补料速度对工程菌生长和产物表达的影响研究

通过研究各培养阶段补料速度对温敏启动子控制的rIL-2工程菌E.coliK802(pLY-4)培养密度和rIL-2表达的影响,发现在各培养阶段控制不同的补料速度有利于提高菌密度和rIL-2表达,缩短培养周期。确定了rIL-2工程菌高密度培养方案,三批重复实验,平均菌密度为58OD_(600);菌干重18.0g/L,rIL-2表达水平为42.4％。     

rIL-2工程菌诱导阶段细胞再循环培养的研究

为了减少rIL-2工程菌高密度培养时乙酸的积累,在诱导阶段对该工程菌进行细胞再循环培养的研究,比较了细胞再循环补料液、pH、细胞循环培养时间段对工程菌的生长及rIL-2表达的影响。结果表明在菌密度D_(600)为50时,细胞再循环补料液中酵母抽提物与胰蛋白胨浓度为发酵培养基的5倍就能满足rIL-2表达的需求,同时选择诱导后4～6h之间的细胞再循环培养能有效地防止乙酸的过高积累并减少营养物质的损失,有利于rIL-2的表达。根据以上研究结果得到了rIL-2工程菌诱导阶段细胞再循环培养方法,使得在诱导前菌密度D_(600)为50左右时rIL-2的表达水平约为40％。     

生长速度对β干扰素工程菌稳定性和产物表达的影响研究

为了研究发酵培养阶段生长速度对重组人干扰素β(hIFN-β)工程菌稳定性、菌体密度和干扰素表达的影响,采用日本LE．Marubishi MSJ-50L发酵罐,在发酵过程中于诱导后通过控制不同的补料速度,检测低和高生长速度及发酵结束后菌体密度、稳定性和重组人干扰素β的表达量。诱导后维持低生长速度,发酵结束后平均密度A600值为7．52,表达量达20．7％,质粒稳定率好,达到91％,粗制干扰素收获2．37克;维持高生长速度,发酵结束后平均密度A600值达20．57,而表达量降为4．13％,质粒稳定率降为27％,粗制干扰素收获仅为0．59克。诱导后生长速度对工程菌稳定性和产物表达有明显影响。     

碳源和IPTG诱导对工程菌MM2表达CTB的影响

研究了不同碳源如葡萄糖、乳酸和乙酸以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。     

比生长速率和氮源对毕赤酵母生产重组鲈鱼生长激素的影响

对毕赤酵母胞内表达重组鲈鱼生长激素(rljGH)的发酵罐上生产进行了研究.建立了指数流加甲醇的策略并考察了不同比生长速率对rljGH生产的影响.结果表明,随着比生长速率的增加,平均比生产速率相应增加,但是胞内持续积累rljGH的时间减少.最大比rljGH产量(0.58 mg/g WCW)在比生长速率为0.029/h时获得.进一步考察了在诱导阶段添加硫酸铵、蛋白胨和酵母抽提物的影响.结果表明,添加硫酸铵和蛋白胨对于rljGH生产没有显著影响;添加2.5 g/L酵母抽提物有助于胞内rljGH的积累,并使胞内积累持续时间由17 h增加到23 h,提高了发酵稳定性.     

不同培养基及组成对2种小球藻生长和油脂的影响

研究了4种培养基及组成对蛋白核小球藻F-9和普通小球藻HYS-2的生长、油脂积累和脂肪酸组成的影响。结果发现knop、Provasoli、f/2、MAV 4种培养基中,f/2培养基更有利于小球藻的快速生长,而MAV培养基更适合油脂积累。在f/2培养基中F-9和HYS-2相对生长速率分别为0.156和0.171,培养9 d细胞干重为0.188 g/L和0.195 g/L。而在MAV培养基中F-9油脂含量最高可达19.67%,HYS-2油脂含量最高为21.91%,脂肪酸最高分别占干重的5.11%和8.71%。N/P为16∶1时小球藻生长最快,培养9 d后F-9和HYS-2的相对生长速率分别为0.23和0.239,最终细胞干重分别为0.107 g/L和0.143 g/L。而F-9和HYS-2在N/P为1∶1条件下积累油脂和脂肪酸含量最高,总脂含量分别占干重的为20.40%和27.39%,总脂肪酸占藻粉干重的含量为12.52%和16.94%。     

基因工程菌培养过程中乙酸的积累及其对工程菌生长和产物表达的影响

在rIL-2工程菌K802(pLY-4)高密度培养中发现培养液中有大量代谢副产物乙酸积累,乙酸的存在对工程菌的生长和产物的表达均有明显的抑制作用,这种抑制作用是制约工程菌高密度培养的重要因素,为了减小这种抑制作用,研究了培养基pH与乙酸抑制作用的关系,发现适当提高培养基pH值,能有效地减小乙酸的抑制作用;高密度培养时,提高培养基的pH后,虽然仍有大量乙酸积累,但产物的表达水平和菌密度都有一定的提高     

光照对螺旋藻生长速率的影响

螺旋藻是一种经济价值很高的微藻。针对螺旋藻的高光效性,在不同波长LED灯照射下,研究光照对螺旋藻生长速率的影响。结果表明,在螺旋藻的养殖中,经过红光(650-675 nm)、绿光(522-532 nm)和蓝光(465-475 nm)处理后,获得最大螺旋藻的干物质含量分别为1.232 g/L、1.195 g/L、0.742 g/L;红光处理过的螺旋藻生长速度最快,所得的干物质含量比对照样增加了66.04%。     

