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相似文献
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1.
观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌肌浆网Ca2+,Mg2+-ATPase基因(SERCA2a)转录调节的影响,评价DMP811对此效应的干预作用.6周龄雄性SD大鼠随机分为3组,每组6只.组1:生理盐水输注;组2:AngⅡ输注+DMP811管饲(3mg·d-1·kg-1);组3:AngⅡ输注(200ng·min-1·kg-1.1周后称其体重,取心脏并称重,提取心脏总RNA后采用Northernblot的方法检测SER-CA2a的转录水平,采用RT-PCR检测AngⅡ1型受体(AT1)mRNA水平.实验后,组3心重(CW)、心重/体重(C/B)、AT1受体转录水平均高于组1(分别增加4.7±0.4%,4.9±0.9%和24.7±3.5%;P<0.01),而SERCA2a基因转录水平显著低于组1(降低20.1±3.0%,P<0.01),并且SERCA2amRNA水平与AT1受体mRNA水平呈负相关(r=-0.74,P<0.01).AngⅡ导致的上述改变能被DMP811完全阻断.AngⅡ通过其Ⅰ型受体的介导,诱导了SERCA2a的转录下调  相似文献   

2.
条斑紫菜中R-藻红蛋白的生化特性   总被引:5,自引:0,他引:5  
条斑紫菜的R-藻红蛋白(R-PE),在CM-52柱上用含8mol/L脲的0.02mol/L乙酸铵缓冲液(pH=5.05)洗脱,观察到3条色带,经吸收光谱测定表明,它们分别是α、β、γ亚基。用SDS-PAGE测定的α、β和γ亚基分子量分别是17.0kd,18.0kd和31.7kd。R-PE中亚基的摩尔比是6α:6β:1γ。条斑紫菜的R-PE最稳定的聚集态分子量是229kd。各亚基的发色团含量:α亚基含2个藻红胆素(PEB),β亚基含1个PEB和0.5个藻尿胆素(PUB),γ亚基含2个PEB和3个PUB。结合R-PE和各亚基的氨基酸组成分析,条斑紫菜的R-PE亚基组成是(αβ)6γ。  相似文献   

3.
人红白血病细胞株(HEL细胞)中珠蛋白基因表达具有自己的特点。即只表达胚胎型的γ-珠蛋白基因而不表达成人型的β-珠蛋白基因。羟基脲是一种抑制DNA的小分子有机化合物。它在临床上被用来治疗地中海盆血和镰刀型贫血。我们的实验结果表明:胡羟基脲浓度增加HEL细胞增殖速度减慢。用常规RT-PCR方法和定量PCR分析证明,用羟基脲诱导HEL细胞后,β-珠蛋白基因表达增加,α-珠蛋白基因表达减少,而γ-珠蛋白  相似文献   

4.
以往研究表明,用羟基脲诱导人红白血病细胞(HELcell)后,能促进成年型β-珠蛋白基因表达,使HEL细胞趋向终末分化,本文试图进一步揭示羟基脲诱导HEL细胞分化的分子机制,GMSA与Western印迹分析结果显示,随着羟基脲诱导HEL细胞时间延长,细胞核内的GATA-1转录因子的含量增加,它与β-珠蛋白基因5旁侧DNA序列内一个正调控序列(PCR:-223~-194bp)以及人工合成的GATA/  相似文献   

5.
显微注射法制备转基因小鼠模型的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
将外源基因MT0LMP,pZipNeoSV(X1)-LMP及HLA-DRα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为8%,80%骸66.7%,它们的子一代及子二代(F2)基因中也均有外源基因整合,并且导入pZip-NeoSV9X1)-LMP基因后经反转录聚合酶链反应,检测mRNA发现有该基因的表达,说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光  相似文献   

6.
重组质粒pPIC9K-oLHαhCGβCTP的构建及在毕赤酵母中的表达   总被引:3,自引:0,他引:3  
将人绒毛膜促性腺激素β-亚基的羧基肽(CTP)与羊黄体生成素(oLH)的α-亚基融合,通过设计两对引物,用部分重叠聚合酶链式反应(overlappingPCR)的方法构建了羊的α亚基CTP嵌合体.这个嵌合体被克隆到pPIC9K质粒中,用电打孔方法转入巴氏毕赤酵母(Pichiapastoris),并获高效表达.表达蛋白经SDS-PAGE和Western印迹证明分子量约为28kD.2.5L发酵罐大量培养,产量可达2.0g/L.  相似文献   

