金鱼雌核发育单倍体胚胎血液循环障碍产生机制

为研究鱼类单倍体血液循环障碍产生机制,人工诱导获得金鱼(Carassius auratus)雌核发育单倍体胚胎并进行活体观察及邻联茴香胺染色,结果显示金鱼雌核发育单倍体胚胎存在不同程度的血液循环不良和红细胞生成缺陷.为进一步探讨其发生的分子机制,利用反义RNA整胚原位杂交技术比较分析了原始造血和血管发生关键基因scl(...     

杂色云芝组成型漆酶Ⅰ的纯化和底物专一性

采用合成培养基培养杂色云芝As5 4 8,从发酵液中纯化出一种组成型漆酶同功酶Ⅰ .经超滤浓缩 ,DEAE SephadexA 5 0离子交换层析 ,Bio gelP 10 0凝胶过滤纯化了该酶 .SDS PAGE分析发现 ,该酶分子量为 6 8kD ,薄层等电聚焦测得等电点为 3 5 .漆酶Ⅰ的底物范围较宽 ,以O2 为电子受体 ,可以氧化多种木素单体模型物 ,包括 2 ,6 二甲氧基酚 ,2 ,2′ 联氮 二 (3 乙基 苯并噻唑 6 磺酸 )(ABTS) ,愈创木酚 ,咖啡酸 ,阿魏酸和邻联茴香胺 .结果表明 ,该酶在木质素的生物降解中可能有重要的作用和应用价值 .     

一种小白菜叶细胞溶质铜锌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

<正> 超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的金属酶。有关植物SOD同工酶的研究文献报道较多,但对酶的纯化及性质研究报道较少。本文简要报道一种小白菜叶细胞溶质Cu·Zn-SOD的纯化及其性质。 材料为小白菜(Brassica chinensis L.),品种上海青。酶活力测定用本室改良的邻苯三酚自氧化法。蛋白质测定按文献[2]进行。酶纯化方法参照文献[3]。酶活性染色参照文     

低氧对斑马鱼胚胎发育和红细胞生成的抑制作用

目的 本文以斑马鱼(Danio rerio)为研究对象,探讨了低氧对早期胚胎发育、造血分化和红系分化的影响.方法 选取受精后12 h的斑马鱼胚胎,随机分为两组,以常氧组为对照组,低氧组为实验组,实时观察斑马鱼胚胎发育形态学的变化;通过联苯胺染色、邻联茴香胺染色、AO染色及瑞氏吉姆萨染色观察红细胞的生成及形态学变化;并通...     

我国稀有蔬菜介绍(2)

(续2002年第4期62页) 5.球茎茴香 球茎茴香是伞形花科茴香属中茴香的一个变种[Foeniculum vulgareMill, var .azoricum(Mill)Thell],又称结球茴香,为二年生草木植物.原产地中海沿岸及西亚,我国近年引入,栽培较少,在北京、上海、广东、云南、湖北和浙江等地发展种植.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳脂蛋白带的耐尔氏蓝染色法

目前聚丙烯酰胺凝胶电泳用考马斯亮蓝G或R染蛋白带、用过碘酸-Schiff试剂染糖蛋白带,均取得了满意的结果.至于用油红(OR)、苏丹黑(SB)对琼脂、醋酸纤维膜等凝胶中的脂蛋白带的染色鉴定是成功的,但对聚丙烯酰胺凝胶中的脂蛋白带的染色则不够满意.我们应用耐尔氏蓝[Nile’s blue] 染色法染盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的脂蛋白带取得了较好的结果.现介绍如下:     

真菌菌丝发酵液抗氧化活性检测

目的检测长期保存的食用真菌发酵液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。方法选取3株经实验室长期保存的食用真菌发酵液,采用邻苯三酚自氧化法测SOD酶活性;用二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接法测GSH-Px酶活性。结果3种发酵液中SOD酶活性和GSH-Px酶活性均为阳性。结论食用菌发酵液中不仅测得SOD,还含有GSH-Px,而且经长期保存仍有很强的酶活性。     

