免疫胶体金法检测TGFβ2,bFGF在IgAN肾组织内位点

目的探讨TGFβ2和bFGF在IgAN肾组织内存在的位点.方法采用免疫组织化学,胶体金标记和免疫电镜技术,对28例IgAN肾活检组织进行了TGFβ2和bFGF检测.结果 TGFβ2和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内,在其它部位有极少量的分布.结论免疫电镜技术和免疫组织化学技术联合应用,对抗原的精确定位具有重要的研究意义.TGFβ2和bFGF主要集中于肾小管上皮细胞的线粒体基质内的生物化学意义需要进一步研究.     

转化生长因子-β蛋白及mRNA基因在人类系膜增生性肾小球肾炎中的表达

目的：探讨转化生长因子－β（TGF－β）蛋白及mRNA基因在系膜增生性肾小球肾炎中的表达及其在发病中的作用。方法：采用常规病理,免疫组织化学及原位杂交方法对人系膜增生性肾小球肾炎组织进行染色,并经医学图像分析系统进行分析,结果：在正常对照组,TGF－β蛋白及TGF－β1mRNA小肾小管上皮细胞呈极弱表达,肾小球内TGF－β蛋白及mRNA未见阳性表达,在系膜增生肾小球肾炎组织中,TGF－β蛋白在肾近曲小管上皮细胞胞浆内呈强阳性表达,肾小球球囊壁及系膜区呈阳性,肾小球与肾小管阳性表达与正常对照组相比均具有显性差异（P＜0．01）,TGF－β1mRNA阳性表达位于肾近曲小管上皮细胞胞浆内和肾小球系膜区,肾小球和肾小管上皮细胞TGF－β1mRNA阳性表达与正常对照组相比差异也有显性（P＜0．01）。结论：系膜增生性肾小球炎时TGF－β蛋白及TGF－β1mRNARNA阳性表达与正常对照组相比差异也有显性（P＜0．01）。结论：系膜增生性肾小球肾炎时TGF－β蛋白及TGF－β1mRNA在肾小球与肾小管表达均显增高,进一步显示TGF－β在肾小球系膜细胞增生及肾小管间质纤维化中所起的重要作用。     

红腹锦鸡肾的组织结构及EGFR、TGF-β、AQP-2在肾脏中的表达

为了解红腹锦鸡肾脏的结构特征,观察表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子-β(TGF-β)、水通道蛋白-2(AQP-2)在肾脏中的表达情况,应用组织学方法及免疫组织化学方法,观察了5只红腹锦鸡肾脏的组织结构,检测了EGFR、TGF-β(TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3)、AQP-2在肾中的表达。结果表明:红腹锦鸡肾脏主要由许多肾单位、集合管和少量结缔组织组成。肾单位是肾脏功能结构的基本单位,它由一个肾小体和一个与其连接的上皮性肾小管构成。血管球由一团迂回盘曲的毛细血管丛构成,结构简单;肾小囊足细胞的突起与毛细血管内皮细胞及基膜紧密相贴,三者构成肾小体的滤过屏障;近端小管由单层立方上皮组成,上皮细胞游离面有许多微绒毛,细胞界限不明显,侧面有许多指状突起彼此交错,质膜内褶较少;远端小管上皮细胞基底面有丰富的质膜内褶;集合管上皮细胞有明细胞和暗细胞两种类型;近端小管上皮细胞呈EGFR、TGF-β免疫反应阳性,集合管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性。EGFR、TGF-β、AQP-2可能发挥着不同的功能,对肾单位的构筑、肾小管和集合管结构的稳定以及肾脏水的平衡等可能有重要的调节作用。     

TGF-βⅡ型受体在实验性IgA肾病肾小管的表达

用免疫组织化学方法研究了ＴＧＦ－βⅡ型受体在实验性ＩｇＡ肾病及正常小鼠肾内的表达。结果表明ＴＧＦ－βⅡ型受体在实验性ＩｇＡ肾病及正常小鼠肾内均有表达,但最明显的是ＩｇＡ肾病的肾小管。该结果提示ＩｇＡ肾病时,肾小管有可能在ＴＧＦ－β的作用下增加细胞外基质的合成,从而导致肾小管间质的纤维化     