霍乱毒素B亚单位工程菌MM2在含乳酸培养基中的高表达

确定了工程菌MM2中霍乱毒素B亚单位(CTB)在含乳酸培养基中的高表达方案。采用两阶段控制培养温度(30℃→37℃)可提高CTB产量4倍,提高后期pH值(72→84)可提高CTB比表达水平214倍,中间补加乙酸钠可提高CTB产量65%。在5L发酵罐培养菌密度OD₆₀₀达30,CTB产量达1867mg/L,产物在培养液中以多聚体形式存在,具有抗原性。     

花生壳培养基对杏鲍菇菌丝生长的影响

以农业废料花生壳为主要原料设计不同配方,筛选适宜杏鲍菇菌丝生长的培养基及培养料.结果表明,母种培养基以m(花生壳):m(马铃薯)=3:1的配方生长最快,平均生长速度为4.53 mm/d,长势最旺盛;原种及栽培种培养料按m(棉籽壳):m(花生壳)=1:1的配方菌丝生长最快而健壮,生长速度可达5.43 mm/d.因此,在花...     

花生壳培养基对香菇菌丝生长的影响

为探讨花生壳对香菇菌丝生长的影响情况,此实验采用固体平板和液体摇瓶培养的方法,研究了花生壳在不同浓度下对香菇菌丝生长的影响。通过测定各处理组的菌丝干重、胞内多糖等生长参数,结果发现香菇在添加适当浓度的花生壳培养基上培养均能促进菌丝的生长,尤其是在30g/L培养基中生长促进效果最明显。因此,花生壳农业废料可为今后废物利用提供技术参考。     

培养基对透明颤菌生长的影响

目的:为了从环境中分离透明颤菌(Vitreoscilla),对培养基和生长条件进行了优化。方法:采用富集培养的方法,对透明颤菌生长的培养基成份进行了筛选试验。结果:在培养温度为32±2℃,50ml/500ml三角瓶,pH 7.8,醋酸钠浓度为0.02%,摇床转速120r/min条件下,透明颤菌生长最佳培养基是:酵母粉0.7%,蛋白胨0.3%。结论:透明颤菌在上述培养基中生长12h可达到高峰。     

不同培养基对冬虫夏草菌丝生长的影响

不同培养基对3个来源不同的冬虫夏草菌菌丝生长影响的研究结果表明,在不同培养基上,各菌株之间在菌丝萌发时间、40d菌落直径和菌落形态上表现出一定的差异。同时筛选到的最优培养基比已报道培养基的菌落生长速度快2～3倍,且菌丝为白色、粗壮,菌丝质量较优。     

环境因子对金藻生长和噬藻速率的影响

在微囊藻的大量培养过程中分离到一株能够快速吞噬微囊藻的鞭毛虫-金藻Poterioochromonas sp.,其具有混和营养的特点。研究以人工培养的铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa FACHB469)为饵料,研究了起始饵料浓度、光强、温度和pH等环境因子对Poterioochromonas sp.生长和吞噬饵料速率的影响。结果显示:当无饵料时,金藻的自养生长与光强和温度相关,而与pH无相关性。喂食饵料能显著促进金藻的生长,其吞噬速率和生长速率与起始饵料浓度相关性强,可分别用Michaelis-Menten方程和Monod方程拟合。提供相同量的饵料时,金藻的生长与光强相关性显著,而与温度和pH的相关性不显著;其吞噬速率与pH呈现负相关关系,而与光强和温度相关性不显著。除了在不同pH下的生长外,混合营养时金藻的生长速率与吞噬速率之间存在显著的正相关关系。实验表明适于Poterioochromonas sp.生存并吞噬微囊藻的环境条件较广,这也是进一步探索利用Poterioochromonas sp.控制微囊藻水华的前提。       

培养基成分对东北红豆杉细胞生长和紫杉醇产量的影响

在东北红豆杉（taxus cuspidate)细胞培养物的基本培养基中加入30mg.L^-12.4-D,可以提高细胞培养物的生长量,其相对最高生长量可以达到85．999mgFW/gFW.d;培养基中加入活性炭粉末1g.L^-1,可以克服植物细胞生长过程中的褐化问题;适当种类及含量的生长调节剂的加入：6－BA0．5mg.L^-1＋KTmg.L^-1,可以使植物细胞合成和积累相对较多的紫杉醇（Taxol).     

培养基成分对东北红豆杉细胞生长和紫杉醇产量的影响

在东北红豆杉(taxuscuspidate)细胞培养物的基本培养基中加入30mg@L-12.4-D,可以提高细胞培养物的生长量,其相对最高生长量可以达到85.999mgFW/gFW@d;培养基中加入活性炭粉末lg@L-1,可以克服植物细胞生长过程中的褐化问题;适当种类及含量的生长调节剂的加入:6-BA0.5mg@L-1+KT2mg@L-1,可以使植物细胞合成和积累相对较多的紫杉醇(Taxol)。 Abstract:The growth quantity of Taxus Cuspidate's cell culture materials can be increased and the highest quantity will amount to 85.999 mgFW/g·FW·d·if We put 2,4-D (30rog·L-1 )into the basic cuhure medium of it; The difficulty of foxiness during the plants growing process can be overcome if we add acive carbon powder(lgL-1)into the culture medium; The plant cell can synthetize and gather more Taxol comparatively with the addition kf proper and amount of growth regulators:6-BA(0.5mg·L-1) + KT2.