浙江天童披叶茴香群落种间联结性研究

通过基于2×2列联表的种间联结分析和x2检验,对浙江天童保存较好的披针叶茴香(Illicium lanceolatum AC.Smith)群落的种间联结性进行研究,以揭示披针叶茴香在群落中的地位及种间联结与群落稳定性的关系.结果表明:(1)群落内所有树种间总体呈显著正联结[W(49.607)>x20.0.5,32,(46.194)];群落内所有物种问显著正联结的种对数比例高于显著负联结的种对数比例,但无显著联结种对数的比例最大.这表明群落处于稳定共存的状态.(2)披针叶茴香与石楠、尖萼毛柃、苦槠、四川山矾等7种呈显著正关联,仅与枫香旱显著负联结,与多数种问联结性不显著;披针叶茼香与多数种的联结系数(AC)值人于0.5(74.3%),其中正联结种埘数明显多于负联结种埘数,表明披针叶茴香住群落中处于优势地位,与多数种群互利共存.此研究结果对制定该物种合适的就地保护措施、种群恢复以及人工规模栽培配置模式、生境的选择具有重要参考价值.     

改良芝加哥天蓝染色法在甲真菌检测中的应用

正甲真菌病是皮肤科常见的疾病之一,多数甲真病患者病情顽固,易交叉感染和复发,需要长期治疗,因此明确诊断尤其重要。直接镜检法及培养法为临床常用的真菌检查方法,培养法费时费力。镜检法主要有KOH湿片镜检和荧光镜检,KOH湿片镜检法因操作简单快捷、成本低廉,为实验室普遍采用,但该法阳性率不高[1-2]。荧光染色法检出率较高但需要荧光显微镜[3-4]。芝加哥天蓝染色法检测文献报道不多[5],本试验通过改良芝加哥天蓝染色法(即芝加哥天蓝甘油染色法)     

我国稀有疏菜介绍（2）

(续 2 0 0 2年第 4期 6 2页 )5　球茎茴香球茎茴香是伞形花科茴香属中茴香的一个变种[Foeniculum vulgare Mill.var.azoricum(Mill) Thell],又称结球茴香 ,为二年生草本植物。原产地中海沿岸及西亚 ,我国近年引入 ,栽培较少 ,在北京、上海、广东、云南、湖北和浙江等地发展种植。5 .1　营养价值及食用　球茎茴香以其柔嫩的球茎及嫩叶供食用 ,具有特殊的香辛味。嫩叶可以用于做馅 ,球茎可炒食、煮食、做汤、凉拌、腌渍或生食 ,风味独特 ,其汁液是西菜的重要调料 ,肥大的叶鞘也可用于炒食。球茎茴香的茎叶中含有大量的β-胡萝卜素、维生素 C…     

一种新的胆固醇染色方法的探讨

本文提出了一种新的胆固醇组织细胞化学染色方法。方法如下：１．块染法：将大小适宜的组织块浸入冰乙酸配制的０．５％的邻苯二甲醛溶液１２～２４ｈ,冰冻切片,滴加数滴浓硫酸显色后镜下观察。２．切片染色法：冰冻切片,滴加冰乙酸配制的０．５％邻苯二甲醛溶液数滴,作用１分钟后加浓硫酸显色。结果：组织和细胞中沉积的胆固醇被染成橙红色或紫红色。胆固醇含量越高,颜色越深越红。本法具有快捷、简便的特点,并能将细胞中的胆固醇显示出来     