TGF-βⅡ型受体mRNA及蛋白在人IgA肾病肾小管上皮的表达

为探讨转化生长因子-β（TGF-β）在人IgA肾病肾小管间质纤维化中的应用。本用原位杂交及免疫组织化学方法研究转化生长因子-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）mRNA和蛋白在肾小管上皮细胞的表达。结果表明：TGF-βRⅡmRNA定位于肾小管及集合管上皮细胞,TGF-βRⅡ蛋白定位于肾小管及集合管上皮细胞的基底面,腔面及侧面,或呈与基底膜相垂直的基底部纵纹出现于一些细胞的胞质内,肾小球系膜细胞也可见TGF-βRⅡmRNA及蛋白表达,但不如肾小管明显,以上结果提示肾小管和集合管上皮细胞的受体可与TGF-β特异性结合。TGF-β则通过自分泌作用促进小管上皮细胞合成与分泌ECM。过多的ECM在小管周围沉积;或TGF-β抑制ECM的降解,终将导致IgA肾病的肾小管间质纤维化。     

热休克反应中小鼠肾HSP70和乳酸脱氢酶同工酶表达变化的研究

用免疫组织化学和聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳方法研究了小鼠肾在热休克(46℃,30分钟)恢复期(4h和12h)HSP70的表达和乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的变化。结果表明:(1)HSP70主要定位于肾小管上皮细胞胞质中,细胞核内未见表达;(2)HSP70免疫阳性反应在肾髓质较肾皮质强,肾小管较肾小球强;(3)热休克诱导小鼠肾LDH同工酶活性增强。提示:LDH同工酶可能对细胞热耐受性的建立有重要作用。     

树脑β－内啡肽能神经元胞体和纤维分布的研究

本文用免疫组织化学方法和免疫电镜方法对１４只树脑β－内啡肽能神经元胞体和纤维的分布及其在细胞器的定位进行了研究。结果表明，本文首次报道在Ｂｒｏｃａ斜角带观察到β－内啡肽免疫反应阳性神经元胞体，电镜观察到β－内啡肽免疫反应物质定位于大颗粒囊泡内的小颗粒上和粗面内质网上。下丘脑弓状核及其附近区域观察到β－内啡肽免疫反应阳性神经元胞体。在室周区、室旁核、第３脑室室管膜下层及室管膜上皮细胞间、内侧基底下丘脑及其外侧区、正中隆起内带和外带部可见到β－内啡肽免疫反应阳性纤维和串珠状的膨体。对β－内啡肽的释放途径及其调节因素作了探讨。     

I型纤溶酶原激活物抑制物在紫癜肾炎肾组织中的表达

为研究I型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)在紫癜肾炎病理机制中的作用.采用免疫组织化学和原位杂交方法检测了23例紫癜肾炎患者肾组织中的PAI-1.结果证实:在正常肾组织内和紫癜肾炎肾组织内均可检测到PAI-1表达,PAI-1mRNA原位杂交阳性信号主要分布于血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞内,紫癜肾炎肾小球内有紫兰色阳性信号,且强度与肾小球内细胞的增生程度有关.     

整合素相关激酶在糖尿病肾病的表达及其意义

目的探讨整合素相关激酶(Integrin-Linked Kinase,ILK)在糖尿病肾病患者肾组织中的表达及其意义.方法对3例正常肾组织,14例糖尿病肾病患者肾穿刺活检标本,应用免疫组织化学方法检测ILK和FN在肾组织的阳性表达强度,并作图像分析处理.结果在正常肾组织,ILK主要表达于肾小球脏层上皮细胞,系膜细胞和小管上皮细胞呈弱表达.在糖尿病肾病,ILK表达于肾小球脏层上皮细胞和系膜细胞,在萎缩变性的肾小管上皮细胞表达增强.在肾小球结节硬化时,ILK表达明显减少.此外,ILK和FN的表达量在糖尿病肾病早、中期成正相关(P<0.001),在糖尿病肾病晚期成负相关(P<0.05).结论 ILK在糖尿病肾病肾组织中表达量显著增加,并与FN的表达有一定的相关性,说明其可能通过促进细胞外基质FN等的积聚,在糖尿病肾小球硬化过程中发挥重要作用.     