7.
P物质对大鼠DRG神经元胞体膜的作用   总被引:17,自引:1,他引:17  
本文在大鼠DRG神经元标本上应用细胞内记录,以确定SP对DRG细胞的膜反应及其可能的离子机制。实验所测DRG细胞静息膜电位为-58.9±8.2mV(X±SE,n=81)。传导速度:A_(α/β)细胞为20.4±4.8m/s(X±SE),范围14.1-28.7m/s(47/60);Aδ及C类细胞为9.8±5.2m/s,范围1.2-13.7m/s(13/60)。浴槽滴加SP(10 ̄(-7)-3×10 ̄(-4)mol/L)在大多数细胞可引起明显的膜去极化反应(56/60)。少数细胞对SP无反应(4/60)。在SP去极化期间膜电导值有所增加,从平均值2.72×10 ̄(-8)mho增加24.6%(n=3)。所测逆转电位值在+40-+50mV之间(n=3)。浊流平衡液(BSS)中NaCl以氯化胆碱置代,或用含TTX(10 ̄(-5)mol/L)的BSS灌流,可使SP-去极化幅值大大减小但不能完全消除。而高(20mmol/L)和低(0mmol/L)Ca ̄(2+)的BSS灌流时,使SP-去极化幅值相应的增加和降低。用含10 ̄(-4)mol/LCd ̄(2+)及10 ̄(-2)mol/LTEA的BSS灌流,均使SP-去极化明显减小。  相似文献   

8.
硒对培养人胚肝细胞Ⅲ型前胶原,羟脯氨酸合成的影响   总被引:7,自引:0,他引:7  
原代培养人胚肝细胞经1.156×10 ̄(-7)mol/L硒预处理4h,加入20mmol/L四氟化碳作用20h,观察硒对其Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和羟脯氨酸(Hyp)生成的影响。结果培养液中PCⅢ水平、细胞内Hyp含量及细胞内外丙二醛(MDA)水平均降低,与未加硒对照组比较差别有显著性(P<0.01)。而硒谷腕甘肽过氧化物酶(Se-GSH-PX)活性则较对照组显著增高(P<0.001),且PCⅢ水平与Se-GSH-P_X/MDA比值呈负相关(r=-0.9156,P<0.01)。提示硒可提高Se-GSH-P_X/MDA比值,抑制脂质过氧化激发的肝细胞胶原合成。  相似文献   

9.
金属硫蛋白有α、β两个结构域(dom ain),其中α结构域优先结合Cd2+ 和Hg2+ .小鼠αα突变体在大肠杆菌中已经构建并得到表达,其转基因植株已得到,可在Cd300(300 μm ol/L)中生长.为了进一步提高外源基因在烟草中的表达量,首先用PCR 的方法设计引物,在基因翻译起始密码子ATG 附近加入植物偏爱的碱基组合AACAATG.另外,将该突变体基因插入具有双35 S(CaMV35S)强启动子的植物双元表达载体pGPTVd35S-BAR中,获得了带有αα突变体的植物双元表达载体.通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草NC89,获得了抗除草剂的转基因植株.经PCR-Southern 和蛋白Dot-blotting 检测,证明了αα突变体在烟草中的嵌合与表达.抗重金属实验证明转基因烟草可以在Cd400(400 μm ol/L)中生长.  相似文献   

10.
动脉平滑肌细胞(sm ooth m uscle cell,SMC)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块中的主要细胞,它的增殖在AS形成过程中极其重要.利用体外培养的人主动脉SMC,观察了天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein,N-HDL)及氧化修饰HDL(oxidized HDL,OX-HDL)对培养人主动脉SMC cyclin D1(细胞周期蛋白D1)基因转录表达的影响.结果表明:(1)N-HDL对SMCcyclin D1基因表达无影响(P> 0.05);(2)OX-HDL使SMCcyclin D1基因表达显著增强(P<0.01),其表达量随时间(2、12、24 h)延长而增加.上述结果表明,OX-HDL的致AS作用可能与其刺激SMCcyclin D1基因表达增加有关.  相似文献   