翅果油树(Elaeagnus mollis)群落的种间分离

在野外对山西翅果油树群落31个样方内所有基径≥1cm的灌木绘制空间分布图,应用最近邻体法判定每个个体的最近邻体植株,然后采用N×N最近邻体列联表及其截表(2×2最近邻体列联表)的方法,研究翅果油树群落所有灌木的种间分离规律。结果表明:该群落中随机毗邻种对占绝大多数(80.94%),正分离种对较少(18.78%),负分离种对极少(0.28%)。呈负分离的极少数种对是一些个体较小的小灌木,它们多为群落的伴生种,具有相近的生境需求,较激烈的种间竞争可能导致它们随机或均匀分布,因此这些种对表现出负分离;较大的个体之间容易发生正分离,因为它们大多是群落的建群种或优势种,具有强的适应能力和竞争能力。从星座图上可清晰地看到种间分离在不同种之间存在一定的差异。另外,引入群落全面分离这一新概念,并应用χ2检验进行检验研究了翅果油树群落中所有物种的全面分离规律。结果表明,翅果油树群落内38个物种互相交错分布,是全面不分离的。     

Annexin V-FITC/DAPI细胞凋亡检测法

[目的]建立新的荧光染料DAPI与FITC标记Annexin V联合的细胞凋亡流式细胞术检测方法,以用于具有橙红色荧光的药物处理细胞的流式细胞术凋亡检测。[方法]以倒置荧光显微镜成像和流式细胞仪分别检测不同浓度DAPI对活和死细胞的标记作用。以荧光酶标仪检测不同浓度DAPI处理细胞的荧光信号,并进行相关性分析。以流式细胞术比较Annexin V-FITC/DAPI双染法与Annexin V-FITC/PI双染法对无色和含红/橙色荧光药物导致的细胞凋亡。[结果]DAPI标记可用于区分死细胞和活细胞,DAPI标记死细胞的荧光信号和DAPI的浓度呈线性正相关。Annexin V-FITC/DAPI双染法与Annexin V-FITC/PI双染法相比,二者对不含红橙色荧光药物诱导的多种肿瘤细胞的凋亡检测结果无显著差异。与Annexin V-FITC/PI双染法相比,Annexin V-FITC/DAPI双染法可有效避免药物自身荧光与PI通道重合导致的流式检测干扰。[结论]成功建立了新的Annexin V-FITC/DAPI双染法用于细胞凋亡的流式细胞术检测,该方法能够避免具有红、橙色荧光基团的药物对的干扰检测凋亡。     

早期先天梅毒几种实验室诊断方法的评价

目的评价梅毒螺旋体蛋白印迹试验(TPPA-IgM-WB)和梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对45例梅毒孕妇所产46例(1例双胞胎)新生儿运用血清IgM-WB试验、梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]和常规血清学方法(TPPA、RPR、FTA-ABS-IgM)检测,评价上述试验诊断方法在先天梅毒早期诊断中的作用。结果45例梅毒孕妇所生的新生儿中,按常规综合诊断方法21例确诊为先天梅毒,新生儿血清IgM蛋白印迹试验23例阳性,梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法24例阳性(21例常规方法诊断为先天梅毒)。30例作为对照的非梅毒孕妇及新生儿各项检查均为阴性。结论血清IgM蛋白印迹试验和梅毒螺旋体19(s)-IgM酶联免疫吸附法[TP-19(s)-IgM-ELISA]诊断先天梅毒具有较高的特异性和敏感性,结果显示可能高于现行的常规综合诊断方法的诊断价值。     

海南植物新资料(Ⅲ)

报道了海南植物区系新记录4种,分别为兜唇带叶兰[Taeniophyllum pusillum(Willd.)Seidenf.Ormerod]、灰背清风藤(Sabia discolor Dunn)、长脉清风藤(S.nervosa Chun ex Y.F.Wu)及茴香砂仁[Etlingera yunnanensis(T.L.WuS.J.Chen)R.M.Smith]。     