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物在紫癜肾炎肾组织中的表达

为研究Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）在紫癜肾炎病理机制中的作用。采用免疫组织化学和原位杂交方法检测了23例紫癜肾炎患肾组织中的PAI-1。结果证实,在正常肾组织内和紫癜肾炎肾组织蚋均可检测到PAI-1表达,PAI-1mRNA原位杂交阳性信号主要分布于血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞内,紫癜肾炎肾小球内有紫兰色阳性信号,且强度与肾小球内细胞的增生程度有关。     

大鼠肺纤维化血小板源性生长因子、血小板源性生长因子—受体、转化生长因子—β、转化生长因子—β受体的表达

采用免疫组织化学方法观察实验性大鼠肺纤维化肺组织内转化生长因子（TGF－β）及其受体（TGF－βR）和血小板源性生长因子（PDGF）及其受体（PDGF－R）表达的变化。发现：（1）实验早期（1－3天）,TGF－β主要由单核巨噬细胞为主的炎症细胞所产生;7天以后直至实验结束（28天）,TGF－β阳性细胞主要为增生的间质细胞,TGF－βR的变化与之同步。（2）实验1－7天,病灶内单核巨噬细胞细胞PDGF染色呈强阳性反应,少量间质细胞呈阳性反应;14天以后,病灶内PDGF阳性的单核巨噬细胞减少,阳性间质细胞亦减少。PDGF－R的变化与PDGF相似。结果提示PDGF的主要来源是巨噬细胞,在肺纤维化的早、中期发挥重要作用,而TGF－β主要由间质细胞自身产生,在肺纤维化的中、后期发挥重要作用,促细胞外基质合成,使肺纤维化进行性进展。     

NDRG2在人胚胎组织中的表达分布特点

本文旨在研究NDRG2在不同胎龄人胚胎组织中的表达水平及细胞定位。利用RT-PCR和Western blot研究NDRG2 mRNA和蛋白在胎心、肺、肝和肾中的表达水平,免疫组织化学分析NDRG2蛋白在多种胚胎组织中的分布特点。结果表明,NDRG2在胚胎组织中的表达随胚龄的延长而增加。NDRG2 mRNA和蛋白在胎心和肺中的变化一致;在胎肝中mRNA表达低而蛋白表达高,在胎肾中则相反。NDRG2蛋白阳性反应产物存在于细胞胞浆,见于小肠绒毛上皮细胞、结肠上皮细胞、皮肤表层细胞及毛囊、肺内小气道内衬上皮细胞、肝细胞、心肌细胞、胸腺小体、肾小管上皮细胞。结果提示,NDRG2蛋白可能不是一个组织特异性蛋白,并在组织和器官的形成中起作用。     

甘草甜素对肾脏转化生长因子β1作用的实验研究

目的:探讨甘草甜素对肾小球硬化模型中转化生长因子β1(TGFβ1)作用.方法:采用尾静脉注射阿霉素方法建立大鼠肾小球硬化模型.实验随机分为模型组、治疗组和对照组.检测各组第4和8周各项指标的变化.包括①24h尿蛋白定量,血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胆固醇(Cho)和白蛋白(Alb).②各组肾皮质进行光镜等病理学检测.③应用免疫组织化学方法检测肾组织内转化生长因子β1(TGFβ1)蛋白质的表达.④采用标准曲线法进行荧光定量PCR检测肾组织内TGFβ1 mRNA的表达.结果:①治疗组与模型组相比较,24h尿蛋白定量、BUN、Scr、Cho和Alb均有不同程度改善(p<0.05).②肾皮质病理学改变肾小球硬化程度治疗组明显轻于模型组.③肾组织内TGFβ1蛋白和mRNA表达治疗组与模型组比较表达峰值均有不同程度降低(p<0.05).结论:从蛋白和mRNA水平同时证实甘草甜素对TGFβ1蛋白和mRNA的表达有明显的抑制作用,对大鼠肾小球硬化有早期保护作用,为临床应用提供了依据.     