11.
通过培养的人主动脉平滑肌细胞(hASMC)及脐静脉内皮细胞(hUVEC),应用3H-TdR参入、Northernblot分析、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、放射免疫分析(RIA)、和紫外比色法等技术观察了人主动脉中硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)对hASMC和hUVECDNA合成的作用及对血小板源生长因子(PDGF)、PDGF受体、转化生长因子β(TGF-β)、内皮素-1(ET-1)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达和肾素-血管紧张系统(RAS)的影响,结果显示,HSPG明显抑制培养的hASMC基础的DNA合成(cpm值为:10385±3263vs,25541±6421,P<0.01)及外源性PDGF诱导的DNA合成(cpm值为:9878±1947vs.13481±44l0,P<0.05);抑制PDGFA链、TGF-Bp和ET-1mRNA表达,提高PDGFa和β受体mRNA的表达;显著降低hASMC培养液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度和血管紧张素转换酶(ACE)的活性,推测HSPG抑制PDGFA链、TGF-β及ET-1mRNA表达,降低ACE活性及AngⅡ浓度是其抑制hASMC增殖的重要机  相似文献   

12.
P物质(SP)能神经元及其轴突末梢和受体广泛分布于很多心血管中枢。外侧下丘脑含SP能神经元,外侧下丘脑投射的升压区内又存在SP能纤维及SP受体;因此本工作检验SP在外侧下丘脑升压反应中的作用。实验显示:(1)L-谷氨酸(Glu)兴奋外侧下丘脑的穹窿周围区(LH/PF)或将SP分别注入各LH投射区:蓝斑(LC)、臂旁核(NPB)或中脑导水管周围灰质(PAG)均引起升压反应;(2)[D-Pro2,D-Phe7,D-Trp9]-SP(SP拮抗剂)预先注入LC或PAG可使Glu兴奋LH/PF引起的升压反应减小,而注入NPB对该反应无明显影响;(3)双侧延髓头端腹外侧区(RVL)分别用酚妥拉明、心得安或阿托品预处理也可明显削弱该反应。结合我们以往的实验结果:RVL内的α-、β-、M-受体介导LC升压反应,α-和β-受体介导PAG-升压反应;本工作显示LH/PF可通过其SP能投射纤维作用于LC-RVL和PAG-RVL升压系统而实现其升压反应。  相似文献   

13.
采用DOCA硅胶管皮下埋入法建立大鼠心衰模型,从基因转录水平检测正常与心衰大鼠心肌组织中心肌收缩蛋白分子基因α-MHC、β-MHC、α-cardiacactin、α-skeletalactin表达的变化。结果显示:(1)心衰大鼠心肌收缩力指标dp/dtmax较正常大鼠明显降低(下降27.51%,P<0.01),(2)心衰大鼠与正常大鼠相比,心肌组织中α-MHC基因表达水平显著下降(降低21.43%,P<0.05),β-MHC基因表达水平显著升高(升高62.43%,P<0.01)、α-cardiacactin基因和α-skeletalactin基因表达水平未见明显改变,(3)α-MHCmRNA的含量与心肌收缩力指标dp/dtmax值之间存在正相关关系(r=0.4143,n=43,P<0.05),β-MHCmRNA的含量与dp/dtmax值之间存在负相关关系。(r=-0.3902,n=43,P<0.05)。这提示:心肌组织中MHC基因表达水平的改变是心衰时心肌收缩力降低的主要分子基础  相似文献   

14.
aroG基因编码的 3-脱氧-2-阿拉伯庚酮糖-7-磷酸合成酶(DAHP Synthetase DS)和 pheA基因编码的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶(Chorimate mutase/ Prephenate dehydratase,CW/PD)都是本丙氨酸合成途径中的关键酶,为了通过基因工程手段来增加本丙氨酸生物的产量,在利用高效的原核表达载体pBV22 0对pheA基因编码的CM/ PD 酶进行了表达的基础上,采用PCR方法扩增了抗反馈抑制的arcG基因,进行克隆表达,并与pheA基因串联,以PRPL-aroG-PL-pheA的形式,实现了2种酶基因在大肠杆菌中的表达, SDSPAGE 图谱显示了新增的43ku及35ku蛋白带,经酶活性测定DS、CM/PD酶的比活分别提高了 4.67倍、805/10.71倍。  相似文献   