人染色体的银染与G带的复合显示方法

自Goodpastur。等^[3]建立染色体的银染色方 法以来,该技术已在细胞遗传学的各个领域得 到广泛的应用,被认为是研究18S-28S rDNA 的分布与转录的一种简易而有效的方法^[4]。银 染技术可以特异性地使核仁组织者区（NOR) 着色（称之Ag-NOR),其银染位置与染色体上 核糖体基因(rDNA）的分布相一致^[10]     

用终止剂改进超氧化物歧化酶邻苯三酚测活法

以二硫苏糖醇(DTT)或L-抗坏血酸(Vit C)为终止剂改进的经典邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.反应体系:50mmol/L邻苯三酚,pH8.20,总体积9ml,25℃,加一滴DTT(100mmol/L)或Vit C(5%),约50μl,终止自氧化反应.终止后,反应体系的420nm光吸收在lh内保持恒定.终止剂法的邻苯三酚自氧化率及酶活测定灵敏度与经典法相近,一个酶活单位相当于纯SOD 100μg/L.     

黄瓜Cu/Zn-SOD基因克隆及可溶性表达和纯化

[目的]克隆黄瓜Cu/Zn-SOD基因,并利用大肠杆菌进行可溶性表达、纯化及活性测定。[方法]采用Trizol法提取黄瓜表皮的总RNA,然后设计特异性引物,通过RT-PCR技术克隆获得黄瓜Cu/Zn-SOD基因。该基因与p GEX2T载体相连后,转化大肠杆菌BL21(DE3),摸索可溶性表达方法。利用GST亲和层析方法纯化目标蛋白,SOD酶活性测定采用邻苯三酚法。[结果]成功地克隆了全长为459 bp的黄瓜Cu/Zn-SOD基因,编码152个氨基酸。Protein Blast分析表明其结构域中分别包含Cu2+、Zn2+结合位点,为典型的Cu/Zn-SOD酶。目标蛋白可溶性表达条件是16℃、0. 1 mmol/L IPTG诱导20 h。SDS-PAGE分析表明GST亲和层析成功地获得重组黄瓜Cu/Zn-SOD。活性测定表明两次纯化的蛋白样品SOD酶活力分别为2 328. 9 U/m L、2 144. 7 U/m L。[结论]从黄瓜表皮中克隆获得Cu/Zn-SOD基因,该基因在大肠杆菌系统中获得可溶性表达,纯化后的重组蛋白具有较高的SOD酶活力。     

斑马鱼血栓模型的建立与冠心宁片的干预作用

目的采用3种诱导剂分别建立斑马鱼血栓模型,观察冠心宁片的抗血栓作用。方法分别采用1.5μmol/L苯肼、80μmol/L花生四烯酸和5 mg/L普纳替尼建立活体斑马鱼血栓模型,并用冠心宁片、氯吡格雷或阿司匹林等药物干预,观察尾静脉血栓形成情况,并用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞染色强度进行定量分析,计算预防血栓药效。结果苯肼、花生四烯酸和普纳替尼诱导后斑马鱼尾静脉血栓明显增加和心脏红细胞染色强度显著降低(P0.001),同时冠心宁片均能显著对抗这三种模型的血栓形成,其心脏红细胞染色强度和预防血栓药效均明显增加(P0.001),具有一定的剂量效应关系,IC50分别为44.32、138.5和459.5 mg/L。结论苯肼、花生四烯酸和普纳替尼均能建立不同形成机理的斑马鱼血栓模型,而冠心宁片具有明显的抗血栓作用,且其抗血栓机制存在多靶点效应。     

氢离子浓度对于淀银的影响

淀银法在细胞学、组织学和神经解剖学的制片技术方面应用得非常广泛,而且方法也极多,但关于这一类方法的理论还缺乏系统的研究,即使是个别的研究在文献上也记载得不多。 1928年Lawrence S.Kubie等曾对硝酸二氨银[Ag(NH_3)_2NO_3]、氢氧化二氨银[Ag(NH_3)_2OH]和碳酸二氨银[Ag(NH_3)_2CO_3]溶液的制备方法和制备时所起的各