备低聚木糖的工艺研究

本文以超级稻秸秆为原料,碱溶液抽提法得到粗木聚糖,然后酶水解,制备低聚木糖。对酶解条件进行了优化,并采用高效液相色谱法对木聚糖酶解液主要组分进行了分析。结果表明,正交试验优化的最佳酶解条件为温度50℃、pH5. 0、加酶量4%,在该试验条件下低聚木糖得率为13. 5%。酶解液组分分析发现,其主要组分为木二糖和木三糖,只有少量的单糖,该结果有利于后续低聚木糖的纯化,符合低聚木糖制备的要求。     

顶青霉D15木聚糖酶提纯及性质研究

经硫酸铵分级沉淀,BiO-gelP60凝胶过滤,和DEAE离子交换层析,从顶青霉D_15的麦麸培养物中提纯,得到4个具有凝胶电泳纯的木聚糖酶组分D_(x1)、D_(x2)、2_(x3)、D_(x4)、SDS—凝胶电泳法测得各个组分的分子量是:D_(x1),76000;D_(x2),4300;D_(x3),32500;D_(x4),29500。圆盘等电聚焦电泳法测得4个组分的等电点分别为4.50、5.70、5.30和5.20。热处理60分钟,D_(x1)、D_(x2),D_(x3)、D_(x4)的半失活温度分别为51.7℃、50.8℃、54.6℃和55.6℃。D_(x1)、D_(x4)在pH3.6—6.6稳定,D_(x2)和D_(x3)则在pH2.4—6.0稳定。各组分的A_(280)(1cm(?)mg/m1)分别是:D_(x1),0.97;D_(x2),1.46;D_(x3),0.98和D_(x4),1.07。     

Bacillus pumilus阿拉伯呋喃糖苷酶的重组表达及水解木聚糖的研究

从短小芽孢杆菌中克隆阿拉伯呋喃糖苷酶基因xyn43并重组表达,有利于将该酶分离纯化后应用于其他半纤维素多糖的水解。该研究利用E.coli BL21表达系统对实验室克隆到的短小芽孢杆菌的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因xyn43进行重组表达并分析其酶学性质,将重组α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶Xyn43和来源于棒曲霉突变菌株的商业木聚糖酶联合作用于燕麦木聚糖。结果表明:以燕麦木聚糖为底物,重组α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶Xyn43的最适温度为50℃,最适p H为6.0。该酶在p H 5.0~10.0和45~55℃下较稳定。与木聚糖酶单独作用相比,重组Xyn43酶与商业木聚糖酶同时加入以及先用木聚糖酶水解后加入Xyn43酶,水解产物中的还原糖含量分别增加了16%和20%,木糖含量增加了35%和48%。该结果研究结果表明重组Xyn43酶能够和商业木聚糖酶协同降解燕麦木聚糖,提高水解效率,产生更多的木寡糖,阿拉伯糖和木糖。     

脱乙酰壳聚糖固定化宇佐美曲霉木聚糖酶及固定化酶的性质和应用(英文)

研究壳聚糖吸附和戊二醛交联对木聚糖酶固定化条件 .将酶液加入到经醋酸溶液处理过的脱乙酰壳聚糖的pH 4 8的悬液中 ,加入浓度为 0 3%～ 0 4 %的戊二醛溶液 ,室温下 ,8h后得到固定化酶 .固定化酶的半失活温度比游离酶高 ,由 5 1℃升至 71℃ ,Km 值由游离酶的 1 2mg ml增加到1 5mg ml ,最适反应温度也由 5 5℃增加到 71℃ ,而最适反应pH由 4 6下降到 3 8.该固定化木聚糖酶可用于制造低聚木糖 .经过 10次连续应用实验后 ,该固定化酶的活力保持 81%