15.
EB病毒(EBV)是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒.已往的研究表明,潜伏膜蛋白(LMP)基因是EBV最可能的致瘤基因.为制备LMP基因转基因小鼠,探讨LMP的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白-1(MT-1)基因调控区和LMP基因编码区的pBR322-MT-LMP质粒,并用电击法将该质粒与pKJ1-Neo质粒共转染人胃癌细胞株MGC,对MT-LMP基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究.结果表明:(1)两质粒共转染效率为86.7%;(2)PCR和Southern杂交分析显示,完整的MT-LMP基因已整合入转染的MGC细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,MT-LMP基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从1到19不等;(3)RT-PCR和Northern杂交分析证实,MT-LMP基因不仅在转染的MGC中能够转录,而且在10μmol/L镉诱导下,MT-LMP基因转录增强,平均增高约1.4倍.结果说明,在MT-1基因调控区指导下,LMP基因不但有mRNA水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备MT-LMP转基因小鼠  相似文献   

16.
IL—3对人红白血病细胞株珠蛋白基因表达的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
运用RT-PCR等方法研究了白细胞介素-3(IL-3)对人类红白血病细胞株(K562细胞)内珠蛋白基因表达的影响,结果显示,K562细胞在诱导前,不能表达β-珠蛋白基因,用IL-350u/ml诱导K562细胞3d和5d后,可检测到β珠蛋白基因的转录产物,而α珠蛋白基因和γ-珠蛋白基因在诱导前后无明显变化,同时,用苯肼当色细胞的方法检测到:K562细胞在诱导前蓝染细胞数极少,IL-3诱导K562细胞  相似文献   

17.
PIC-BE诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
β榄香烯吗素(PIC-BE)是抗癌新药β榄香烯的水溶性衍生物.采用人红白血病的多药耐药性(MDR)细胞株K562/ADM作为实验模型,观察PIC-BE对K562/ADM细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,并进而研究其对该细胞MDR的可能影响.结果显示:(1)K562/ADM细胞对ADM具有明显的抗性,与K562细胞相比,抗性倍数约为40倍,而两者对PIC-BE的IC50接近,无显著差异;(2)PIC-BE(10.0~30.0μg/ml)对K562/ADM细胞具有明显的生长抑制和凋亡诱导作用,两种作用的强度在一定的范围内均具药物浓度和作用时间依赖性;(3)低毒剂量PIC-BE(10.0μg/ml)与ADM(4.0μg/ml)联合应用,可显著增强ADM对该细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,升高细胞内ADM的浓度,降低该细胞对ADM的IC50,使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转.上述结果提示,PIC-BE不仅是一种有效的广谱抗肿瘤剂,而且也是一种有效的MDR逆转剂  相似文献   

18.
菠菜放氧的光系统Ⅱ(PSⅡ)核心复合物经0.8mol/L Tris(pH8.0)洗涤后,用温和的非离子去垢剂DM和高浓度的LiClO4增溶,再经DEAE-Toyopearl-650S离子交换柱层析分离,可得到PSⅡ天线组分中的叶绿素α/b结合蛋白(CP29)。SDS-PAGE显示一条30kD蛋白质带。根据Arnon法和Markwell法的结果表明,每个蛋白质分子结合有7~8个分子的叶绿素α和2~3  相似文献   

19.
Hu CF  Wang HD  Wang DA  Wang YP  Li CJ 《生理学报》1998,50(5):490-494
本研究观察了α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)对家兔白细胞介素-1β(IL-1β)发热效应及下丘脑组织腺苷环-磷酸(cAMP)含量的影响;同时观察了下丘本外培养过程中,α-MSH对IL-1β刺激下丘脑释放cAMP的影响。结果显示:α-MSH能显著降低IL-1β引起的体温升高(P〈0.05);同时抑制下丘脑组织cAMP含量的增高(P〈0.01)。IL-1β与下丘脑组织培养,其上清液的cAMP含量明显  相似文献   

20.
以逆转录病毒pLXSL为载体与人细胞介素2基因(IL-2)重组,用电穿孔技术将其重组子pLIL—2SN导入PA317细胞中,建立了逆转染病毒包装体系细胞PA317/pLIL—2SN。应用逆转录病毒包装体系细胞上清液去转染入肺腺癌细胞SPC—A1,经过20天含G418培液的筛选式培养,历经了50代的传代培养,获得了转白细胞介素2基因的人肺腺癌细胞株SPC-A1/IL-2。该细胞(SPC-A1/IL-2)经PCR技术验证外源性目的基因(IL-2gene)导入细胞内,且证明该细胞能表达IL—2基因(有IL-2的分泌)。我们研究的目的是对肿瘤细胞的特异性抗原修饰、对肿瘤细胞进行处理。试图建立肿瘤疫苗。  相似文献   

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