高脂喂养大鼠肾小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA的表达和细胞外基质沉积

目的:探讨高脂喂养对大鼠肾脏小管上皮细胞SREBP-1、TGF-β1、α-SMA表达和细胞外基质(ECM)的影响。方法:高脂饲料喂养大鼠12周后,油红O检测肾脏脂质沉积,Masson染色检测肾小管间质细胞外基质沉积,免疫组化、Western blot和原位杂交检测SREBP-1、TGF-β1、α-SMA和FN的表达。结果:高脂喂养后大鼠体重明显增加,血糖、甘油三酯和胰岛素均升高,油红O检测显示大鼠肾小管上皮细胞内出现明显脂滴。SREBP-1蛋白和mRNA在肾小管上皮细胞内表达,高脂组高于正常对照组,分别是正常组的1.88倍和1.85倍;TGF-β1和α-SMA也定位于肾小管上皮细胞胞浆并出现上调。Masson染色显示高脂喂养大鼠肾间质ECM沉积增多,纤维粘连蛋白FN检测也显示模型组表达强于对照组。结论:高脂饮食喂养可能通过上调肾脏小管上皮细胞SREBP-1表达使细胞内脂滴沉积,并进一步诱导TGF-β1、α-SMA合成而导致细胞外基质堆积。     

Tenascin，β-catenin，TGF—β1在胃癌中的表达及意义

目的：探讨胃癌组织中Tenascin、β—catenin、TGF－β1的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测70例胃癌组织和20例癌旁正常组织中Tenascin、β-catenin、TGF—β1的表达。结果：①Tenascin主要表达于胃癌组织中癌相关纤维母细胞的胞质,且与胃癌的Lauren分型、分化程度、临床分期、淋巴结转移关系显著（P〈0．05）;②β－catenin在胃癌的异常表达与胃癌的Lauren分型及分化程度关系显著（P〈0．05）;③TGF—β1在胃癌组织中主要表达于肿瘤细胞的胞质,其表达强度与胃癌的临床分期、浸润深度及淋巴结转移显著相关（P〈0．05）;④Tenascin与β—catenin在胃癌中的表达呈负相关（r=－0．505,P〈0．05）。结论：胃癌组织中Tenascin、β—catenin、TGF—β1蛋白的表达与肿瘤的侵袭、转移关系密切,β-catenin对间质中Tenascin的聚集具有抑制效应。     

肾缺血再灌注损伤小鼠肾内纤维化和胆绿素还原酶阳性巨噬细胞增加

目的 通过研究肾缺血再灌注损伤时肾组织中胆绿素还原酶（biliverdin reductase, BVR）的表达与巨噬细胞的关系,为进一步研究BVR与巨噬细胞在肾脏纤维化中的作用提供依据。方法 16只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组（Sham组）和肾脏缺血再灌注组（ischemia-reperfusion injury,IRI组）,取肾组织切片行PAS、Masson、Sirius red染色,免疫组织化学检测α-SMA、PDGF-β和Collagen IV的表达,RT-PCR检测α-SMA、FN、Collagen I和KIM-1 mRNA表达,流式细胞术和免疫荧光染色检测BVR与巨噬细胞的关系。结果 在缺血再灌注小鼠损伤肾组织内,PAS染色发现IRI组肾小球硬化明显,系膜细胞增生,肾小管管腔扩张,小管上皮细胞肿胀或发生空泡变性、细胞脱落、基膜裸露。Masson和Sirius Red染色发现肾间质胶原纤维表达明显增加;免疫组织化学染色显示IRI组α-SMA、PDGF-β和collagen IV免疫反应性增强,RTPCR检测显示IRI组α-SMA、FN、collagen I和KIM-...     

肾缺血再灌注损伤大鼠肾内AQP2表达水平降低

目的了解肾脏缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury, IRI)时肾内水通道蛋白-2(aquaporin 2, AQP2)免疫组织化学表达特点。方法建立大鼠右侧肾IRI 45min模型,随机分为缺血再灌注1d、3d、5d、7d组和假手术1d组,检测尿常规、尿比重、尿素氮、血肌酐;HE染色观察肾脏病理形态学变化;免疫组织化学染色观察IRI时肾脏AQP2表达的变化。结果 IRI后,大鼠出现尿量增多,尿比重降低,血肌酐、尿素氮均增加;HE染色示右侧肾充血,水肿以及肾小管上皮细胞肿胀、坏死和脱落;免疫组织化学染色显示AQP2免疫反应性在右肾降低,左肾增强。肾组织的变化在第7d基本恢复正常。结论肾IRI时肾内AQP2表达降低,可能与IRI后尿量增多、尿比重降低相关。     

小鼠成长过程中肾、肝、小肠碱性磷酸酶活性变化及组织细胞定位

利用比色、酶的原位复性电泳、组织化学和电镜酶化学等方法,观察了小鼠出生后的成长过程中肝、肾和小肠内碱性磷酸酶(AKP)的活性变化及组织细胞定位.结果表明,在小鼠成长过程中,3种器官内的AKP活性依次为小肠肾肝,小肠和肝AKP活性先上升后下降,肾内酶活性呈上升趋势.AKP活性在小肠主要分布在小肠绒毛上皮细胞的细胞膜、细胞浆、微绒毛和微绒毛表面的糖衣上,在肝主要分布住胆小管,在肾主要分布在皮质肾小管,尤以近曲小管的刷状缘、近曲小管上皮细胞膜和符种管状结构之间的腔隙内分布较多.小鼠成长过程中肝内共出现3条AKP同工酶带,小肠内出现2条,肾内出现3条,各同工酶活性随着小鼠的生长发育发生不同的变化.     

NDRG2在糖尿病小鼠和正常小鼠胰岛、心肌和肾中的表达

目的该实验通过对糖尿病小鼠和正常小鼠胰岛、心肌和肾中NDRG2表达的研究,旨在阐明NDRG2在糖尿病小鼠和正常小鼠中的表达差异,为进一步明确分化相关基因NDRG2的功能提供依据。方法分离糖尿病小鼠和正常小鼠的胰腺、心肌和肾,并制备成石蜡切片,用抗NDRG2单克隆抗体,进行免疫组织化学染色（ABC法）,从蛋白质水平观察NDRG2的表达情况。统计阳性细胞数,用统计学方法,判断糖尿病小鼠和正常小鼠中NDRG2的表达有无差别。结果免疫组织化学染色显示：①胰腺中NDRG2特异表达在胰岛细胞胞浆,相对正常小鼠而言Ⅱ型糖尿病小鼠胰岛中NDRG2表达略增强,Ⅰ型糖尿病小鼠胰岛中NDRG2表达略减弱;②心脏中NDRG2特异表达在心肌细胞胞浆,Ⅱ型糖尿病小鼠心肌细胞中NDRG2分布局限,正常小鼠心肌细胞中NDRG2分布均匀;③肾脏中NDRG2特异表达在肾小管上皮细胞的细胞浆,Ⅰ型糖尿病小鼠中肾小管上皮细胞出现空泡样变性。结论NDRG2在糖尿病小鼠和正常小鼠胰腺、心肌和肾中的表达差异提示NDRG2作为分化相关基因可能参与糖尿病的致病机制。     

TGF—β与移植免疫

转化生长因子－β(transforming growth facter-β,TGF－β）是一种对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要调节作用的多肽。在器官移植中TGF－β主要是一种负的免疫调节剂。本综述简要介绍了TGF－β与器官移植免疫排斥反应的关系。